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菊花花瓣原生质体分离与瞬时转化体系的建立
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作者 李志美 张碧佩 +7 位作者 伍青 吕金 赵鑫 潘燕 郭炜珊 周厚高 王凤兰 罗红辉 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1951-1963,共13页
本研究以3个菊花(Chrysanthemum morifolium)品种‘帝王水晶’(‘Chrystal Regal’)、‘紫红托桂’(‘Zihong Tuogui’)和‘紫风车’(‘Zi Fengche’)为实验材料,通过轻摇酶解法及酶解前真空处理制备优质的菊花原生质体,并初步以改良的... 本研究以3个菊花(Chrysanthemum morifolium)品种‘帝王水晶’(‘Chrystal Regal’)、‘紫红托桂’(‘Zihong Tuogui’)和‘紫风车’(‘Zi Fengche’)为实验材料,通过轻摇酶解法及酶解前真空处理制备优质的菊花原生质体,并初步以改良的聚乙二醇4000(PEG 4000)介导转化结合热激处理技术建立了菊花花瓣原生质体瞬时转化体系。结果表明,在菊花花瓣组织中可获得完整并有活力的原生质体数量比叶片中多;其中,采用含10 g·L^(-1)纤维素酶、6 g·L^(-1)离析酶、2 g·L^(-1)崩溃酶和400 mmol·L^(-1)甘露醇的酶解液体系,酶解前抽真空处理20~25 min,并置于摇床中22℃、30 r·min^(-1)轻摇酶解12~14 h,‘帝王水晶’和‘紫风车’花瓣原生质体产量分别可达2.8×10^(5)和7.0×10^(5)个·g^(-1)(FW),活力分别为63.9%和76.9%,能满足瞬时表达实验要求。用等体积的含100 mmol·L^(-1)CaCl_(2)、400 mmol·L^(-1)甘露醇和300 g·L^(-1)PEG 4000的缓冲液体系分别介导3个菊花品种的花瓣原生质体(200μL,2×10^(5)个·mL^(-1))转化,并于28℃热激处理60 s,35S启动的外源基因(OsVPE1-GFP)在花瓣原生质体中瞬时表达的绿色荧光信号较强,瞬时转化效率为30%以上。 展开更多
关键词 菊花 花瓣 叶片 原生质体分离 瞬时转化
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