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乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)蛋白质分析 被引量:3
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作者 李爱灵 赵玉秀 +2 位作者 梁宏阳 赵硕 王辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期393-395,共3页
流行性乙型脑炎国际上统称为日本脑炎(Japanese encephalitis),简称乙脑,是由黄病毒科虫媒病毒——乙脑病毒引起的一种侵害中枢神经系统的传染病.接种乙脑疫苗是预防流行性乙型脑炎的有效措施.目前国内使用的乙脑疫苗有减毒活疫苗和... 流行性乙型脑炎国际上统称为日本脑炎(Japanese encephalitis),简称乙脑,是由黄病毒科虫媒病毒——乙脑病毒引起的一种侵害中枢神经系统的传染病.接种乙脑疫苗是预防流行性乙型脑炎的有效措施.目前国内使用的乙脑疫苗有减毒活疫苗和灭活疫苗[1].本文应用液相色谱-电喷雾质谱联用(LC/ ESI-MS)方法就本公司生产的乙型脑炎灭活疫苗(Vero 细胞)蛋白质成分进行了初步分析,以期对该类疫苗的研发及生产有所参考,同时希望能在疫苗类蛋白质成分分析及基因工程疫苗的构建方面提供方法学上的参考. 展开更多
关键词 乙型脑炎灭活疫苗 VERO细胞 蛋白质分析 液相色谱-电喷雾质谱联用 流行性乙型脑炎 乙脑疫苗 中枢神经系统 基因工程疫苗
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第1代百日咳毒素国家参考品的标定 被引量:4
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作者 卫辰 晁哲 +10 位作者 王丽婵 吴燕 张霖阳 潘殊男 方习静 张立志 刘翠 王魁 程之铭 骆鹏 马霄 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期853-857,共5页
目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞... 目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。 展开更多
关键词 百日咳毒素 CHO簇集试验 参考品
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疫苗用氢氧化铝佐剂的质量研究 被引量:1
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作者 张霖阳 王玲 +7 位作者 盛玉博 池俊 杜磊 李世慧 何亚丽 潘殊男 肖詹蓉 杨冰 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第6期274-278,共5页
目的 建立与国际标准一致的氢氧化铝佐剂的质量标准。方法 制备10批疫苗用氢氧化铝佐剂,按照中国药典2015年版进行外观、氯化钠含量、渗透压摩尔浓度、氢氧化铝含量、pH值的检测。参照欧洲药典第8版开展溶解度和内毒素含量检测,鉴... 目的 建立与国际标准一致的氢氧化铝佐剂的质量标准。方法 制备10批疫苗用氢氧化铝佐剂,按照中国药典2015年版进行外观、氯化钠含量、渗透压摩尔浓度、氢氧化铝含量、pH值的检测。参照欧洲药典第8版开展溶解度和内毒素含量检测,鉴别试验、沉降试验、无菌检查、牛血清白蛋白吸附力试验以及氯化物、硫酸盐、硝酸盐、铵盐、铁盐、砷盐、重金属等7项杂质13个检测项目的测定。参照丹麦铝佐剂对粒径、比表面积、等电点、黏度和抗原吸附率进行检测。对检定结果进行统计分析,初步确定与欧洲药典相关联的质量标准。结果 10批氢氧化铝佐剂的外观、无菌试验、内毒素含量、溶解度、鉴别试验、沉降试验、牛血清白蛋白吸附力、杂质和抗原吸附率的检测结果均合格。佐剂的氯化钠含量均值为1.01%,渗透压摩尔浓度均值为309 mOsmol/kg,氢氧化铝含量均值为4.7 mg/ml;佐剂灭菌前、后的pH值均值分别为6.3、5.8;佐剂的粒径DV50全部〈10 μm;平均比表面积为1 386 m^2/kg,等电点为10.3,黏度为1.2 mPa·s。检测结果均符合质控合格范围。结论 初步建立了符合欧洲药典第8版的氢氧化铝佐剂质量控制标准。 展开更多
关键词 疫苗 氢氧化铝 佐剂 免疫 质量控制
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麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗的研制 被引量:2
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作者 刘晓琳 张安宁 +7 位作者 陈晓梅 史晓莉 张建军 李瓯 李磊 申亚楠 李玉华 于立芹 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第5期209-213,共5页
目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞... 目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞或人胚肺二倍体细胞2BS株中制备高滴度疫苗病毒原液.观察4种原液按不同比例稀释配制后病毒的滴度变化和相互干扰现象,确定MMRV疫苗中4种原液的配制比例,并筛选适宜保护剂,建立最佳冻干工艺.同时,建立MMRV联合减毒活疫苗的检定方法.采用t检验对结果进行比较.结果 选择最佳配制比例、保护剂和冻干工艺制备出连续多批MMRV疫苗,按国家药典要求检定全部合格.其中连续3批疫苗经国家检定机构检定合格:麻疹病毒基础滴度和37℃放置7d后的滴度分别≥3.9和≥3.5 lg半数细胞培养感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)/ml,腮腺炎病毒≥5.0和≥4.7 lgCCID50/ml,风疹病毒≥5.0和≥4.8 lgCCID50/ml,水痘病毒≥4.5和≥4.4 lg噬斑形成单位/ml.用建立的方法检测MMRV疫苗,结果4种病毒滴度实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t值为0.149~1.838,P值均>0.05).结论 建立了稳定、可行的MMRV疫苗生产工艺和检定方法. 展开更多
关键词 麻疹疫苗 腮腺炎疫苗 风疹疫苗 水痘疫苗 疫苗 联合
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麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度测定方法研究
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作者 陈晓梅 李淑云 +8 位作者 张安宁 于立芹 史晓莉 李瓯 张建军 赵炜炜 李磊 申亚楠 刘晓琳 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第2期59-62,共4页
目的建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubellaandvaricella,MMRV)联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。方法首先通过比较温度,确定中和条件,再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力... 目的建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubellaandvaricella,MMRV)联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。方法首先通过比较温度,确定中和条件,再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力,确定每种抗血清的使用浓度。观察抗血清对2BS细胞生长的影响和对水痘病毒的干扰作用。采用t检验对结果进行比较。结果与37℃1h相比,4℃1h的中和条件能准确反映MMRV疫苗中水痘病毒的滴度水平(t=6.7082,P〈0.01)。3种抗血清(麻疹1:80、腮腺炎1:40、风疹1:40)混合后对2BS细胞生长无影响,对不同滴度水痘病毒无干扰(高滴度t=0.4472,P〉0.05;中滴度t=O.9045,P〉O.05;低滴度t=0.3536,P〉0.05)。使用建立的方法测定MMRV疫苗中水痘病毒滴度,实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t=1.7533,P〉0.05)。结论建立了MMRV联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。 展开更多
关键词 水痘疫苗 麻疹-腮腺炎-风疹疫苗 疫苗 联合
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高效价腮腺炎病毒抗血清的制备及检定 被引量:1
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作者 张安宁 刘晓琳 +3 位作者 李淑云 陈晓梅 于立芹 史晓莉 《微生物学免疫学进展》 2016年第4期26-30,共5页
目的制备高效价腮腺炎病毒抗血清,用于麻腮、麻腮风、麻腮风水痘联合疫苗的病毒滴定及鉴别试验等指标的检定。方法将腮腺炎病毒ME株接种于SPF鸡胚尿囊腔中,优化病毒制备工艺条件,收获高滴度病毒原液,制备免疫抗原;采用皮下多点注射法免... 目的制备高效价腮腺炎病毒抗血清,用于麻腮、麻腮风、麻腮风水痘联合疫苗的病毒滴定及鉴别试验等指标的检定。方法将腮腺炎病毒ME株接种于SPF鸡胚尿囊腔中,优化病毒制备工艺条件,收获高滴度病毒原液,制备免疫抗原;采用皮下多点注射法免疫SPF豚鼠,制备抗血清并对其进行中和效价、中和能力以及特异性干扰试验的检定。结果 ME株腮腺炎病毒以102倍稀释接种鸡胚尿囊腔,培养5 d经-20℃预冷1 h后,收获的尿囊液病毒滴度最高;以其免疫豚鼠所制备的抗血清平均中和效价达1∶3 276,高于鸡抗腮腺炎病毒血清;当豚鼠抗腮腺炎病毒血清稀释度为1∶320时,可完全中和1 000 CCID50/m L的腮腺炎病毒;豚鼠抗腮腺炎病毒血清对Vero细胞、RK-13细胞及2BS细胞的生长,均未见干扰及细胞毒性作用;豚鼠抗腮腺炎病毒血清对异种病毒(麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒)滴度的干扰试验显示,各病毒滴度其试验组与对照组的差值均<0.50 lg CCID50/m L,表明豚鼠抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒的滴度均无干扰;豚鼠抗腮腺炎病毒血清及鸡抗腮腺炎病毒血清对麻腮风水痘联合疫苗各病毒滴度均无干扰,且两种抗血清之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用优化后的病毒制备工艺条件及免疫方法,可获得较高效价的抗腮腺炎病毒血清,经检定和验证,均符合含腮腺炎成分疫苗检定抗血清使用要求。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 免疫血清 联合疫苗 中和效价 鉴别试验
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配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的各病毒原液最适滴度研究 被引量:1
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作者 陈晓梅 于立芹 +6 位作者 史晓莉 李瓯 刘晓琳 李淑云 张建军 赵炜炜 张安宁 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第4期157-161,共5页
目的研究配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles-mumps-rubella-varicellacombined attenuated live vaccine,MMRV)的各病毒原液最适滴度。方法将麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液分别冻干,检测各冻干单价疫苗的滴度和... 目的研究配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles-mumps-rubella-varicellacombined attenuated live vaccine,MMRV)的各病毒原液最适滴度。方法将麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液分别冻干,检测各冻干单价疫苗的滴度和热稳定性,观察病毒滴度的下降幅度。将4种病毒原液按不同配比配制MMRV,检测配制前后的各病毒滴度,摸索配制MMRV的最佳配比。按确认的最佳配比配制MMRV并冻干,检测冻干MMRV的各病毒滴度和热稳定性,确定配制MMRV的各病毒原液最适滴度。结果各病毒原液冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.4 lgCCID50/ml和0.5lgPFU/ml;各冻干单价疫苗37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒的滴度分别下降约0.6、0.5、0.5lg CCID50/ml和0.5lgPFU/ml。在配制MMRV过程中,仅腮腺炎病毒可能在一定程度上受到其他病毒的干扰。按确认的最佳配比配制的MMRV冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.5、0.6、0.5lgCCID50/ml和0.6lgPFU/ml;冻干MMRV于37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.5lgCCIDsc,/ml和0.5lgPFU/ml。结论在按确认的最佳配比配制MMRV时,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液的滴度需分别≥6.0、≥6.5、≥6.0lgCCID50/ml和≥5.3lgPFU/ml。 展开更多
关键词 麻疹-腮腺炎-风疹疫苗 水痘疫苗 疫苗 联合 冷冻干燥法 滴度
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