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重组人白血病抑制因子在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量：1
1
作者 王晓雯 郗雪艳 +5 位作者 李小璐 关欣 郭阳 宋伟 杜伯雨 卫荣华 《湖北医药学院学报》 CAS 2017年第3期214-220,共7页
目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)。方法:构建p ET-30a-rh LIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白... 目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)。方法:构建p ET-30a-rh LIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白。最后对所获目的蛋白活性进行测定,并对其N端和C端的完整性分别应用Edman测序法以及质谱法进行鉴定。结果:通过三步柱层析以及中间的内毒素去除步骤可使无标签rh LIF获得纯化,检测结果提示所获目的蛋白内毒素水平<1 EU/μg,其活性同市售商品化LIF产品一致,Edman测序结果提示少部分目的蛋白N端存在甲硫氨酸修饰,质谱检测结果表明所获目的蛋白C端完整性较好。结论:建立了一种新的重组人源白血病抑制因子表达和纯化的方法,本方法不需利用标签蛋白,并可有效降低所获蛋白中内毒素水平,所获rh LIF蛋白可用于干细胞培养以及相关生物学研究。 展开更多
关键词 人白血病抑制因子 表达 纯化 大肠杆菌
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蛋白酶体新亚基PSMA8的多克隆抗体制备及鉴定
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作者 杜伯雨 郭阳 宋伟 《湖北医药学院学报》 CAS 2015年第4期327-332,共6页
目的:制备一种特异的抗PSMA8的多克隆抗体,并可用于PSMA8的鉴定。方法:通过序列比对,找出特异的抗原序列,经过原核表达制备抗原,免疫大鼠后利用Ni+-NTA柱和分子筛层析制备高纯度、高特异的PSMA8多克隆抗体。结果:所制备的抗体可以同PSMA... 目的:制备一种特异的抗PSMA8的多克隆抗体,并可用于PSMA8的鉴定。方法:通过序列比对,找出特异的抗原序列,经过原核表达制备抗原,免疫大鼠后利用Ni+-NTA柱和分子筛层析制备高纯度、高特异的PSMA8多克隆抗体。结果:所制备的抗体可以同PSMA8蛋白特异性结合,此外,PSMA8特异的表达于睾丸组织和精子细胞,而在其他组织和细胞中,包括精原细胞和精母细胞中不表达。结论:本研究制备了高纯度高特异的PSMA8多克隆抗体,可以有效的支持在睾丸组织或精子细胞中对PSMA8功能的研究,并已经成功的应用于动物组织中PSMA8蛋白的免疫组织化学检测。 展开更多
关键词 PSMA8 蛋白酶体 睾丸
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