期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到109篇文章
< 1 2 … 6 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
检测禽流感病毒RT-PCR一步法的建立及H5、H9亚型的鉴定 被引量：9
1
作者 马鸣潇 金宁一 +8 位作者 王振国 朱光泽 费东亮 郑敏 尹革芬 葛淑敏 金扩世 夏志平 金明兰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期415-417,共3页
目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型。方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIVRT-PCR一步法。根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解... 目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型。方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIVRT-PCR一步法。根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-PCR一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性。结果所建立AIV系列RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点。结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析。 展开更多
关键词 AIV 裂解位点 一步RT-PCR PCR一步法 禽流感病毒 H9亚型 通过检测 鉴定 特异性引物 PCR检测方法
下载PDF
口蹄疫病毒复合多表位DNA疫苗的设计及构建 被引量：11
2
作者 马鸣潇 金宁一 +8 位作者 刘慧娟 鲁会军 田明尧 金明兰 沈国顺 张林 李旭 计越 金扩世 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期190-194,共5页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白VP4上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建表达盒。将构建好的表达盒OAAT克隆到真核表达载体pVAX1 PCMV启动子下游,构建三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT,并用Western blot和IFA方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。结果通过InsightⅡ软件同源建模和DNAStar5.0软件分析表明,所构建的FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT理论上符合设计要求,且在真核细胞获得了正确表达。结论已成功设计FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,并构建了三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 复合多表位抗原 表达盒 DNA疫苗
下载PDF
高致病性禽流感的流行及其预防控制 被引量：9
3
作者 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-12,共8页
禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hema... 禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hemagglutinin，H）和神经氨酸酶（Neuraminidase，N）抗原性的不同，目前至少可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1-N9）。由H5和H7亚型毒株（以H5N1和H7N7为代表）所引起的禽类疾病称为高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HeM），其发病率和病死率都很高，危害极大。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 预防控制 烈性传染病 禽流行性感冒 A型流感病毒 亚型毒株 流感综合征 神经氨酸酶 生物武器 禽类疾病
下载PDF
口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建 被引量：9
4
作者 马鸣潇 金宁一 +6 位作者 刘慧娟 沈国顺 郑敏 金明兰 鲁会军 霍晓伟 马海利 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期288-294,共7页
针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其... 针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒
下载PDF
新城疫病毒HN基因诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用机制 被引量：9
5
作者 连海 金宁一 +7 位作者 李霄 陈立刚 张静敏 管国芳 孙丽丽 李雪梅 郑洪玲 崔英姬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期222-227,共6页
为了探索新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制,将含有HN基因的重组质粒pVHN经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色分析肿瘤细胞凋亡;罗丹明123和DCF... 为了探索新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制,将含有HN基因的重组质粒pVHN经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色分析肿瘤细胞凋亡;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)和活性氧水平变化;流式细胞仪分析MHC-Ⅰ分子表达;底物染色反应检测caspase-3活性.结果重组质粒pVHN转染人肺癌细胞SPC-A148h后,细胞活力明显降低;AO/EB染色可见明显的细胞凋亡形态学变化;与空质粒对照相比,线粒体ΔΨm下降(P<0·01),活性氧水平升高(P<0·05);细胞表面MHC-Ⅰ分子表达上调(P>0·05);caspase-3活性增强(P<0·01).以上结果提示,新城疫病毒HN基因能够上调SPC-A1细胞表面MHC-Ⅰ分子表达,并通过上调ROS水平,下调线粒体ΔΨm,进而激活caspase-3,最终诱导人肺癌细胞凋亡. 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 人肺癌细胞 凋亡
下载PDF
新型抗HIV-1重组导向制剂SL41在毕赤酵母中的表达及活性实验 被引量：8
6
作者 李昌 王宏 +5 位作者 金宁一 金洪涛 刘玉生 于芳 李子健 张立树 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1493-1496,共4页
以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxinA,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴... 以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxinA,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴斯德菌毕赤酵母GS115中,经His+MutS表型鉴定、PCR分析以及G418筛选获得高拷贝重组转化子.摇瓶培养、甲醇诱导表达、SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达,表达量最高可达到47.9 mg/L.目的蛋白经初步纯化后,用于制备的HIV-1感染靶细胞复制模型进行抗体亲和力测定、细胞结合活性测定和细胞杀伤活性研究,结果显示,目的蛋白能够很好地与靶细胞模型中的HIV-1外膜蛋白gp160发生结合反应,并可介导特异的CTL反应,对靶细胞具有明显的杀伤活性,表明获得了具有生物活性的抗HIV-1重组导向制剂. 展开更多
关键词 HIV-1 重组导向制剂 单链抗体 金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 分泌表达 毕赤酵母
下载PDF
我国部分地区鹿、牛群中戊型肝炎病毒血清流行病学调查 被引量：7
7
作者 李红文 金宁一 +3 位作者 屈勇刚 朱光泽 孙中锋 王全凯 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第6期401-403,共3页
目的调查我国部分地区鹿和牛群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法采集我国某地区13个鹿场780份鹿血,2个散养鹿群18份血和长春地区牛血80份,分离血清。应用抗HEV抗体酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样品进行抗HEV抗体检测。用χ2检验... 目的调查我国部分地区鹿和牛群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法采集我国某地区13个鹿场780份鹿血,2个散养鹿群18份血和长春地区牛血80份,分离血清。应用抗HEV抗体酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样品进行抗HEV抗体检测。用χ2检验分析不同养殖场鹿血清HEV抗体水平。结果798份鹿血清抗HEV抗体阳性率为43.61%。13个集约化养殖鹿场中有5个鹿场的血清样品抗体呈阳性,阳性率分别为48.02%、47.25%、60.69%、41.94%、40.91%;其余8个鹿场的血清样品均为阴性。两个散养鹿群的抗体阳性率分别为40.00%和46.15%。80份牛血清样品的抗体阳性率为20%。结论我国鹿群尤其是散养鹿群普遍存在HEV感染。牛群也存在较高的HEV感染率。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 血清流行病学 鹿 牛
下载PDF
鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用 被引量：5
8
作者 连海 金宁一 +6 位作者 李霄 陈立刚 张静敏 管国芳 孙丽丽 李雪梅 郑洪玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期229-232,共4页
目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,... 目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 凋亡素 人白细胞介素18 肝癌细胞 凋亡
下载PDF
实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CD109蛋白的表达 被引量：7
9
作者 张静敏 金宁一 +4 位作者 连海 李霄 金毅 安汝国 高桥雅英 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期626-628,634,共4页
目的CD109是最近克隆到的一种细胞表面抗原,为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白,属于含硫酯的α2巨球蛋白家族成员,本研究的目的是探讨CD109基因在人正常组织及癌组织中的分布。方法使用实时荧光定量PCR方法分析了CD109在人正常组织及癌组... 目的CD109是最近克隆到的一种细胞表面抗原,为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白,属于含硫酯的α2巨球蛋白家族成员,本研究的目的是探讨CD109基因在人正常组织及癌组织中的分布。方法使用实时荧光定量PCR方法分析了CD109在人正常组织及癌组织中的表达。结果研究结果表明,该蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中最高,而在其他组织中较低,在癌组织标本中检测到CD109表达水平上调。结论以上结果提示表达在细胞表面的CD109蛋白可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。 展开更多
关键词 CD109 实时荧光定量PCR 癌组织
下载PDF
表达新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒的构建及其抑瘤作用 被引量：5
10
作者 李雪梅 金宁一 +4 位作者 李霄 连海 管国芳 孙丽丽 陈立刚 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第2期112-115,共4页
目的：构建表达新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。方法：以野生型鸡痘病毒(fowl poxvirus,FPV)282 E4株为载体,... 目的：构建表达新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。方法：以野生型鸡痘病毒(fowl poxvirus,FPV)282 E4株为载体,构建表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN。采用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyribouri- dine,BrdU)加压法筛选重组体,并通过RT-PCR和Western blot等方法对其进行鉴定。采用噻唑蓝(methylthiazoletetrazolium,MTT)染色法检测vFVHN对人肝癌细胞SMMC7721的杀伤率,并通过检测抑瘤率观察其在C57BL/6小鼠荷肝癌模型的抑瘤效果。结果：成功构建重组鸡痘病毒vFVHN,其对SMMC7721细胞的杀伤率为43．37%,对C57BL/6小鼠肝癌模型的抑瘤率为20．65%。结论：重组鸡痘病毒vFVHN可有效杀伤体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,并对C57BL/6小鼠荷肝癌模型体内的实体肿瘤有一定抑制作用。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 HN基因 肝癌细胞SMMC7721
下载PDF
小鼠对HIV-2gp105核酸疫苗免疫应答的研究 被引量：5
11
作者 李子健 金宁一 +1 位作者 江文正 张立树 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期86-89,共4页
　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法... 　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法检测小鼠血清抗HIV -2抗体, 用流式细胞仪测定CD4+、CD8+ T细胞亚群数, 以乳酸脱氢霉释放法检测脾特异性CTL的杀伤活性。结果: 重组质粒pVAX1 -gp105免疫组小鼠的血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及特异性CTL的杀伤活性, 均明显高于对照组, 分别为P<0. 01, P<0. 05和P<0. 01。结论: HIV -2gp105核酸疫苗能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。 展开更多
关键词 HIV-2 gp105 DNA疫苗 免疫应答
下载PDF
乳酸菌质粒提取方法的建立 被引量：3
12
作者 马海利 金宁一 +3 位作者 李昌 杜桢 阚秋霞 陈晓月 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期237-239,247,共4页
目的建立简便、快速、安全的乳酸菌质粒提取方法。方法将文献报道的乳酸菌质粒提取方法和大肠杆菌质粒提取方法相结合,建立乳酸菌质粒提取方法。通过方法比较、溶菌酶浓度优化和酶切分析,验证该方法的可行性。结果用所建立的方法提取的... 目的建立简便、快速、安全的乳酸菌质粒提取方法。方法将文献报道的乳酸菌质粒提取方法和大肠杆菌质粒提取方法相结合,建立乳酸菌质粒提取方法。通过方法比较、溶菌酶浓度优化和酶切分析,验证该方法的可行性。结果用所建立的方法提取的乳酸菌质粒电泳与酶切图谱与文献报道的提取方法相比均无明显差异。溶菌酶最佳浓度为10mg/ml,避免了毒性物质溴化乙锭的应用,减少了溶菌酶的用量和溶液体积。结论所建立的方法可用于乳酸菌质粒的快速提取,为乳酸菌分子生物学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 质粒 提取 溶菌酶
下载PDF
埃博拉出血热 被引量：5
13
作者 鲁会军 金宁一 张英 《传染病信息》 2007年第2期97-99,106,共4页
　　埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EBHF)是一种病死率很高的出血热,病原属丝状病毒,与同科的马尔堡病毒同属高致病性的甲类病毒,但免疫原性不同.EBHF在中非热带雨林地区和东南非洲热带大草原已流行了几个世纪,但一直未引起注... 　　埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EBHF)是一种病死率很高的出血热,病原属丝状病毒,与同科的马尔堡病毒同属高致病性的甲类病毒,但免疫原性不同.EBHF在中非热带雨林地区和东南非洲热带大草原已流行了几个世纪,但一直未引起注意,1976年EBHF在非洲苏丹和扎伊尔相继暴发流行,引起了广泛重视,该病毒以扎伊尔的埃博拉河命名为埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV),是人类所知最为恐怖、致命病毒之一,同艾滋病病毒相比,它潜伏期短、病死快、病死率高[1-3].…… 展开更多
关键词 埃博拉出血热 热带雨林地区 免疫原性 非洲热带 致病性 丝状病毒属 丝状病毒科 血清谷草转氨酶 去氧胆酸钠 博拉河
下载PDF
pVVP3IL-18HN核酸疫苗的构建及其对喉癌细胞杀伤作用的研究 被引量：4
14
作者 管国芳 金宁一 +5 位作者 米志强 李霄 连海 金春顺 孙丽丽 文连姬 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期566-570,共5页
目的通过构建共表达凋亡素基因、新城疫病毒HN基因和白介素18(interleukin-18,IL-18)基因的核酸疫苗,观察联合应用此三种基因对喉癌细胞的杀伤效应。方法在真核表达质粒pVAX1中的CMV启动子下游插入凋亡素基因和含有IL-18HN嵌合基因并携... 目的通过构建共表达凋亡素基因、新城疫病毒HN基因和白介素18(interleukin-18,IL-18)基因的核酸疫苗,观察联合应用此三种基因对喉癌细胞的杀伤效应。方法在真核表达质粒pVAX1中的CMV启动子下游插入凋亡素基因和含有IL-18HN嵌合基因并携带IRES启动子的基因片段,构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pVVP3IL-18HN,经RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blot法检测外源基因的表达。采用脂质体介导法将构建的重组质粒pVVP3IL-18HN体外转染Hep-2细胞,运用MTT法检测不同质粒浓度、不同作用时间,该重组质粒对喉癌细胞Hep-2的杀伤率。结果pVVP3IL-18HN可有效杀伤喉癌细胞,且在作用72h、质粒浓度为20μg/ml时杀伤率最高,达61.9%。结论重组质粒pVVP3IL-18HN能有效杀伤Hep-2细胞,可用于喉癌的治疗和研究。 展开更多
关键词 pVVP3IL-18HN 核酸疫苗 喉癌 肿瘤细胞 杀伤作用
原文传递
治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价 被引量：2
15
作者 宋英今 金宁一 +3 位作者 张立树 李子建 金洪涛 郎守民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期126-128,共3页
目的　构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法　将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫... 目的　构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法　将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果　构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论　所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。 展开更多
关键词 HIV-1 核酸疫苗质粒 治疗性 特异性抗体 MEG 恒河猴 多表位抗原 原基 免疫效果 ELISA试剂盒
下载PDF
人-禽双价流感新型DNA疫苗构建及免疫保护实验研究 被引量：5
16
作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 张金双 白靓 谭磊 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2009年第6期534-541,共8页
流感病毒是威胁人类和动物健康的重要病原.研究表明,流感大流行株的形成与人流感和禽流感毒株基因重配密切相关.因此在目前流感流行趋势下,在人流感和禽流感疫苗开发中考虑对人流感和禽流感流行亚型进行共预防具有重要意义.本研究针对人... 流感病毒是威胁人类和动物健康的重要病原.研究表明,流感大流行株的形成与人流感和禽流感毒株基因重配密切相关.因此在目前流感流行趋势下,在人流感和禽流感疫苗开发中考虑对人流感和禽流感流行亚型进行共预防具有重要意义.本研究针对人-禽多价流感疫苗进行了尝试,构建了共表达H5亚型HA和H3亚型主要抗原区HA1的DNA疫苗pVAX1-H5/H3,并进行了小鼠免疫攻毒研究.结果表明,攻毒前pVAX1-H5/H3有效诱导小鼠产生了针对H5HA和H3HA1的体液抗体和细胞免疫应答.当采用H5亚型和H3亚型流感病毒攻击时,pVAX1-H5/H3实验组小鼠对病毒攻击产生了抵抗作用,显示了更快的体重回复及肺部病毒清除速度.在H3亚型流感保护方面,pVAX1-H5/H3作用显著优于单表达H3HA1的pVAX1-H3.结果证实,共表达双亚型HA策略可对相关流感病毒攻击产生保护,不同HA间未发现免疫干扰现象,同时存在潜在的增益效果.本研究为人-禽多价流感疫苗的研发奠定了基础. 展开更多
关键词 人流感 禽流感 HA DNA疫苗
原文传递
共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建 被引量：3
17
作者 刘慧娟 金宁一 +6 位作者 马鸣潇 金明兰 张林 李旭 计越 鲁会军 金扩世 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期20-23,共4页
目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒... 目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C-P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C-P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果:经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论:成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 鸡痘病毒活载体 P1-2A基因 IL-18基因 3C基因
下载PDF
H5-H7双价禽流感核酸疫苗免疫研究 被引量：4
18
作者 张丹 鲁会军 +6 位作者 谭磊 刘存霞 胡博 刘燕瑜 刘昊 金扩世 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期184-188,共5页
由于禽流感的高度变异性,免疫后不同亚型之间难以得到交叉保护,以致病毒得以逃避宿主免疫系统的监视,多价核酸禽流感疫苗具有可以保护不同亚型病毒攻击的特点。本试验设计并构建了包含禽流感H5HA和H7HA1基因的双价真核表达质粒pV-H5-H7... 由于禽流感的高度变异性,免疫后不同亚型之间难以得到交叉保护,以致病毒得以逃避宿主免疫系统的监视,多价核酸禽流感疫苗具有可以保护不同亚型病毒攻击的特点。本试验设计并构建了包含禽流感H5HA和H7HA1基因的双价真核表达质粒pV-H5-H7及单独表达H5HA和H7HA1的pV-H5和pV-H7HA1。通过RT-PCR,间接免疫荧光（IFA）等方法验证构建质粒的正确性和其表达蛋白的免疫原性。0,21 d分别免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,设立双价疫苗组,单表达免疫组和对照组。免疫后35 d用HPAIV H5N1进行致死性攻击。结果显示免疫组均可刺激机体产生H5特异性抗体,pV-H5-H7诱导产生的抗体对H5N1的攻毒保护率为80%,而pV-H5单表达的攻毒保护率也为80%。表明本实验构建的双价禽流感核酸疫苗的免疫效果与单表达组相当（P〉0.05）,为多价禽流感核酸疫苗的研制提供了基础。 展开更多
关键词 禽流感 H5 H7亚型 核酸疫苗 免疫攻毒
原文传递
人干扰素诱导跨膜蛋白基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：4
19
作者 袁森 田明尧 +7 位作者 崔鹤馨 靖杰 刘昊 刘存霞 任静强 姜庆利 薛斐 金宁一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期710-716,725,共8页
目的建立人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank中登录的人IFITM1、2、3及β-actin基因序列,分别设计4对特异性引物,以质粒pVAX1-IFITM1、2、3和p... 目的建立人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank中登录的人IFITM1、2、3及β-actin基因序列,分别设计4对特异性引物,以质粒pVAX1-IFITM1、2、3和pMD18-T-β-actin为模板,分别进行PCR及实时荧光定量PCR扩增,优化实时荧光定量PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线及扩增曲线,建立实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的重复性、灵敏度及特异性。结果各质粒的PCR及实时荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均可见大小与理论值相符的特异性条带。IFITM1、2、3和β-actin的最佳荧光定量PCR引物浓度分别为0.2、0.5、0.4和0.5μl,最佳退火温度为55℃。各质粒标准曲线的循环数与起始模板拷贝数的相关性均较好(R2分别为0.998、0.990、0.990和0.995),扩增效率分别为106.284%、101.030%、104.929%和101.962%。IFITM1、2、3基因不同拷贝数的试验内CV为0.14%-0.72%,试验间CV为0.77%-1.58%;灵敏度分别为2.52×100、1.3×100和3.7×101copies;该方法未扩增出鸡肝脏及禽流感病毒H3N2 cDNA,可特异性扩增B型流感病毒cDNA,各标准质粒的溶解曲线约在同一温度出现1个单峰。结论已成功建立了IFITM1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法具有较高的重复性、灵敏度及特异性,为进一步研究IFITM1、2、3的功能及其基因表达与肿瘤发生发展的相关性奠定了基础。 展开更多
关键词 干扰素诱导跨膜蛋白 实时荧光定量PCR
原文传递
基于SFVRNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用 被引量：2
20
作者 张钰 金宁一 +7 位作者 李霄 朱继红 陈漉 刘立明 李昌 佟敬山 李群 陈勇志 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第1期20-24,共5页
目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HC... 目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116,以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平,以AO/EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡,以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL/6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型,瘤体内注射pIRSFV-HN(共3次),检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果:成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白,对照细胞则无表达;转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象;该细胞的增殖受到明显抑制,最大抑制率达55.34%。移植瘤体内注射疫苗后,荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ水平显著升高(P<0.05),其CTL活性也显著升高(P<0.01)。结论:基于SFVRNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞;在体内可促使免疫趋向Th1优势,提高其抑瘤免疫水平。 展开更多
关键词 塞姆利基森林病毒 RNA复制子 新城疫病毒 核酸疫苗 结肠癌 抑瘤作用 细胞毒性T淋巴细胞
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 6 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部