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鸭坦布苏病毒单克隆抗体的制备和治疗效果分析
1
作者 王丹娜 乌兰 李三 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化E.coli BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳... 为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化E.coli BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析E蛋白表达,使用镍柱亲和层析纯化E蛋白,将E蛋白与弗氏佐剂混合、乳化,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠3次后,取小鼠脾脏,分离脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下,将脾细胞与SP2/0细胞融合,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选分泌抗E蛋白抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot进行单克隆抗体鉴定,通过间接免疫荧光技术检测DTMUV,病毒中和试验评价单克隆抗体中和DTMUV感染的能力,并评价单克隆抗体治疗DTMUV感染小鼠的能力。结果显示,含质粒pET30-E的E.coli BL21经诱导后可在裂解的沉淀物中表达E蛋白;制备的E蛋白单克隆抗体4A1可以与E蛋白发生免疫反应,不与鸭A型肝炎病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应;4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性,且能够很好地识别DTMUV并与之发生中和反应,可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。结果表明,本试验制备的单克隆抗体4A1在应对DTMUV感染方面具有潜在治疗价值。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 单克隆抗体 中和活性 治疗效果
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不同免疫增强剂对杆状病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白免疫效果的影响 被引量：2
2
作者 汤波 刘奇 +7 位作者 吕帅阳 石磊 王建华 徐慧敏 于萍萍 刘飞 石艳丽 孙石静 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期526-531,共6页
为了研究不同免疫增强剂对猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-Cap)免疫效果的影响,本研究将BALB/c小鼠随机分为10组,分别为非免疫对照组(Control组),Cap蛋白免疫对照组(Cap组),佐剂疫苗免疫对照组(15A组),以及佐剂组(IL-2组、Poly I:C组、R84... 为了研究不同免疫增强剂对猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-Cap)免疫效果的影响,本研究将BALB/c小鼠随机分为10组,分别为非免疫对照组(Control组),Cap蛋白免疫对照组(Cap组),佐剂疫苗免疫对照组(15A组),以及佐剂组(IL-2组、Poly I:C组、R848组、QuilA组、QS21组、MPLA组)、商品疫苗免疫对照组(Con-V组),选择6种不同的免疫增强剂(IL-2、PolyI:C、R848、Quil-A、QS21、MPLA)分别与等量PCV2-Cap蛋白(15μg/只)混合制备疫苗,免疫BALB/c小鼠,免疫后定期采血,采用相应试剂盒检测PCV2抗体和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12水平;免疫28 d,对所有小鼠以0.5 mL/只剂量腹腔注射PCV2 SX-07株(1×106.0TCID50/mL),攻毒后21 d采集全血,利用PCR方法检测PCV2病毒血症。结果显示,各佐剂疫苗免疫后对小鼠存在短暂的刺激,但能快速恢复正常,对小鼠安全性优于对照商品疫苗;抗体检测结果显示,首免后21 d,IL-2组、QuilA组和MPLA组小鼠抗体水平高于其他佐剂组,IL-2组、QuilA组均高于Cap组和15A组,且差异极显著(P<0.05),IL-2组、QuilA组和MPLA组高于Con-V组,但差异不显著(P>0.05);首免后28 d抗体检测结果显示,IL-2组、QuilA组、QS21组和MPLA组小鼠抗体水平高于Con-V组,但差异不显著(P>0.05),且所有佐剂组和Con-V组均高于Cap组,且差异均显著(P<0.05);细胞因子检测结果显示,MPLA组小鼠的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12等各细胞因子表达水平均显著高于其他组(P<0.05);QS21组TNF-α的表达水平最高;MPLA、QS21、IL-2、R848诱导小鼠特异性细胞免疫的能力高于商品佐剂和商品疫苗;病毒血症检测结果显示,Control组中小鼠PCV2攻毒后均为PCV2病毒血症阳性,Cap蛋白组中33.3%小鼠为阳性,15A组中16.7%为阳性,其他组均为阴性。综合以上研究结果首次表明,在6种选用的增强剂中,MPLA、IL-2和QS21既能够提高PCV2 Cap蛋白疫苗免疫后机体的抗体水平,又能显著提高免疫后的细胞免� 展开更多
关键词 免疫增强剂 免疫效果 PCV2 CAP蛋白 细胞因子
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猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法的建立 被引量：2
3
作者 汤波 车艳杰 +4 位作者 徐慧敏 石磊 卢晓楠 王海燕 郭鑫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期118-121,共4页
为了建立猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法,试验以猪肺炎支原体全菌体为包被抗原,以抗猪肺炎支原体高免血清为检测抗体,建立猪肺炎支原体竞争ELISA抗原检测方法,并验证方法的灵敏度、特异性,再根据量反应平行线测定法... 为了建立猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法,试验以猪肺炎支原体全菌体为包被抗原,以抗猪肺炎支原体高免血清为检测抗体,建立猪肺炎支原体竞争ELISA抗原检测方法,并验证方法的灵敏度、特异性,再根据量反应平行线测定法原理建立猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值检测方法,并考察方法的批内和批间重复性。结果表明:建立了猪肺炎支原体竞争ELISA反应体系,包被抗原浓度为32μg/mL,阳性血清稀释度为1∶25 000,阴性血清稀释度为1∶320;封闭液为5%脱脂奶粉,封闭时间为1.5 h;酶标二抗稀释度为1∶20 000,作用时间为1.5 h;TMB显色时间为室温15 min;试验成立条件为阳性血清OD;值0.7~2.0,阴性血清OD;值<0.3;该方法线性相关系数为0.995 5,线性范围为10~1 280μg/mL,与猪细小病毒、猪流感病毒、猪鼻支原体等8种异源蛋白无交叉反应。在猪肺炎支原体竞争ELISA抗原检测体系的基础上成功建立了灭活疫苗相对效力值检测方法,该法的批内变异系数<5%,批间变异系数<10%;该方法检测的相对效力值与动物免疫攻毒保护试验结果呈正相关。说明本试验所建立的猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法可以用于测定猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力,替代动物试验检测。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 灭活疫苗 竞争ELISA 相对效力值 平行线测定法 替代检测
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鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达与反应原性分析 被引量：1
4
作者 曲哲会 张喜文 +9 位作者 齐志颖 李卓燕 李盼盼 吕硕硕 张雯 赵聘 焦凤超 赵云焕 黄立 王丹娜 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第23期67-71,共5页
为了利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)E蛋白,试验利用RT-PCR方法扩增DTMUV E基因,经核苷酸序列测定后,与pET-30a(+)载体连接,然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,构建重组表达载体pET-DTMUV-E,再转化至... 为了利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)E蛋白,试验利用RT-PCR方法扩增DTMUV E基因,经核苷酸序列测定后,与pET-30a(+)载体连接,然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,构建重组表达载体pET-DTMUV-E,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达DTMUV E蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物,Western-blot方法鉴定反应原性,分别从诱导时间和IPTG浓度方面对表达条件进行优化,并进行表达产物的可溶性分析。结果表明:克隆得到大小约为1 503 bp的DTMUV E基因,并成功与pET-30a(+)载体连接,获得分子质量约65 ku的融合蛋白,可以与兔抗6×His多克隆抗体和鸡抗DTMUV多克隆抗体发生特异性免疫反应,终浓度为4 mmol/L的IPTG诱导4 h为最佳表达条件,重组蛋白DTMUV E主要以包涵体形式表达。说明利用原核表达系统表达的以包涵体形式存在的DTMUV E蛋白,具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 原核表达系统 反应原性 可溶性分析
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家禽养殖现状及禽用疫苗企业发展探讨
5
作者 陈硕 张紫璇 +4 位作者 王敏 张杏 刘如月 聂思静 吕帅阳 《中国禽业导刊》 2022年第7期54-56,共3页
近年来在我国养殖业飞速变更的形势下,禽产品消费逐渐上升,人们生活中对于食品质量的要求也在不断提升。作为家禽健康的第一道防线,禽用疫苗企业肩负着保证禽产品质量安全的重任。本文分析了家禽养殖现状及禽用疫苗企业如何应对当前形势... 近年来在我国养殖业飞速变更的形势下,禽产品消费逐渐上升,人们生活中对于食品质量的要求也在不断提升。作为家禽健康的第一道防线,禽用疫苗企业肩负着保证禽产品质量安全的重任。本文分析了家禽养殖现状及禽用疫苗企业如何应对当前形势,提出发展建议,以期为禽用疫苗企业提供一定的参考。 展开更多
关键词 家禽养殖 禽产品 第一道防线 禽用疫苗 食品质量 养殖业 家禽健康
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蜂胶佐剂在兽用疫苗中的应用
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作者 王建华 徐慧敏 《农业技术与装备》 2022年第5期140-141,144,共3页
随着相关研究实践的不断深入,蜂胶在兽用疫苗层面的应用实践也已经得到了业内人士的关注和重视。文章结合工作经验,在分析整合国内外学者研究现状的基础上,对蜂胶佐剂在兽用疫苗中的应用问题进行了研究论述,希望能够进一步推进各项细节... 随着相关研究实践的不断深入,蜂胶在兽用疫苗层面的应用实践也已经得到了业内人士的关注和重视。文章结合工作经验,在分析整合国内外学者研究现状的基础上,对蜂胶佐剂在兽用疫苗中的应用问题进行了研究论述,希望能够进一步推进各项细节工作的优化调整,营造出全新的兽用免疫佐剂应用开发格局。 展开更多
关键词 蜂胶 兽用疫苗佐剂 应用实践
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