安多霖对微波辐射致大鼠心肌细胞半胱天冬酶-3表达的影响 被引量：8

1

作者 张静 彭瑞云 +6 位作者 王水明 高亚兵 王少霞 赵黎 徐新萍 董霁 姚斌伟 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期329-332,共4页

目的探讨抗辐射中药复方安多霖对微波辐射后大鼠心肌细胞半胱天冬酶(caspase)-3表达的改变及其意义。方法将140只二级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、辐射对照组、安多霖0.75 g/(kg.d)、1.5 g/(kg.d)及3 g/(kg.d)预防组。预防组每日... 目的探讨抗辐射中药复方安多霖对微波辐射后大鼠心肌细胞半胱天冬酶(caspase)-3表达的改变及其意义。方法将140只二级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、辐射对照组、安多霖0.75 g/(kg.d)、1.5 g/(kg.d)及3 g/(kg.d)预防组。预防组每日1次灌胃给予安多霖溶液,连续给药2周。给药结束后即刻30 mW/cm2微波辐射大鼠1次,辐射时间为15 min。于停药后7 d和14 d,采用Western印迹法、免疫组织化学和图像分析技术,研究大鼠心脏细胞caspase-3表达的变化规律。结果停药后7和14 d,辐射对照组大鼠心肌细胞caspase-3主要位于胞浆,其蛋白表达显著升高(P<0.01);0.75 g/(kg.d)安多霖预防组大鼠心肌细胞caspase-3表达与辐射对照组相似;1.5 g/(kg.d)和3 g/(kg.d)安多霖预防组大鼠心肌细胞caspase-3表达比辐射对照组显著下降(P<0.01)。结论 30 mW/cm2微波辐射可引起大鼠心肌细胞caspase-3表达增强;给予安多霖1.5和3 g/(kg.d)对微波辐射致大鼠心肌caspase-3表达升高有降低作用;安多霖对微波辐射引起心脏损伤的预防作用可通过下调caspase-3表达来实现。 展开更多

关键词 安多霖 微波 大鼠 心脏损伤 半胱天冬酶-3

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我国蛋白质组学研究现状及展望 被引量：16

2

作者 高雪 郑俊杰 贺福初 《生命科学》 CSCD 2007年第3期257-263,共7页

蛋白质组学是系统研究分子机器、亚细胞器、细胞、组织、器官乃至整体等生物体系内蛋白质全组成及其活动规律的科学,已成为21世纪生命科学的焦点之一。本文简要介绍了蛋白质组学研究背景,我国蛋白质组学研究现状、存在问题和前景展望。

关键词 蛋白质组学 现状 展望

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肝星状细胞的去活化机制与抗肝纤维化治疗 被引量：10

3

作者 劳远翔 贺福初 姜颖 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期77-80,共4页

肝纤维化是一个可逆的瘢痕反应,发生在几乎所有的慢性肝损伤的患者中,一般是由肝纤维化导致肝硬化,以节结形成和肝脏收缩为主要特征.理解肝纤维化的分子基础很重要,因为纤维化反应是几乎所有肝脏疾病后期并发症的基础,包括门静脉高压,腹... 肝纤维化是一个可逆的瘢痕反应,发生在几乎所有的慢性肝损伤的患者中,一般是由肝纤维化导致肝硬化,以节结形成和肝脏收缩为主要特征.理解肝纤维化的分子基础很重要,因为纤维化反应是几乎所有肝脏疾病后期并发症的基础,包括门静脉高压,腹水,肝性脑病,合成功能障碍以及代谢能力损害等,所以肝纤维化既是对肝细胞的直接功能损害,也是门静脉阻力增加的直接原因.对肝纤维化进行全面研究将有助于控制肝脏疾病的发生及发展. 展开更多

关键词 肝硬化 肝星状细胞 机制

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蛋白质质谱分析的无标记定量算法研究进展 被引量：10

4

作者 张伟 张纪阳 +5 位作者 刘辉 孙汉昌 徐长明 马海滨 朱云平 谢红卫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第6期506-518,共13页

作为发现疾病相关生物标志物的重要途径,定量研究已成为蛋白质组学的热点问题.随着实验方法的发展和改进,定量数据处理算法也在不断更新和完善.将现有的无标记定量方法归纳为需要/不需要鉴定结果两类方法,分析比较了两类方法的异同及优... 作为发现疾病相关生物标志物的重要途径,定量研究已成为蛋白质组学的热点问题.随着实验方法的发展和改进,定量数据处理算法也在不断更新和完善.将现有的无标记定量方法归纳为需要/不需要鉴定结果两类方法,分析比较了两类方法的异同及优缺点,详细讨论了所涉及的主要算法,总结了一些常用的无标记定量软件及对应的网络资源.展望了无标记定量数据分析的未来研究方向. 展开更多

关键词 定量蛋白质组 质谱 无标记定量 定量算法 统计学分析

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肝纤维化发生发展及逆转过程中肝巨噬细胞亚群分类 被引量：9

5

作者 陈芳艳 贺福初 姜颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期879-887,共9页

肝纤维化是由持续性损伤修复反应引起的,导致肝组织内细胞外基质异常沉积,进一步引发肝脏结构和肝功能异常改变的一种病理过程.已有大量研究表明,肝纤维化在去除损伤因素后是可以逆转的.肝星状细胞作为主要的效应细胞,合成和分泌各种胶... 肝纤维化是由持续性损伤修复反应引起的,导致肝组织内细胞外基质异常沉积,进一步引发肝脏结构和肝功能异常改变的一种病理过程.已有大量研究表明,肝纤维化在去除损伤因素后是可以逆转的.肝星状细胞作为主要的效应细胞,合成和分泌各种胶原和细胞外基质,一直被认为是肝纤维化发生发展的中心环节.最近的研究发现,巨噬细胞作为主要的调节细胞,能同时调节肝星状细胞的功能和基质胶原的降解,促进肝纤维化的形成.而在肝纤维化逆转过程中,促使活化的肝星状细胞凋亡和纤维胶原的降解,促进肝纤维化的逆转.目前已有研究表明,巨噬细胞亚群在肝纤维化发生发展及逆转中具有双向调控作用,但是对于动物模型体内还没有系统的研究巨噬细胞亚群的分类.本文对巨噬细胞亚群的分类研究做一个全面的综述,对肝脏巨噬细胞在肝纤维化中分子机制的进一步研究具有一定的参考价值和借鉴意义. 展开更多

关键词 肝纤维化 巨噬细胞亚群 KUPFFER细胞

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磷酸化蛋白质组学的新进展及其在肝脏生理和病理机制中的应用 被引量：6

6

作者 衣泰龙 田苗苗 +1 位作者 杨晓明 徐平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1004-1017,共14页

蛋白质磷酸化是最常见的蛋白质翻译后修饰形式。由于蛋白质的磷酸化形式可以被磷酸酶和磷酸激酶进行可逆的调控,所以在众多的生命活动过程中蛋白质的磷酸化修饰起着重要的调控作用,因此对生物体内蛋白质磷酸化修饰的系统研究对于揭示生... 蛋白质磷酸化是最常见的蛋白质翻译后修饰形式。由于蛋白质的磷酸化形式可以被磷酸酶和磷酸激酶进行可逆的调控,所以在众多的生命活动过程中蛋白质的磷酸化修饰起着重要的调控作用,因此对生物体内蛋白质磷酸化修饰的系统研究对于揭示生命科学的奥秘显得十分重要。近年来,随着质谱技术和生物信息学软件以及磷酸化肽段富集方法的发展,利用质谱对生物体内蛋白质磷酸化修饰研究的技术逐渐成熟。肝脏作为人体最重要的代谢和免疫器官,深入研究肝脏细胞内蛋白质磷酸化修饰形式对于理解其功能具有重要指导意义。目前,迅速发展的磷酸化蛋白质组学技术已经被广泛应用到肝脏功能的生物学研究中。这些研究加深了人们对肝脏的生理及病理状态的分子生物学机制的了解。本文综述了当前磷酸化蛋白质组学的研究进展和磷酸化蛋白质组学在肝脏中的研究。 展开更多

关键词 蛋白质磷酸化 肝脏磷酸化蛋白质组 磷酸化肽富集 定量蛋白质组 生物信息学

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基于马尔科夫链的胰蛋白酶肽段蛋白酶切位点概率预测 被引量：6

7

作者 刘辉 张纪阳 +5 位作者 孙汉昌 徐长明 张伟 马海滨 朱云平 谢红卫 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期528-536,共9页

在基于质谱技术的蛋白质鉴定过程中,数据库搜索是主要的方法。漏切位点和酶切规则决定了图谱候选肽段的范围,是数据库搜索算法的重要参数。对于常用的胰蛋白酶切来说,除了局部构象、三维结构、实验条件,以及其它偶然因素会影响赖氨酸K... 在基于质谱技术的蛋白质鉴定过程中,数据库搜索是主要的方法。漏切位点和酶切规则决定了图谱候选肽段的范围,是数据库搜索算法的重要参数。对于常用的胰蛋白酶切来说,除了局部构象、三维结构、实验条件,以及其它偶然因素会影响赖氨酸K或者精氨酸R后的位点能否被酶切外,该位点附近的其它氨基酸也会影响蛋白水解酶的酶切效果。从质谱图谱中时常会鉴定出包含漏切位点的肽段,因此,预测蛋白质的酶切位点能够为数据库搜索算法提供更为可靠的模型,也能够为了解和分析蛋白质的酶切规律提供依据。本文提出了一种基于马尔科夫(Markov)链的预测方法,能够利用蛋白质的序列信息来预测候选酶切位点的酶切概率,在蛋白酶切过程中,预测肽段的覆盖率可以达到85%以上。 展开更多

关键词 蛋白鉴定 胰蛋白酶肽段 酶切/漏切肽段 马尔科夫链 概率预测

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泛素连接酶-底物选择关系的研究进展 被引量：6

8

作者 李杨 李栋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期11-20,共10页

泛素是一种包含76个氨基酸的小分子蛋白。泛素共价结合到底物的过程称为泛素化修饰。泛素化修饰过程是一个由级联的泛素激活酶、泛素结合酶和泛素连接酶所介导的复杂过程,泛素化修饰具有高效、ATP依赖、高度特异的特点。泛素化修饰与细... 泛素是一种包含76个氨基酸的小分子蛋白。泛素共价结合到底物的过程称为泛素化修饰。泛素化修饰过程是一个由级联的泛素激活酶、泛素结合酶和泛素连接酶所介导的复杂过程,泛素化修饰具有高效、ATP依赖、高度特异的特点。泛素化修饰与细胞周期调控、细胞凋亡、转录调控、DNA损伤修复等一系列生物学过程密切相关。在泛素化修饰过程中,泛素连接酶对底物的识别,是决定泛素化修饰特异性的关键环节。泛素连接酶底物识别的相关机制研究不断被报道,鉴定泛素连接酶底物的高通量方法也在不断的改进和发展。随着实验研究的不断深入,实验数据的不断产出,利用生物信息学进行泛素连接酶底物的研究也开始受到关注。对泛素连接酶识别底物的相关机制、高通量泛素连接酶底物的鉴定方法、泛素连接酶底物的生物信息学研究和生物信息学在泛素连接酶底物研究中的发展方向进行讨论。 展开更多

关键词 泛素化修饰 泛素连接酶 底物 生物信息学

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Fe_3O_4/TiO_2纳米材料靶上脱盐的基质辅助激光解析/电离质谱新方法研究 被引量：6

9

作者 卫军营 张养军 +4 位作者 谭峰 刘慧玲 王京兰 蔡耘 钱小红 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-7,共7页

建立了一种简便、高效的靶上脱盐新方法。利用Fe3O4/TiO2磁性纳米材料对肽段的吸附作用,将其作为载体用于靶上肽段富集和脱盐。在对纳米材料使用量、浸洗条件进行优化的基础上,成功地鉴定了溶于10mol/L尿素溶液的100fmol的肌红蛋白样品... 建立了一种简便、高效的靶上脱盐新方法。利用Fe3O4/TiO2磁性纳米材料对肽段的吸附作用,将其作为载体用于靶上肽段富集和脱盐。在对纳米材料使用量、浸洗条件进行优化的基础上,成功地鉴定了溶于10mol/L尿素溶液的100fmol的肌红蛋白样品,也对溶于3mol/L尿素溶液中的10fmol的肌红蛋白样品进行了成功地分析鉴定。通过对肌红蛋白样品进行预处理和质谱分析重复实验,表明该方法重现性好,且简便、高效,所需时间短,一次可同时处理多个样品,易于实现通量化,为有效地解决目前蛋白质组分析中所面临的基质辅助激光解析/离子化飞行时间质谱耐盐性差的问题提供了一种新的手段。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 四氧化三铁/二氧化钛纳米材料 靶上脱盐方法

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多反应监测方法评估丹参和人参对大鼠肝药酶的调控作用 被引量：3

10

作者 程汉兴 孙爱华 +2 位作者 王宇光 高月 姜颖 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期3647-3655,共9页

目的建立新型特异性强的高通量细胞色素P450(CYP)丰度测定方法,以人参和丹参为工具药考察药物对肝药酶的调控作用。方法采用基于质谱多反应监测(MRM)模式方法,以串联配体法(QconCAT)表达合成的重标肽段作为内标对丹参与人参处理后,对9... 目的建立新型特异性强的高通量细胞色素P450(CYP)丰度测定方法,以人参和丹参为工具药考察药物对肝药酶的调控作用。方法采用基于质谱多反应监测(MRM)模式方法,以串联配体法(QconCAT)表达合成的重标肽段作为内标对丹参与人参处理后,对9种大鼠肝脏CYP(CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1、CYP2B2、CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1、CYP3A2、CYP17A1)蛋白特异肽段进行定量,探讨丹参和人参对肝脏CYP酶的表达上调或者下调作用。结果 QconCAT重标合成内标肽段与肝脏样品肽段质谱表征一致,与对照组相比,丹参与人参作用后,对大鼠肝内CYP1A1、CYP2B2的表达均具有下调作用,对CYP1A2、CYP2B1的表达均具有上调作用。丹参同时下调CYP3A2、CYP2C11和CYP17A1的表达,而人参则上调这3种蛋白的表达。建立了MRM方法对大鼠肝脏CYP蛋白定量方法,定量方法相对标准偏差在5.9%以内,相对误差在6.8%以内,定量标准曲线的线性系数大于0.9。结论对9种大鼠肝脏CYP酶进行定量研究,其中CYP2B1、CYP2B2和CYP17A1是首次进行蛋白质定量研究。丹参与人参对CYP亚型产生的调控作用存在差异性,为药物配伍实践中提供临床参考价值,避免不良药物相互作用反应。 展开更多

关键词 人参 丹参 CYP450 多反应监测 药物配伍

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肝癌转基因小鼠模型的应用研究进展 被引量：4

11

作者 赵颖华 孙薇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期56-62,共7页

肝细胞癌是全球范围内的恶性肿瘤,由于其进展迅速、易于复发转移,早期诊断和有效治疗一直是临床难题,对于肝癌的发病机制也亟待进一步阐明。利用基因工程手段构建的肝癌转基因小鼠模型,为肝癌发病机制研究和药物筛选提供了宝贵的研究材... 肝细胞癌是全球范围内的恶性肿瘤,由于其进展迅速、易于复发转移,早期诊断和有效治疗一直是临床难题,对于肝癌的发病机制也亟待进一步阐明。利用基因工程手段构建的肝癌转基因小鼠模型,为肝癌发病机制研究和药物筛选提供了宝贵的研究材料。结合经典研究与近年进展,对常用肝癌转基因小鼠模型的构建方法、模型特点、特别是应用研究状况进行了分类介绍,并展望了未来发展的方向。 展开更多

关键词 肝细胞癌 转基因 小鼠模型

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基质辅助激光解析电离质谱靶上样品前处理方法研究进展 被引量：3

12

作者 卫军营 蔡耘 +1 位作者 钱小红 张养军 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2007年第2期122-128,共7页

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品前处理方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品前处理方法与合适的有机基质结合起来,才能成功实... 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品前处理方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品前处理方法与合适的有机基质结合起来,才能成功实现对多肽和蛋白质等生物大分子的准确鉴定。随着质谱分析向高灵敏度、高准确度、高通量的方向发展,出现了许多新的,可直接在MALDI靶上前处理的方法,极大地简化了对生物样本的处理步骤,同时减少了样品的损失。特别是将一些纳米材料用于MALDI靶上进行样品的前处理,为样品前处理方法的研究开辟了广阔的应用前景。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离质谱 靶上前处理方法

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肝细胞癌转移相关蛋白的iTRAQ定量蛋白质组学研究 被引量：3

13

作者 高萍萍 陈宁 孙薇 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第7期998-1003,共6页

该研究对不同转移能力的人肝癌细胞系全细胞蛋白进行差异蛋白质组分析,以期发现与肝癌转移相关的候选分子。选择具有高、低转移能力的人肝癌细胞系HCCLM6和MHCC97H为研究材料,提取细胞全蛋白,FASP酶切、iTRAQ标记后进行质谱鉴定和定量分... 该研究对不同转移能力的人肝癌细胞系全细胞蛋白进行差异蛋白质组分析,以期发现与肝癌转移相关的候选分子。选择具有高、低转移能力的人肝癌细胞系HCCLM6和MHCC97H为研究材料,提取细胞全蛋白,FASP酶切、iTRAQ标记后进行质谱鉴定和定量分析,并利用Uni Prot数据库和GOfact软件对差异蛋白进行生物信息学分析,包括亚细胞定位、生物过程和分子功能富集分析。共鉴定了5 033种蛋白质,其中5 013种蛋白质有定量信息,发现91种差异蛋白(|ratio|≥1.5,单样本t检验,P<0.05),其中39种蛋白在高转移细胞HCCLM6中上调,52种下调。差异蛋白的细胞定位主要为细胞质和细胞膜,GO分析显著富集到细胞黏附生物过程和蛋白结合生物功能。该研究建立了高低转移能力的人肝癌细胞系HCCLM6和MHCC97H细胞全蛋白的差异表达谱,发现了4种新的与肝癌转移相关的候选蛋白(微管蛋白链β-2B、着丝粒蛋白F、层黏连蛋白亚基α5和囊泡相关膜蛋白5),为进一步研究肝癌转移机制提供了重要的数据参考。 展开更多

关键词 肝细胞癌 转移 蛋白质组 ITRAQ

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人GIT1/2蛋白调控多种生理和病理进程 被引量：1

14

作者 韦超 贺福初 王建 《生命的化学》 CAS CSCD 2012年第6期537-541,共5页

G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1/2[G-protein-coupled receptor(GPCR)kinase interacting protein 1/2,GIT1/2]属于多结构域蛋白质。它们参与多种细胞生物学过程:(1)通过其ARF GTPase-激活蛋白(ARF GTPase-activating protein,ARF-GAP... G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1/2[G-protein-coupled receptor(GPCR)kinase interacting protein 1/2,GIT1/2]属于多结构域蛋白质。它们参与多种细胞生物学过程:(1)通过其ARF GTPase-激活蛋白(ARF GTPase-activating protein,ARF-GAP)活性调节细胞骨架动态变化;(2)参与G蛋白偶联受体的内化及细胞膜转运;(3)作为支架蛋白调控信号转导。GIT蛋白家族在骨代谢、血管稳态、神经发育以及肿瘤等生理或病理条件下发挥关键的调控作用。本文着重就近年来GIT蛋白家族在生理与病理方面的调控作用作一综述。 展开更多

关键词 GIT 细胞骨架 信号转导 细胞运动

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TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响 被引量：3

15

作者 王敏 王晓辉 +6 位作者 唐刘君 李长燕 董晓明 周扬帆 杨晓扬 杨晓明 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第11期1113-1116,共4页

目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方... 目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。 展开更多

关键词 NF-ΚB TRAF6 荧光素酶报告基因

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细胞质膜蛋白质组学

16

作者 李涛 姜颖 贺福初 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期402-405,共4页

随着基于质谱的大规模蛋白质鉴定技术的建立,蛋白质组学得到迅速发展。同时由于质膜在细胞生命活动中的重要作用,质膜蛋白质组学逐渐兴起,并发展成为蛋白质组学研究中的重要组成部分。但由于膜蛋白尤其是内在膜蛋白的强疏水性、低丰度,... 随着基于质谱的大规模蛋白质鉴定技术的建立,蛋白质组学得到迅速发展。同时由于质膜在细胞生命活动中的重要作用,质膜蛋白质组学逐渐兴起,并发展成为蛋白质组学研究中的重要组成部分。但由于膜蛋白尤其是内在膜蛋白的强疏水性、低丰度,造成蛋白质提取、分离和鉴定相对困难,使质膜蛋白质组成为蛋白质组研究中的一个技术难点。 展开更多

关键词 质膜 蛋白质组

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组蛋白甲基转移酶SETD2对P53介导细胞凋亡的调控 被引量：2

17

作者 谢萍 田春艳 +1 位作者 张令强 贺福初 《军事医学》 CAS 2011年第1期30-34,共5页

目的探讨组蛋白甲基转移酶SETD2对P53功能的调控。方法 PCR扩增人源SETD2并重组入真核表达载体;通过间接免疫荧光鉴定SETD2的亚细胞定位;通过GST Pull-down实验寻找P53结合SETD2的区域;流式细胞术分析SETD2对P53参与细胞凋亡的影响。结... 目的探讨组蛋白甲基转移酶SETD2对P53功能的调控。方法 PCR扩增人源SETD2并重组入真核表达载体;通过间接免疫荧光鉴定SETD2的亚细胞定位;通过GST Pull-down实验寻找P53结合SETD2的区域;流式细胞术分析SETD2对P53参与细胞凋亡的影响。结果成功克隆了人源SETD2的全长,并将其成功构建到真核表达载体中;SETD2以胞核定位为主;体外直接相互作用实验证实SETD2和P53存在相互作用,SETD2分子中部的SET结构域和C端都可以结合P53;流式细胞分析结果表明SETD2对于P53参与的细胞凋亡具有明显的促进作用。结论本研究揭示P53正向调控因子SETD2对P53介导的细胞凋亡具有促进效应,从而将组蛋白表遗传学修饰与P53转录因子活性调控关联起来,研究结果对肿瘤、免疫等疾病的防治具有一定的科学意义。 展开更多

关键词 蛋白甲基转移酶类 SETD2 肿瘤抑制蛋白质P53 聚合酶链反应 真核表达 细胞凋亡 流式细胞术

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竞争性内源RNA在转录后水平调控基因表达 被引量：2

18

作者 李海北 宋瑾 +1 位作者 曹鹏博 周钢桥 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期186-195,共10页

竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ce RNA)假说提出了一种RNA在转录后水平调控基因表达的机制,即信使RNA(message RNA,m RNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)、假基因(pseudogene)转录物及环状RNA(circular RNA,ci... 竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ce RNA)假说提出了一种RNA在转录后水平调控基因表达的机制,即信使RNA(message RNA,m RNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)、假基因(pseudogene)转录物及环状RNA(circular RNA,circ RNA)通过竞争结合相同的微小RNA(micro RNA,mi RNA)来影响靶基因RNA的稳定性或翻译活性,实现转录后水平的基因表达调节。这一全新的基因表达调控机制目前已在肌肉的分化、胚胎干细胞的分化、中脑的发育及癌症的转移等多个研究领域被发现,并且被证实参与多个生物学过程的调控。ce RNA这种以mi RNA为媒介实现RNA与RNA相互调控的机制,使得编码基因和非编码基因在全转录组范围内形成了一个庞大而精细的调控网络,增加了基因调控网络的复杂性。文章就ce RNA的分子类型、ce RNA机制所涉及的生物学功能、影响ce RNA机制的重要因素及ce RNA调控网络预测这几个方面进行综述。 展开更多

关键词 竞争性内源RNA 转录后调控 转录组

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肝细胞生成素205与细胞色素C的相互作用 被引量：1

19

作者 储著朗 王建 +4 位作者 杨永升 唐刘君 陈慧 杨晓明 汪思应 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第12期1281-1286,共6页

目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin205,HPO205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pP... 目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin205,HPO205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体.应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定,同时用GST-Pulldown方法对其验证.结果:成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体,包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS.经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER+pPC86-CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因,而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因.GST-Pulldown实验显示,GST-CYCS能将HPO205沉淀下来,而GST空蛋白不能沉淀HPO205,证实HPO205与Cytc存在相互作用.结论:HPO205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程. 展开更多

关键词 肝细胞生成素205 细胞色素C 蛋白质相互作用 酵母双杂交 GST-Pull down技术

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应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14—3—3sigma相互作用的分子网络 被引量：2

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作者 肖汀 米薇 +4 位作者 李敏 曹邦荣 冯林 程书钧 高燕宁 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期752-756,共5页

目的筛选14—3—3sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白，构建相互作用的分子网络。方法构建稳定过表达14—3—3sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株（PG细胞，大细胞肺癌），采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测PG细胞的生长速度。利用... 目的筛选14—3—3sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白，构建相互作用的分子网络。方法构建稳定过表达14—3—3sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株（PG细胞，大细胞肺癌），采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测PG细胞的生长速度。利用稳定同位素标记氨基酸（stableisotopelabelingbyaminoacidsincellculture，SILAC）技术，联合线性离子阱回旋共振质谱仪（LC-LTQ—n’）鉴定由14-3-3sigma过表达引起的差异表达蛋白，将质谱鉴定为表达〉2倍或〈0．5倍的蛋白作为差异蛋白。通过检索人类蛋白参考数据库（Humanproteinreferencedatabase，HPRD）和蛋白质交互作用网络数据库（Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes，KEGG）构建分子网络。结果显示C4克隆中外源14—3—3sigma表达量最高（命名为PGSC4），后续实验用PGSCA细胞进行。转染14—3-3sigma后，PG细胞生长速度明显减慢。建立了包含147个蛋白差异蛋白的数据库。构建的分子网络中含有26个蛋白，其中参与了多个细胞活动（细胞周期调控、细胞分化、凋亡等）的重要激酶——酪蛋白激酶Ⅱ0t亚基（caseinkinaseIIsubunitalpha，CSNK2A1）是表达升高最明显的蛋白质，与DNA损伤调节机制相关的转录调节因子MENl（Menin）则是表达降低幅度最大的蛋白质。结论14．3—3sigma可以抑制非小细胞肺癌PG细胞的生长速度，与细胞周期、DNA损伤修复等机制相关的蛋白质发生了变化，并构成了相互作用的分子网络。 展开更多

关键词 14—3—3蛋白质类 肺肿瘤 细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术 PG细胞 分子网络

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