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重组人源化抗CD52单克隆抗体N-糖糖型的分析方法的验证
1
作者 叶星 宋兰兰 +4 位作者 赵晓瑞 汪艳艳 李奇蒙 王倩 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第5期25-32,共8页
目的 对重组人源化抗CD52单克隆抗体N-糖糖型的分析方法亲水相互作用液相色谱法进行方法学验证,并根据多批次产品的检测结果制定质量标准。方法 参考《中华人民共和国药典》2020版(三部)通则9101中相关要求及重组人源化抗CD52单克隆抗... 目的 对重组人源化抗CD52单克隆抗体N-糖糖型的分析方法亲水相互作用液相色谱法进行方法学验证,并根据多批次产品的检测结果制定质量标准。方法 参考《中华人民共和国药典》2020版(三部)通则9101中相关要求及重组人源化抗CD52单克隆抗体的制造与检定规程,对单克隆抗体N-糖糖型的分析方法进行方法学验证,验证项目包括专属性、线性、准确度、精密度、范围和耐用性。对多批次重组人源化抗CD52单克隆抗体产品(≥15批)的N-糖糖型的检测结果进行分析,计算非岩藻糖及半乳糖的相对含量,确定质量标准。结果 空白对照、阴性对照对重组人源化抗CD52单克隆抗体N-糖糖型的分析无干扰;在60~300μg的抗体含量范围内线性良好,r~2≥0.99;高、中、低3种抗体含量的回收率均在96%~106%;仪器进样重复性、样品制备重复性及中间精密度均良好,峰面积百分比及保留时间的RSD均≤5%;耐用性考察时各条件下的峰面积百分比及保留时间的RSD均≤5%。对多批次重组人源化抗CD52单克隆抗体的检定结果进行统计分析,确定N-糖糖型分析的质量标准为非岩藻糖相对含量4%~20%,半乳糖相对含量≥25%。结论 方法学验证结果显示,所有考察项目中该分析方法均满足要求,可用于重组人源化抗CD52单克隆抗体N-糖糖型的分析。本实验建立的相关质量标准适用于重组人源化抗CD52单克隆抗体生产过程中N-糖糖型的质量控制,也可作为该产品未来商业化生产时放行标准的制定依据。 展开更多
关键词 抗CD52单克隆抗体 人源化 N-糖基化 亲水相互作用液相色谱法 高效液相色谱法 方法学验证 非岩藻糖 半乳糖:生物类似药
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不同降温温度对抗破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株生长及蛋白表达的影响
2
作者 宋兰兰 叶星 +4 位作者 南建军 郭岚 徐玺丰 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第6期20-24,共5页
目的摸索适合抗破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株生长和抗体蛋白表达的降温温度,为细胞培养工艺的建立提供参考。方法在体积为125 mL的培养瓶中,按50万个/mL的初始密度接种CHO工程细胞种子,采用补料分批培养模式,在转速125 r/min,CO_(2... 目的摸索适合抗破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株生长和抗体蛋白表达的降温温度,为细胞培养工艺的建立提供参考。方法在体积为125 mL的培养瓶中,按50万个/mL的初始密度接种CHO工程细胞种子,采用补料分批培养模式,在转速125 r/min,CO_(2)浓度5.0%,湿度80%的温控培养摇床中进行细胞培养。对照组培养温度设定为37℃恒温;试验组初始培养温度设定为37℃,待培养瓶中的细胞密度达到1000万个/mL时,将培养瓶分别转到35℃、34℃和33℃的摇床继续培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度、细胞活率、葡萄糖、乳酸、NH^(+)_(4)、渗透压和抗体蛋白滴度。当细胞活率<80%时,停止培养。与对照组比较,选择细胞生长较好,代谢副产物浓度较低且抗体蛋白滴度最高的温度为最终降温温度。结果对照组的最高活细胞密度为2000万个/mL,试验组37℃转到35℃、37℃转到34℃和37℃转到33℃培养条件下的最高活细胞密度分别为2210万、1940万和1890万个/mL;与对照组相比,试验组培养后期的细胞活率维持较高水平;葡萄糖、乳酸和NH^(+)_(4)代谢趋势一致,且试验组代谢副产物乳酸和NH^(+)_(4)浓度低于对照组;各培养组渗透压变化趋势一致,都在可接受范围内;最终抗体蛋白滴度对照组为1196 mg/L,试验组37℃转到35℃、37℃转到34℃和37℃转到33℃的分别为1772、1962和1929 mg/L。结论选取34℃为破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株的降温培养温度,进行后续培养工艺的建立。 展开更多
关键词 抗破伤风毒素抗体 工程细胞株 中国仓鼠卵巢细胞 降温培养 补料分批培养 细胞代谢 蛋白表达
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全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的筛选及功能验证
3
作者 安晨 陈继军 +4 位作者 秦海艳 宋兰兰 南建军 叶星 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第6期1-7,共7页
目的在噬菌体抗体颗粒水平及全分子抗体水平,对候选抗狂犬病病毒抗体进行筛选与抗体功能验证,以获得理想的备选抗体。方法通过固相包被法从全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库中筛选特异性抗体并对获得的抗体进行中和活性验证,进而挑... 目的在噬菌体抗体颗粒水平及全分子抗体水平,对候选抗狂犬病病毒抗体进行筛选与抗体功能验证,以获得理想的备选抗体。方法通过固相包被法从全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库中筛选特异性抗体并对获得的抗体进行中和活性验证,进而挑选中和活性较高的抗体构建真核表达质粒,瞬时转染HEK293E细胞,对全分子抗体进行功能验证。结果对42株已获得的抗狂犬病病毒抗体在噬菌体抗体颗粒水平进行了中和活性验证,其中21株抗体RFFIT值>0.5 IU/mL;筛选出的4株抗体在全分子抗体水平进行中和活性验证,4株抗体RFFIT值>0.5 IU/mL。结论通过在噬菌体抗体颗粒水平及全分子抗体水平对候选抗狂犬病病毒抗体进行筛选与抗体功能验证,获得了4株具有明确中和活性的抗狂犬病病毒单克隆抗体。 展开更多
关键词 全人源单克隆抗体 狂犬病病毒 噬菌体抗体颗粒 中和活性 快速荧光灶抑制试验
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狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞灌流培养中细胞特异性灌流速率的研究
4
作者 宋兰兰 安晨 +5 位作者 汪艳艳 郭岚 张祺 唐金舟 马树奇 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期41-45,共5页
目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CS... 目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO_(2)浓度5.0%、湿度80%和温度37℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样品,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1~5的各管中,按0.02~0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细胞后,继续培养。如细胞悬液中的葡萄糖质量浓度≤3 g/L时,用300 g/L的葡萄糖补至8 g/L。CHO细胞培养约19 d时,结束实验。根据CHO细胞生长、细胞代谢、抗体蛋白滴度(titer)、收获液总体积和抗体蛋白总收量,确定适合本细胞生长和表达的CSPR。结果 在CSPR 1~2[0.02~0.03 nL/(细胞·d)]的条件下灌流培养时,最高VCD分别为1 059万个/mL、1 298万个/mL,细胞活率在培养中后期下降较快,抗体蛋白总收量分别为98 mg和112 mg。CSPR3~5[0.04~0.06 nL/(细胞·d)]条件下的最高VCD分别为1 422万个/mL、1 523万个/mL和1538万个/mL,细胞活率维持较好,抗体蛋白总收量分别为119 mg、120 mg和107 mg。结论 当CSPR为0.04~0.05 nL/(细胞·d)时,细胞生长和抗体蛋白表达情况较好,为适合本细胞株灌流培养的CSPR。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 CHO细胞 灌流培养 细胞特异性灌流速率 细胞生长 蛋白表达
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