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TALEN构建Fndc5基因敲除小鼠及初步分析 被引量：1
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作者 吴子环 胡雄兵 +8 位作者 毛凤仪 王超 张彬 庄峰锋 胡克平 孙晓波 刘晓 匡世焕 金文 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期37-41,47,共6页
目的通过构建Fndc5基因敲除小鼠,为后续的研究提供动物模型。方法运用TALEN技术在Fndc5基因FNIII domain中造成缺失突变,并通过测序进行基因型鉴定。通过配对建立稳定遗传系并在mRNA和DNA水平鉴定出生小鼠基因型;对不同年龄段出生小鼠... 目的通过构建Fndc5基因敲除小鼠,为后续的研究提供动物模型。方法运用TALEN技术在Fndc5基因FNIII domain中造成缺失突变,并通过测序进行基因型鉴定。通过配对建立稳定遗传系并在mRNA和DNA水平鉴定出生小鼠基因型;对不同年龄段出生小鼠进行体重、血糖分析;通过q PCR确定Fndc5在肾脏、肝脏、大脑、肌肉、心脏等组织中的表达情况。结果成功构建并鉴定得到4种不同的Fndc5基因敲除小鼠品系;不同年龄段出生小鼠体重、血糖未见显著性差异;确定Fndc5在肌肉、心脏等组织中高表达。结论本实验在国际上成功构建了Fndc5基因敲除小鼠,并进行了初步分析,为深入研究Fndc5基因在体内中的功能提供了动物模型。 展开更多
关键词 骨骼肌 Fndc5基因 纤维连接蛋白 TALEN
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蜡样芽孢杆菌W-3木聚糖酶xynA基因原核表达及其酶学性质研究
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作者 闫丽欢 肖遥 +4 位作者 赵健 赵锦鹏 薛智权 荆小院 冯焱 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4114-4124,共11页
【目的】克隆蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)W-3菌株的木聚糖酶基因xynA并进行生物信息学分析,探究其异源表达及酶学特性。【方法】采用同源扩增法克隆xynA基因,构建原核表达载体pCola-xynA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行异源表... 【目的】克隆蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)W-3菌株的木聚糖酶基因xynA并进行生物信息学分析,探究其异源表达及酶学特性。【方法】采用同源扩增法克隆xynA基因,构建原核表达载体pCola-xynA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行异源表达,通过镍柱亲和层析分离纯化并通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白,利用在线软件对xynA蛋白进行生物信息学分析。以榉木木聚糖为底物探究xynA在不同温度、不同pH条件下的酶学性质。【结果】xynA基因全长642 bp,含1个完整的开放阅读框,编码213个氨基酸。序列比对结果显示,xynA和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)亚种FZB42木聚糖酶(AJD80562.1)相似性为96%,和类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)NBRC15307木聚糖酶(AAZ17386.1)及高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)同家族木聚糖酶(WP-007407578.1)相似性为94%。xynA蛋白N-端含1个信号肽,理论等电点为9.42,分子质量为23.3 ku,蛋白结构稳定,为亲水性蛋白;存在5个潜在的糖基化位点、38个磷酸化位点,属于糖苷水解酶11家族。xynA酶活性为733.826 U/mg,其最适温度为70℃,最适pH为9.0。在60~80℃、pH 8.0~11.0时均具有较好的稳定性,80℃保温1 h可保留50.3%酶活,70℃和pH 9.0条件下保温1 h仍保留94.63%酶活。【结论】本研究成功从天然微生物蜡样芽孢杆菌W-3菌株中克隆木聚糖酶xynA基因,其编码蛋白为稳定的亲水蛋白,属于糖苷水解酶11家族。xynA表现出耐热、耐碱、高酶活特性,对温度、pH适应范围较广。研究结果为xynA开发利用奠定理论基础。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 木聚糖酶 原核表达 生物信息学 酶学性质
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