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白三叶类黄酮合成基因TrCHI的克隆及转录分析
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作者 张婷婷 刘洋 +1 位作者 张鹤山 许本波 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期2547-2555,共9页
为研究白三叶类黄酮合成途径的关键基因TrCHI在白三叶(Trifolium repens)花色形成中的作用,以白三叶野生型和红花突变体为材料,通过同源克隆得到TrCHI基因并进行转录分析和CHI酶活性测定。结果表明,白三叶野生型TrCHI基因开放阅读框长66... 为研究白三叶类黄酮合成途径的关键基因TrCHI在白三叶(Trifolium repens)花色形成中的作用,以白三叶野生型和红花突变体为材料,通过同源克隆得到TrCHI基因并进行转录分析和CHI酶活性测定。结果表明,白三叶野生型TrCHI基因开放阅读框长660 bp,编码219个氨基酸,其红花突变体TrCHI开放阅读框长度为669 bp,编码222个氨基酸。7处氨基酸突变包括:第13号位的谷氨酸突变成天冬氨酸,第75号位的谷氨酸突变成谷氨酰胺,第154号位的丝氨酸突变成苏氨酸,第218号位的赖氨酸突变成精氨酸,并在末尾增加了甘氨酸、蛋氨酸和赖氨酸。进化分析发现,CHI基因进化具有物种保守性,Tr CHI属于Ⅱ型CHI。花瓣、根和叶柄中,红花突变体TrCHI转录水平显著高于野生型;但在茎、叶和花梗中,红花突变体TrCHI基因转录水平低于野生型。突变体花瓣中CHI酶活性极显著高于野生型(P<0.001)。推测白三叶突变体的红花表型与TrCHI基因突变并对白三叶中的类黄酮化合物的合成调控有关。本研究为进一步研究TrCHI在白三叶上的潜在功能提供了一定的价值。 展开更多
关键词 基因克隆 同义突变 错义突变 开放阅读框 进化分析 转录水平 CHI酶活性分析
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水分对不同生育时期紫花苜蓿茎叶碳、氮、磷含量及化学计量特征的影响 被引量:18
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作者 陆姣云 杨惠敏 +3 位作者 田宏 张鹤山 熊军波 刘洋 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期25-34,共10页
通过设置35%(Low water,LW)、50%(Medium water,MW)和80%(High water,HW)的最大田间持水量(Maximum field water capacity,FWC)3个水分处理,探索紫花苜蓿不同生育时期地上营养器官碳、氮、磷含量及其化学计量比对水分添加的响应规律。... 通过设置35%(Low water,LW)、50%(Medium water,MW)和80%(High water,HW)的最大田间持水量(Maximum field water capacity,FWC)3个水分处理,探索紫花苜蓿不同生育时期地上营养器官碳、氮、磷含量及其化学计量比对水分添加的响应规律。研究表明:1)碳受水分和生育时期的影响较小;分枝期和现蕾期茎中氮含量随水分增加递减,现蕾期和初花期叶中氮、磷含量随水分增加递增,分枝期和初花期茎中磷含量随水分增加递增,而现蕾期相反。2)随紫花苜蓿生长,茎中碳含量逐渐增加,叶中氮和磷含量逐渐降低,茎叶中氮、磷含量可影响碳氮比、碳磷比及氮磷比。综上所述,不同生育期紫花苜蓿叶片对干旱胁迫响应更加敏感,而茎叶中磷含量可影响紫花苜蓿生长,适量添加水分能够缓解贫瘠土壤中紫花苜蓿茎叶磷含量受限情况。 展开更多
关键词 水分 生育时期 碳氮磷含量 生态化学计量学 紫花苜蓿
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检测miRNA活性的双荧光素酶单载体 被引量:4
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作者 毕延震 郑新民 +5 位作者 邵长伟 潘雯 姜黎 欧阳辉武 乔宪凤 刘西梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期775-780,共6页
本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体... 本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体的海肾荧光素酶基因(Renillaluc)和氨苄青霉素抗性基因之间,构建为两种荧光素酶基因表达框并置的单载体报告系统,命名为pMiSensor.在海肾荧光素酶基因的3'非翻译区引入多克隆位点Xba I和Apa I,便于克隆目的基因的3'UTR.海肾荧光素酶为报告基因,萤火虫荧光素酶为内参基因.多种哺乳动物细胞系的转染实验证实,pMiSensor可同时有效表达两种报告基因,其酶活显示出宽广的线性范围.通过构建pMiSensor-CCNE1报告载体,证明pMiSensor能够重现miR16对细胞周期蛋白CCNE1的调控作用.通过转染miR16抑制剂,证明pMiSensor-CCNE1可作为一种灵敏的生物感应器,探测细胞内微小RNA的活性变化.该双荧光素酶单载体具有重复性高、操作简便、定量准确的优点,适用于微小RNA靶分子的筛选、鉴定和确认,也适用于在细胞水平定量分析微小RNA的活性变化. 展开更多
关键词 微小RNA 荧光素酶 非连接酶依赖 mRNA靶分子 单载体
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动物转基因高效表达策略研究进展 被引量:3
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作者 赵旭东 黄永志 +1 位作者 毕延震 董发明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期45-53,共9页
外源基因在动物体内、细胞内表达时,常由于各种原因导致基因沉默。目前,主要有两种策略用于打破该瓶颈:一是利用友好位点;二是优化外源基因顺式作用元件。利用友好位点就是通过定点整合技术将外源基因插入至活性转录区域;优化外源基因... 外源基因在动物体内、细胞内表达时,常由于各种原因导致基因沉默。目前,主要有两种策略用于打破该瓶颈:一是利用友好位点;二是优化外源基因顺式作用元件。利用友好位点就是通过定点整合技术将外源基因插入至活性转录区域;优化外源基因顺式作用元件即采用合适的启动子、增强子、内含子、染色质开放元件、核基质附着区等元件,构建出高效表达载体。对相关策略进行概述,为动物基因工程育种提供参考。 展开更多
关键词 转基因动物 外源基因 友好位点 基因编辑
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不同物候期美丽胡枝子氨基酸组成和营养价值评价 被引量:2
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作者 田宏 张鹤山 +2 位作者 熊军波 陆姣云 刘洋 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期98-105,共8页
为明确美丽胡枝子作为饲用灌木的营养价值,对其不同物候期氨基酸含量和组成进行研究。结果发现,美丽胡枝子含有15种氨基酸,其中谷氨酸(Glu)含量最高,其次为天门冬氨酸(Asp),蛋氨酸(Met)含量最低,而胱氨酸(Cys)未测出。氨基酸含量随着物... 为明确美丽胡枝子作为饲用灌木的营养价值,对其不同物候期氨基酸含量和组成进行研究。结果发现,美丽胡枝子含有15种氨基酸,其中谷氨酸(Glu)含量最高,其次为天门冬氨酸(Asp),蛋氨酸(Met)含量最低,而胱氨酸(Cys)未测出。氨基酸含量随着物候期的延续呈先增后减趋势,必需氨基酸含量占氨基酸总量(E/T)的36.95%~46.88%,必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量比值(E/N)在58.59%~88.25%之间,接近或高于FAO/WHO理想蛋白质标准。美丽胡枝子含9种药效氨基酸,占氨基酸总量的比例在66%以上,药用价值高。蛋氨酸+胱氨酸含量低于FAO/WHO氨基酸模式谱标准,为第一限制氨基酸。美丽胡枝子氨基酸比值系数分(SRC)除成熟期较低外,其他时期均在63以上,其营养价值相对较高。综合评价,分枝期美丽胡枝子饲喂家畜最佳。 展开更多
关键词 美丽胡枝子 物候期 氨基酸 营养价值
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基于中国知网的氮循环研究文献计量分析
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作者 陆姣云 田宏 +2 位作者 张鹤山 熊军波 刘洋 《中国农学通报》 2023年第7期158-164,共7页
为探究近10年来氮循环研究的热点与趋势,基于CNKI数据库,采用文献计量学方法,对文献类型、分布国家、研究机构、来源期刊、高被引文献进行统计,进而分析氮循环研究的概况和动态。结果表明:(1)2012—2021年氮循环相关文献发文量呈逐年平... 为探究近10年来氮循环研究的热点与趋势,基于CNKI数据库,采用文献计量学方法,对文献类型、分布国家、研究机构、来源期刊、高被引文献进行统计,进而分析氮循环研究的概况和动态。结果表明:(1)2012—2021年氮循环相关文献发文量呈逐年平稳增加的趋势,且主要文献类型为外文期刊、学位论文和中文期刊。(2)研究国家主要分布于中国和美国,研究机构以大学为主,另外,中国的中国科学院也是氮循环研究的重要机构之一。(3)荷兰的《Science of the Total Environment》、瑞士的《Frontiers in Microbiology》和英国的《Soil Biology&Biochemistry》3本期刊的累计发文量较高。(4)高被引文献主要以综述为主,主要集中在土壤氮循环方向。氮循环的相关研究发展态势较好,相关理论逐渐进入全面深入的系统化研究阶段,并形成以农业生态系统土壤氮循环为主流的研究方向。 展开更多
关键词 氮循环 中国知网 文献计量学 期刊 研究现状
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调控CD163基因表达的miRNA鉴定及其在PRRSV感染中的作用分析 被引量:1
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作者 吴俊静 乔木 +2 位作者 武华玉 彭先文 梅书棋 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第13期16-19,共4页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种危害大、控制难的猪传染性疾病。PRRSV必须通过特异性受体诱导才能入侵宿主细胞,而CD163就是其中一个关键受体。在获得靶向作用CD163基因miRNA的基础上,进一... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种危害大、控制难的猪传染性疾病。PRRSV必须通过特异性受体诱导才能入侵宿主细胞,而CD163就是其中一个关键受体。在获得靶向作用CD163基因miRNA的基础上,进一步研究发现过表达miR-181c、miR-4262可极显著抑制细胞内CD163 mRNA的表达(P<0.01);且在Marc-145细胞中证实miR-181c、miR-23b、miR-4262均具有极显著抑制PRRSV增殖的功能(P<0.01),其中miR-4262抑制效果最佳。3个miRNA抗PRRSV增殖的分子机制比较复杂,miR-181c、miR-4262可通过靶向抑制受体CD163发挥抗PRRSV增殖作用,而miR-23b是通过其他途径发挥作用。并首次发现miR-4262具有抑制PRRSV增殖的作用,但其具体的分子作用机制还有待进一步深入研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) CD163基因 MIRNA 抗病
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Ssc-miR-27b-3p在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染中的作用分析 被引量:1
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作者 吴俊静 季子云 +4 位作者 乔木 武华玉 刘贵生 彭先文 梅书棋 《湖北农业科学》 2018年第A02期164-167,共4页
在发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后ssc-miR-27b-3p显著下调表达的基础上,进一步分析其在PRRSV感染中的作用。通过在Marc-145和猪肺泡巨噬细胞(PAM)中超表达和抑制表达sscmiR-27b-3p,再用PRRSV感染细胞,利用荧光定量PCR和Wester... 在发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后ssc-miR-27b-3p显著下调表达的基础上,进一步分析其在PRRSV感染中的作用。通过在Marc-145和猪肺泡巨噬细胞(PAM)中超表达和抑制表达sscmiR-27b-3p,再用PRRSV感染细胞,利用荧光定量PCR和Western blot技术检测细胞内PRRSV RNA和蛋白表达差异,证实ssc-miR-27b-3p能显著抑制PRRSV在宿主细胞中的增殖。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) ssc-miR-27b-3p MIRNA
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利用双荧光素酶报告系统鉴定靶向作用猪CD163基因的miRNA 被引量:1
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作者 吴俊静 彭先文 +3 位作者 乔木 武华玉 刘贵生 梅书棋 《湖北农业科学》 2015年第19期4854-4858,共5页
为了进一步筛选获得抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的候选mi RNA,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防治及猪的抗病育种提供新策略,通过3′RACE(Rapid-amplification of c DNA ends)测序获得了猪CD163基因3′UTR的完整序列,生物信息... 为了进一步筛选获得抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的候选mi RNA,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防治及猪的抗病育种提供新策略,通过3′RACE(Rapid-amplification of c DNA ends)测序获得了猪CD163基因3′UTR的完整序列,生物信息学分析发现其具有mi R-181c、mi R-181d、mi R-23b、mi R-4262等mi RNA的作用靶点。利用双荧光素酶报告系统检测发现,与阴性对照组相比,mi R-181c、mi R-181d、mi R-23b和mi R-4262均可极显著(P<0.01)抑制荧光素酶的相对活性,其中mi R-181d抑制效果最佳。 展开更多
关键词 双荧光素酶报告系统 MIRNA CD163基因
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猪MMP20基因变异筛选及其与母猪繁殖性状的关联分析
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作者 吴俊静 董斌科 +2 位作者 乔木 梅书棋 彭先文 《湖北农业科学》 2020年第21期110-112,共3页
试验鉴定获得了猪MMP20基因第3内含子中的2个突变位点g.14334bpC>G和g.14369bpC>T,采用PCR产物直接测序法在大白猪群体中进行基因分型,并对母猪性状进行关联分析,结果发现这两个突变完全连锁,所组成的单倍型显著影响产仔数、产活... 试验鉴定获得了猪MMP20基因第3内含子中的2个突变位点g.14334bpC>G和g.14369bpC>T,采用PCR产物直接测序法在大白猪群体中进行基因分型,并对母猪性状进行关联分析,结果发现这两个突变完全连锁,所组成的单倍型显著影响产仔数、产活仔数、21日龄活仔数、出生窝重和出生个体重性状(P<0.05)。GG/CC基因型个体产仔数最低,其次是GC/CT基因型个体,而CC/TT基因型个体产仔数最高。 展开更多
关键词 繁殖性状 MMP20基因 突变 关联分析
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