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抗p185^(erbB2)单抗的制备及其生物学活性 被引量：2
1
作者 韩梅 姜北海 +1 位作者 吴健 寿成超 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期154-158,共5页
目的 :制备抗 p185 erbB2 单克隆抗体 ,并研究其对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的结合及生长抑制作用。为后续工作奠定基础。方法 :用NIH3T3 erbB2细胞免疫BALB/c小鼠 ,制备抗p185 erbB2 单克隆抗体。经ELISA、免疫沉淀、Westernblot及免... 目的 :制备抗 p185 erbB2 单克隆抗体 ,并研究其对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的结合及生长抑制作用。为后续工作奠定基础。方法 :用NIH3T3 erbB2细胞免疫BALB/c小鼠 ,制备抗p185 erbB2 单克隆抗体。经ELISA、免疫沉淀、Westernblot及免疫组化检测单抗的结合特异性。并用MTT比色法检测所获抗体对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的生长抑制作用。结果 :经筛选获得 1株对表达 p185 erbB2 细胞反应阳性 ,不表达 p185 erbB2 细胞反应阴性的单克隆抗体1H3 ;免疫沉淀、Westernblot均表明 1H3可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;免疫组化结果显示 1H3对c erbB2阳性的乳癌组织呈特异性着染 ;MTT比色法检测表明 1H3对不同的 p185 erbB2 阳性肿瘤细胞均有不同程度的生长抑制作用。结论 :单克隆抗体 1H3能与p185 erbB2 特异结合 ,并可不同程度地抑制NIH3T3 erbB2或SKBR3细胞的生长 ,除可应用于临床对 p185 erbB2 的检测外 ,尚具有肿瘤生物治疗的潜在应用开发价值。 展开更多
关键词 p185^erbB2 抗体 单克隆/生物合成 抗体 肿瘤/生物合成 肿瘤细胞 培养的/药物作用
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短肽库中血管内皮细胞生长因子受体Flt-1拮抗剂筛选条件的改进 被引量：1
2
作者 安平 寿成超 +1 位作者 孟麟 董志伟 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期398-401,共4页
目的 :改进噬菌体肽库的筛选条件 ,提高筛选阳性率及阳性克隆重复性。使血管内皮细胞生长因子受体Flt 1拮抗剂的筛选更为有效。方法 :通过对血管内皮细胞生长因子受体Flt 1的原核表达产物的变性复性处理 ,获得相对纯化的可溶性Flt 1受... 目的 :改进噬菌体肽库的筛选条件 ,提高筛选阳性率及阳性克隆重复性。使血管内皮细胞生长因子受体Flt 1拮抗剂的筛选更为有效。方法 :通过对血管内皮细胞生长因子受体Flt 1的原核表达产物的变性复性处理 ,获得相对纯化的可溶性Flt 1受体。将该可溶性受体固相化 ,对噬菌体表达 12肽库进行 4～ 5轮Bio panning后 ,挑取单个噬菌斑制备高滴度噬菌体上清。用ELISA法初步鉴定各噬菌体克隆与sFlt 1的特异性结合并测定阳性克隆的DNA顺序。在Bio panning过程中增加非特异性蛋白的预吸附 ,并减少输入噬菌体数量 ,再次筛选短肽库。结果 :经过第一次筛选 ,获得了一系列具有一定重复性与同源性的噬菌体克隆。改进筛选条件后 ,筛选阳性率由2 %提高到 8.3% ,阳性克隆的重复性也得到显著提高。该高重复阳性克隆的氨基酸顺序与前一次筛选获得的阳性克隆有较高同源性。结论 :Bio panning条件的改进提高了筛选效率 ,为不纯蛋白筛选短肽库积累了经验 ,并为血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长因子 短肽库 受体拮抗剂 噬菌体 VEGF受体
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