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细菌内同源重组法构建HBV S区和C区基因非复制型腺病毒载体及其体外表达 被引量：3
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作者 黄呈辉 欧阳玲 +3 位作者 马会慧 汤正好 李刚 姚集鲁 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期438-441,共4页
目的:构建表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的非复制型重组腺病毒载体,并检测他能否在真核细胞中有效表达目的基因。方法:扩增乙肝病毒(HBV)前S_2/S基因和前C/C基因片段,分别亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与5型腺病... 目的:构建表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的非复制型重组腺病毒载体,并检测他能否在真核细胞中有效表达目的基因。方法:扩增乙肝病毒(HBV)前S_2/S基因和前C/C基因片段,分别亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生分别携带HBV S区和C区基因的重组腺病毒载体pAd-HBs和pAd-HBe,经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-HBs和Ad-HBe体,外转染293和Vero细胞,RT-PCR和ELISA法检测目的基因的表达。结果:构建了表达HBsAg和HBeAg基因的重组腺病毒,病毒滴度可达5×10^(12)pfu/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因。结论:成功构建表达HBsAg和HBeAg的重组腺病毒载体,为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础。 展开更多
关键词 细菌内同源重组法 乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒E抗原 非复制型重组腺病毒载体 真核细胞 基因
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抗HBc-ScFv基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及其体外表达 被引量：2
2
作者 汤正好 马会慧 +3 位作者 臧国庆 余永胜 李刚 姚集鲁 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期734-738,共5页
目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因. 方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗卜HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5 型腺病... 目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因. 方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗卜HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5 型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染B15183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd—ScFV,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗HBc scFv基因的重组腺病毒Ad—scFv,体外转染HepG2细胞,PCR和ELISA法检测目的基因及其表达. 结果:构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1015 PFU/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因. 结论:成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础. 展开更多
关键词 缺陷型腺病毒载体 体外表达 基因复制 人源性抗HBc单链抗体 ScFv基因 复制缺陷型腺病毒 ELISA法检测 DNA重组技术 重组腺病毒载体 HepG2细胞 病毒核心蛋白 目的基因 构建表达 真核细胞 293细胞 乙型肝炎 穿梭质粒 基因克隆
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