目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确...目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞球中存在肿瘤干细胞。采用FCM法和双色细胞免疫荧光法检测ESA和单抗15B7识别的抗原蛋白在Bel7402-V3细胞中的表达情况。采用无血清悬浮培养法观察单抗15B7作用对Bel7402-V3细胞球自我更新能力的影响,细胞计数试剂盒-8法检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性的影响,Transwell实验检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞侵袭能力的影响。结果 :Bel7402-V3细胞经无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26染色阳性的肿瘤干细胞。单抗15B7识别的抗原分子能与ESA一起共定位于Bel7402-V3细胞。单抗15B7能显著抑制Bel7402-V3细胞在无血清培养液中成球(P<0.05),抑制率达32.4%;单抗15B7能够有效降低Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性(P<0.05),实验组与未经单抗15B7处理的对照组半数抑制浓度分别为0.14μg/m L和0.27μg/m L;此外,单抗15B7亦能抑制Bel7402-V3细胞的侵袭能力(P<0.05),抑制率达30.7%。结论 :杂交瘤单抗15B7在体外能够显著抑制ESA阳性肝癌干细胞的自我更新、耐药和侵袭能力,推测其可作为肝癌干细胞靶向治疗的有价值的候选抗体药物。展开更多
文摘蛋白质组学研究中常使用含高浓度去垢剂的缓冲液以提高蛋白提取效率,但这种缓冲液会对下游蛋白质定量、酶解、质谱分析等步骤造成干扰。短胶法可用于含高浓度去垢剂样品的预处理,文中进一步评价了短胶法(Short gel)用于含高去垢剂的蛋白样品定量和预处理的效果。使用牛血清白蛋白作为标准蛋白分析了短胶法定量的线性范围,结果发现短胶法定量的线性范围为1-8μg,提示可对这一范围内的样品蛋白进行定量检测。对标准蛋白定量的线性度达到0.999,且重复性好,不容易受到蛋白表达模式变化的影响,结果可靠。短胶法定量的蛋白可通过胶内酶解,直接进行液相色谱-质谱联用(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析,质谱信号较好。结果提示直接用短胶法预处理含高浓度去垢剂的蛋白样品,值得在蛋白质组学研究中推广。
