Coltivirus新成员的分离和鉴定 被引量：22

1

作者 宋立亭 陈伯权 赵子江 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期7-10,共4页

１９９１年，在甘肃和北京地区采集蚊子，从中分离到１０株病毒，该类病毒在Ｃ６／３６，ＢＨＫ－２１及Ｖｅｒｏ细胞上可出现病变，使乳鼠发病、致死，抵抗乙醚和５－溴脱氧尿苷，电镜观察为球形、无包膜，直径约６２．７±３．１... １９９１年，在甘肃和北京地区采集蚊子，从中分离到１０株病毒，该类病毒在Ｃ６／３６，ＢＨＫ－２１及Ｖｅｒｏ细胞上可出现病变，使乳鼠发病、致死，抵抗乙醚和５－溴脱氧尿苷，电镜观察为球形、无包膜，直径约６２．７±３．１３ｎｍ。ＰＡＧＥ示该类病毒ＲＮＡ为１２节段，分为４个不同的电泳带型，均与云南分离株不同。交互中和试验和交互补体结合试验表明，中国分离株之间抗原性有变异。中国分离株与Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属已知成员科罗拉多蜱热病毒、加利福尼亚分离株Ｓ６－１４－０３及德国分离株Ｅｙａｃｈ有血清学交叉反应（１：４～１：８），但血清型明显不同，因而，中国分离株当属Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属的新的成员。 展开更多

关键词 呼肠病毒科 分离 RNA病毒 鉴定 Coltivirus属

全文增补中

人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下症 被引量：12

2

作者 宋纯 宋一民 +4 位作者 武林枫 马本江 段秀庆 潘尚哈 宋春芳 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期690-692,共3页

目的　探讨人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能减退症的临床意义。　方法　将培养的人胚甲状旁腺细胞在B超引导下移植到 6例甲状旁腺功能减退症患者的肾周围脂脂囊中。应用放射免疫方法测定患者术前、术后血中甲状旁腺激素 (PTH)及... 目的　探讨人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能减退症的临床意义。　方法　将培养的人胚甲状旁腺细胞在B超引导下移植到 6例甲状旁腺功能减退症患者的肾周围脂脂囊中。应用放射免疫方法测定患者术前、术后血中甲状旁腺激素 (PTH)及钙水平 ,并进行自身对照 ,对疗效进行评价。　结果　 6例患者在接受人胚甲状旁腺细胞移植前 ,血钙及PTH平均水平分别为 (1 6 3±0 12 )mmol/L及 (1 36± 0 2 1)ng/L ;接受移植 3d后分别为 (1 77± 0 2 2 )mmol/L及 (9 5 3± 2 2 1)ng/L ,两者差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;6d后达正常水平 ,临床症状逐渐减轻至消失 ;术后观察 9～ 12个月病情保持稳定。 展开更多

关键词 胚胎 甲状旁腺功能减退症 甲状旁腺细胞移植

原文传递

猪型流感病毒血凝素基因的核苷酸全序列分析 被引量：11

3

作者 郭元吉 王敏 RGWebster 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期11-14,共4页

对我国大陆首次从猪群中分离到的猪型（Ｈ１Ｎ１）流感病毒血凝素（ＨＡ）基因核苷酸全序列进行了测定，其长度为１７７８ｂｐ，共编码５６６个氨基酸，其中信号区１７个，ＨＡ１区３２６个，多肽连接区１个，ＨＡ２区２２２个。与Ａ／... 对我国大陆首次从猪群中分离到的猪型（Ｈ１Ｎ１）流感病毒血凝素（ＨＡ）基因核苷酸全序列进行了测定，其长度为１７７８ｂｐ，共编码５６６个氨基酸，其中信号区１７个，ＨＡ１区３２６个，多肽连接区１个，ＨＡ２区２２２个。与Ａ／ＮＪ／１１／７６（Ｈ１Ｎ１）毒株ＨＡ蛋白分子上氨基酸序列相比，其同源性为９４．５％，而ＨＡ１和ＨＡ２区的同源性分别为９３．６％和９７．７％。同时在ＨＡ１区的第２７６个位点上多１个糖基化点，然而其余的包括２个重叠的糖基化点均相同。 展开更多

关键词 猪型 流感病毒 核苷酸类 血凝素 序列分析

全文增补中

H1N2新亚型流感病毒神经氨酸酶基因来源的进一步研究 被引量：3

4

作者 郑宏勇 郭忠明 +3 位作者 王敏 诸葛亚辉 刘凌雁 郭元吉 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期15-18,共4页

对流感病毒Ｈ１Ｎ２亚型重组株Ａ／哈防／１／８８、Ａ／哈防／１２／９２以及Ｈ３Ｎ２亚型病毒株Ａ／雅防／２／８７、Ａ／京防／５７／８９和Ａ／粤防／１／９２神经氨酸酶（ＮＡ）基因核苷酸全序列的测定，进一步弄清了Ａ／哈防／１... 对流感病毒Ｈ１Ｎ２亚型重组株Ａ／哈防／１／８８、Ａ／哈防／１２／９２以及Ｈ３Ｎ２亚型病毒株Ａ／雅防／２／８７、Ａ／京防／５７／８９和Ａ／粤防／１／９２神经氨酸酶（ＮＡ）基因核苷酸全序列的测定，进一步弄清了Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基因确来自当时人群中流行的Ｈ３Ｎ２亚型病毒株，很可能是来自Ａ／雅防／２／８７类病毒株；而Ａ／哈防／１２／９２病毒株的ＮＡ基因可能是与Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基因来自同一祖先。同时发现，流感病毒的ＮＡ基因在进化过程中，其分子结构相当稳定，表明其变异不仅受人群免疫压力影响较小，同时还受酶活性要求的约束；Ａ／粤防／１／９２毒株的ＮＡ基因的３＇末端非编码区少一个腺嘌呤（Ａ），指出了Ｈ３Ｎ２亚型病毒株ＮＡ基因的进化可能有２个途径。 展开更多

关键词 流感病毒 H1N2新亚型 病毒株 神经氨酸酶 基因

全文增补中

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达 被引量：3

5

作者 王晓洁 谭文杰 +1 位作者 丛旭 郭可謇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1997年第4期340-343,共4页

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得... 为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 痘苗病毒 基因表达

原文传递

4型腺病毒载体的构建和β－半乳糖苷酶基因的表达 被引量：3

6

作者 蒋国桥 张炳华 洪涛 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期1-6,共6页

以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段（７０．５－８３．０基因图谱单位）克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４（７０．５－８３）质粒，质粒ｐＡｄ４（７０．５－８３）和ｐＡｄ４Ｃ１－２５... 以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段（７０．５－８３．０基因图谱单位）克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４（７０．５－８３）质粒，质粒ｐＡｄ４（７０．５－８３）和ｐＡｄ４Ｃ１－２５经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失Ｅ３区的重组质粒。聚合酶链反应（ＰＣＲ）法获得ｐｏｌｙ（Ａ），构建约８００ｂＰ腺病毒晚期表达盒，在所构建的腺病毒重组质粒Ｅ３缺失区或Ｅ４与ＩＴＲ间插入表达盒，得到可同时表达２个或２个以上外源基因和保留了Ｅ３区编码分子量为１９３００糖蛋白基因的３种Ａｄ４载体。将ｌａｃＺ基因插入载体表达区，与Ｂｅｌｌ消化的Ａｄ４ＤＮＡＡ片段共转染Ａ５４９细胞，ＯＮＰＧ法检测证实所构建的载体和表达盒功能良好。本项工作对于在国内研究口服活疫苗及开展基因治疗均具有重要意义。 展开更多

关键词 4型腺病毒 载体 Β-半乳糖苷酶 基因表达 疫苗

全文增补中

汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达 被引量：2

7

作者 邱建明 石晓宏 +2 位作者 杭长寿 宋干 姚树元 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1995年第4期332-336,共5页

采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶... 采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。 展开更多

关键词 汉坦病毒 聚合酶链反应 基因表达 DNA 痘苗病毒

原文传递

近来我国马群中呼吸道疾病流行的病因学研究

8

作者 郭元吉 王敏 +8 位作者 李万坤 郭忠明 崔正瀛 秦光明 黄雅 陈馥琼 李英霞 许凤琴 张国盛 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第2期99-102,共4页

通过病因学，血清学和流行病学研究，弄清了近期我国马群中类流感疾病流行的病因为马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流感病毒。采用多克隆和单克隆抗体对分离物进行抗原性分析，结果提示，从我国马群中分离到的流感病毒株是马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流... 通过病因学，血清学和流行病学研究，弄清了近期我国马群中类流感疾病流行的病因为马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流感病毒。采用多克隆和单克隆抗体对分离物进行抗原性分析，结果提示，从我国马群中分离到的流感病毒株是马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流感病毒，它绝然不同于过去我们发现的禽的Ｈ３Ｎ８流感病毒。估计它是近期内从国外马群传入我国。 展开更多

关键词 呼吸道疾病 病因学 马疾病

原文传递

从噬菌体抗体库筛选获得中和性人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体 被引量：5

9

作者 曹经瑗 梁米芳 +4 位作者 郭可謇 孟庆玲 尚丹 李德新 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期313-316,共4页

目的　研制人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体 ,为预防甲型肝炎病毒感染提供有效的方法。方法　采用噬菌体表面展示技术 ,从一名甲型肝炎恢复期病人的抗凝血中分离淋巴细胞 ,提取总RNA逆转录后 ,用一组人IgGFab特异性引物扩增。 结果　克... 目的　研制人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体 ,为预防甲型肝炎病毒感染提供有效的方法。方法　采用噬菌体表面展示技术 ,从一名甲型肝炎恢复期病人的抗凝血中分离淋巴细胞 ,提取总RNA逆转录后 ,用一组人IgGFab特异性引物扩增。 结果　克隆和表达了 8株人源抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因 ,经ELISA检测为特异性人抗甲型肝炎病毒Fab段抗体。结论　该 8株人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体都能与具有中和活性的鼠抗甲型肝炎病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,选其中的 2株做体外中和实验 。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 免疫球蛋白类Fab 噬菌体抗体库

原文传递

免疫斑点法检测特异性EBV潜伏膜蛋白2合成肽的细胞毒T淋巴细胞 被引量：5

10

作者 周玲 姚家伟 +4 位作者 陈志坚 周微雅 李德锐 A.Rickinon 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期384-385,共2页

关键词 EB病毒 EBV-LMP2 细胞毒T淋巴细胞

原文传递

融合蛋白Epo-Tpo(C)的表达及初步活性检测 被引量：3

11

作者 汪治清 侯云德 +2 位作者 杨翔 佟玉品 杨新科 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期5-8,共4页

目的　进一步研究促血小板生成素Tpo的功能 ,探讨新型Epo的可能性。 方法　构建了融合蛋白Epo Tpo(C)的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达融合蛋白 ,染料亲合柱Blue SepharoseCL 6B初步纯化 ,网织红细胞计数法体内测活并测定了体内半衰期... 目的　进一步研究促血小板生成素Tpo的功能 ,探讨新型Epo的可能性。 方法　构建了融合蛋白Epo Tpo(C)的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达融合蛋白 ,染料亲合柱Blue SepharoseCL 6B初步纯化 ,网织红细胞计数法体内测活并测定了体内半衰期和融合蛋白对大鼠肾衰模型的疗效。结果　初步纯化的融合蛋白体内活性比ELISA结果高 2 0 % ,半衰期为 12h ,比标准Epo长近5 0 % ,对大鼠肾衰模型有良好的疗效。结论　Tpo富糖基化的C端结构域能显著延长Epo的半衰期 ,融合蛋白Epo Tpo(C) 展开更多

关键词 血小板生成素 红细胞生成素 融合蛋白质类 真核表达

原文传递

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性 被引量：2

12

作者 孙宪锋 董小平 +1 位作者 周伟 洪涛 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期305-308,共4页

目的　鉴定朊蛋白 (PrP)基因转录启动子位置。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)扩增人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列 ,序列鉴定后插入CAT报道质粒pBL CAT6 ,分别转染HeLa、COS7和Sh sy5y细胞系 ,检测CAT表达值 ;提取三种细胞蛋白 ,以条带移... 目的　鉴定朊蛋白 (PrP)基因转录启动子位置。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)扩增人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列 ,序列鉴定后插入CAT报道质粒pBL CAT6 ,分别转染HeLa、COS7和Sh sy5y细胞系 ,检测CAT表达值 ;提取三种细胞蛋白 ,以条带移动实验检测细胞转录激活因子SP1含量。结果　人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列为GC富含 ,带有多个SP1可能性结合位点 ,但无明显TATA盒 ;瞬时转染结果显示这段序列可诱导 2～ 3倍的CAT表达增强 ;定量移动条带实验证明HeLa细胞中含有较高浓度的SP1,而COS7和Sh sy5 y细胞中SP1含量极低。结论　人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样功能 ,为弱的非TATA盒启动子 ;不同组织来源的细胞中SP1含量不同 ,在神经细胞系Sh 展开更多

关键词 朊蛋白基因 启动区(遗传学) 转录 遗传 转染

原文传递

双链DNA病毒通过编码Virokine和Viroceptor抑制补体系统机理的探讨 被引量：2

13

作者 李虹 金奇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1996年第3期298-300,共3页

双链ＤＮＡ病毒通过编码Ｖｉｒｏｋｉｎｅ和Ｖｉｒｏｃｅｐｔｏｒ抑制补体系统机理的探讨李虹，金奇目前的研究已清楚地表明，双链ＤＮＡ病毒能够在生物体系中生存、传播并引起持续或潜伏感染，是由于它们在长期的进化过程中发展了一套... 双链ＤＮＡ病毒通过编码Ｖｉｒｏｋｉｎｅ和Ｖｉｒｏｃｅｐｔｏｒ抑制补体系统机理的探讨李虹，金奇目前的研究已清楚地表明，双链ＤＮＡ病毒能够在生物体系中生存、传播并引起持续或潜伏感染，是由于它们在长期的进化过程中发展了一套逃避、干扰、抑制、和对抗宿主免疫系... 展开更多

关键词 双链DNA病毒 Virokine Viroceptor 病毒编码

原文传递

EB病毒潜伏膜蛋白2重组逆转录病毒的构建及表达 被引量：1

14

作者 朱伟严 周玲 +1 位作者 姚家伟 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期342-344,共3页

目的　寻找在真核细胞中表达Epstein Barr(EB)病毒潜伏膜蛋白 2 (Latentmembraneprotein 2 ,LMP2 )的有效途径 ,研究LMP2蛋白功能及深入探讨其在诱导细胞免疫应答中的作用。方法　将EB病毒LMP2蛋白的基因重组至逆转录病毒载体LXSN上 ,... 目的　寻找在真核细胞中表达Epstein Barr(EB)病毒潜伏膜蛋白 2 (Latentmembraneprotein 2 ,LMP2 )的有效途径 ,研究LMP2蛋白功能及深入探讨其在诱导细胞免疫应答中的作用。方法　将EB病毒LMP2蛋白的基因重组至逆转录病毒载体LXSN上 ,通过脂质体将重组质粒导入PT6 7细胞 ,G418筛选抗性克隆 ,收集含重组病毒的上清 ,将其感染小鼠成纤维细胞NIH 3T3 ,测定病毒滴度 ,提取转染细胞DNA进行PCR鉴定 ,间接免疫荧光法检测外源基因在感染病毒的NIH 3T3中的表达。结果　培养上清的病毒滴度为 5 .8× 10 5 PFU ml,聚合酶链反应 (PCR)结果证实 ,转染细胞的DNA中含有目的基因的特异性片段。免疫荧光结果表明EBV LMP2基因在小鼠成纤维细胞中获得表达。 展开更多

关键词 疱疹病毒科 膜蛋白质类 基因表达

原文传递

无症状女性人群及宫颈炎患者泌尿生殖道标本的沙眼衣原体MOMP基因分布

15

作者 罗宪玲 汪玎妍 +4 位作者 蒋文玲 邝素娟 郭辉玉 侯云德 杨新科 《中国皮肤性病学杂志》 北大核心 1999年第4期197-198,共2页

目的了解广东省部分地区沙眼衣原体泌尿生殖道感染者的基因型分布特点。方法运用扩增沙眼衣原体外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法对无症状女性及宫颈炎患者泌尿生殖道标本进行了基因分型检测。结果... 目的了解广东省部分地区沙眼衣原体泌尿生殖道感染者的基因型分布特点。方法运用扩增沙眼衣原体外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法对无症状女性及宫颈炎患者泌尿生殖道标本进行了基因分型检测。结果基因Ｅ型在两组人群中分布最高，宫颈炎患者以Ｆ、Ｇ二型多见，无症状组以Ｄ型多见。结论实验结果对进一步分析常见的沙眼衣原体慢性迁延感染机理提供了实验依据。 展开更多

关键词 沙眼衣原体 宫颈炎 基因分型 泌尿生殖道

下载PDF 职称材料

白细胞介素2与狂犬疫苗联合免疫小鼠的抗体动态观察 被引量：1

16

作者 刘劲松 伊纯德 +5 位作者 刘慧 李燕 陆虹 宋绍勇 崔景辉 张守峰 《解放军医学高等专科学校学报》 1997年第4期4-6,共3页

组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗狂犬病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示，在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高（Ｐ＜... 组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗狂犬病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示，在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高（Ｐ＜０．０１），ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠比较，前者的抗体效价更高（Ｐ＜０．０１）。说明白细胞介素２可以提高小鼠的体液免疫反应。 展开更多

关键词 狂犬疫苗 白细胞介素2 中和抗体

下载PDF 职称材料