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云南澜沧拉祜族HLA-DRB1基因多态性研究 被引量：7
1
作者 贾宗剑 付永贵 +8 位作者 潘德京 刘泽寰 陈为民 林蒋海 陈荣祥 李安素 朱玉芳 周大鸣 徐安龙 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期131-136,共6页
采用我们改进的高分辨率基于内含子的PCR -SBT分型方法 ,首次检测云南拉祜族HLA DRB1基因多态性。在 5 5例拉祜族个体中共检出 16种HLA DRB1等位基因 ,最常见的DRB1等位基因是HLA DRB1 12 0 2 1、0 90 12、15 0 11,基因频率分别为 30 .9... 采用我们改进的高分辨率基于内含子的PCR -SBT分型方法 ,首次检测云南拉祜族HLA DRB1基因多态性。在 5 5例拉祜族个体中共检出 16种HLA DRB1等位基因 ,最常见的DRB1等位基因是HLA DRB1 12 0 2 1、0 90 12、15 0 11,基因频率分别为 30 .90 9%、15 .45 5 %、13.6 36 % ,共占拉祜族可检出等位基因的 6 0 % ,其中DRB1 0 413、110 81、1312、1418、15 0 4首次在我国人群中检出 ,并且在世界各地人群中也比较罕见。对拉祜族和世界各地人群的HLA DRB1频率进行了比较 ,分析了HLA DRB1等位基因在各人种中的分布特点 ,并用Neighbor -join ing法进行了聚类分析。比较分析的结果显示拉祜族明显属于中国南方族群 ,未显示出其族源来自北方的痕迹。对此遗传数据和民族学、历史学研究的矛盾 。 展开更多
关键词 云南 拉祜族 PCR-SBT 分型 HLA-DRB1 基因多态性
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云南纳西族HLA-DRB1基因多态性研究及其族源分析 被引量：5
2
作者 贾宗剑 潘德京 +8 位作者 付永贵 陈为民 刘泽寰 林蒋海 朱玉芳 陈荣祥 符志彦 周大鸣 徐安龙 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1107-1115,共9页
首次在国内采用本室改进的高分辨率的基于内含子的PCR -SBT分型方法 ,检测云南纳西族HLA -DRB1基因多态性。在 60例纳西族个体中共检出 37种HLA -DRB1等位基因 ,其显著特点是等位基因的类型检出较多 ,频率分布比较平均 ,除 1 2 0 2 1 ( ... 首次在国内采用本室改进的高分辨率的基于内含子的PCR -SBT分型方法 ,检测云南纳西族HLA -DRB1基因多态性。在 60例纳西族个体中共检出 37种HLA -DRB1等位基因 ,其显著特点是等位基因的类型检出较多 ,频率分布比较平均 ,除 1 2 0 2 1 ( 1 7 5 0 % )外其他的等位基因频率均低于 8% ,其他较常见的等位基因 ( >5 % )还有 1 40 4 ( 7 5 0 % ) ,1 5 0 4 ( 5 83% ) ,0 4 0 5 1 ( 5 83% ) ,0 80 32 ( 5 83% ) ,0 90 1 2 ( 5 % ) ,0 30 1 1 ( 5 % )。这几种中频等位基因共占可检出等位基因的 35 % ,与 1 2 0 2 1一起共占 5 2 49%。其中DRB1 0 30 5、0 4 38、1 1 2 3、1 1 32、1 31 0、0 81 2为首次在我国人群中检出 ,并且在世界各地人群中也比较罕见。对纳西族和世界各地人群的HLA -DRB1频率进行了聚类分析。比较分析的结果显示纳西族明显属于中国南方族群 ,未显示出其族源来自北方的痕迹。根据遗传数据 ,并参照民族学、历史学研究 。 展开更多
关键词 云南 纳西族 PCR-SBT 分型 HLA-DRBI 基因多态性 起源
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凋亡抑制因子Survivin的克隆、高效表达与纯化 被引量：1
3
作者 李海 彭宇 +1 位作者 黎晓天 吴文言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期12-16,共5页
Survivin蛋白抑制细胞的凋亡并参与调控细胞的分裂,在绝大多数肿瘤细胞中均有过量表达。本实验以人肝癌细胞系MHCC-97L总RNA为模板,应用RT-PCR的方法得到survivinc DNA,并构建了重组原核表达载体pET-21b(+)-survivin,导入BL21(DE3)菌株... Survivin蛋白抑制细胞的凋亡并参与调控细胞的分裂,在绝大多数肿瘤细胞中均有过量表达。本实验以人肝癌细胞系MHCC-97L总RNA为模板,应用RT-PCR的方法得到survivinc DNA,并构建了重组原核表达载体pET-21b(+)-survivin,导入BL21(DE3)菌株进行表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量超过总蛋白的60%。Western blot结果表明表达产物与抗人survivin抗体发生特异性反应,经凝胶过滤层析后纯度达到95%以上,为进一步研究靶向Survivin的诊断试剂与抑制剂奠定了基础。 展开更多
关键词 SURVIVIN 克隆 原核表达 纯化
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嗜肺军团菌类真核效应蛋白LegK3抑制酿酒酵母的生长并影响其小泡运输途径 被引量：1
4
作者 王嘉铭 李向辉 +1 位作者 陈爱枫 陆勇军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期417-423,共7页
【目的】为了探索嗜肺军团菌类真核效应蛋白LegK3的功能,并进一步筛选得到其在宿主细胞内的作用靶点,我们利用酿酒酵母作为替代模型研究LegK3对宿主细胞的毒力效应,并针对其作用途径进行了初步分析。【方法】设计引物完整扩增LegK3、Ral... 【目的】为了探索嗜肺军团菌类真核效应蛋白LegK3的功能,并进一步筛选得到其在宿主细胞内的作用靶点,我们利用酿酒酵母作为替代模型研究LegK3对宿主细胞的毒力效应,并针对其作用途径进行了初步分析。【方法】设计引物完整扩增LegK3、RalF、LidA的ORF,其中已知效应蛋白RalF、LidA基因作为对照实验组;扩增片段与酵母表达载体pESC-HK连接构建成重组载体,转化酿酒酵母菌株W303-1A,使用含2%半乳糖的选择培养基进行诱导培养,分别观察酵母细胞的生长抑制和CPY延迟情况;提取诱导前、后的酵母菌体总蛋白用c-myc抗体检测效应蛋白的表达情况;用anti-PGK、anti-CPY抗体检测酿酒酵母CPY的延迟情况。【结果】表达LegK3的酵母菌株出现了生长抑制的现象,并且CPY的成熟受到延迟影响。【结论】LegK3的异源表达能够抑制酿酒酵母的生长并延迟其囊泡蛋白CPY的成熟,推测LegK3可能通过作用于小泡运输途径来抑制真核宿主细胞的生长和分裂,以维持适合嗜肺军团菌繁殖的稳定胞内环境。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 效应蛋白 LegK3 酿酒酵母
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坎地沙坦酯的合成 被引量：5
5
作者 曹日晖 钟庆华 +1 位作者 彭文烈 徐安龙 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期425-427,共3页
以 3-硝基邻苯二甲酸为起始原料 ,经酯化、卤代、重排、还原、闭环等反应制得抗高血压新药坎地沙坦酯 ,优化了中间体的制备工艺 ,并提出了侧链的新法合成工艺。反应总收率 7%。
关键词 坎地沙坦酯 抗高血压药 合成
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盐酸氮斯汀的合成
6
作者 曹日晖 钟庆华 +1 位作者 彭文烈 徐安龙 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-3,共3页
以 N-甲基哌啶 -4 -酮为原料 ,经扩环、酰肼化、缩合等反应合成了抗变态反应药物盐酸氮斯汀 ,反应总收率48.6%。
关键词 盐酸氮Zhuo斯汀 抗变态反应 N-甲基六氢氮杂Zhuo-4-酮 合成
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人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化 被引量：1
7
作者 李海 黎晓天 +1 位作者 彭宇 吴文言 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期39-42,47,共5页
目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extensio... 目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆入质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化。结果经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的目的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在。蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N-端序列的单克隆抗体发生特异性结合。通过Ni2+亲和层析,目的蛋白的纯度可达95%以上。结论实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础。 展开更多
关键词 人趋化因子受体CCR5 重叠延伸拼接 原核表达 纯化
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构建无背景的选择性感染噬菌体
8
作者 陈颖 李海 吴文言 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期484-486,共3页
目的构建一个选择性感染噬菌体(selectively infective phage,SIP)载体。方法删去M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区,并在此位置插入3个内切酶识别位点,用于外源基因的插入,构建成重组噬菌体基因组BP-M13KO7。将重组噬菌体BP-M13KO7的... 目的构建一个选择性感染噬菌体(selectively infective phage,SIP)载体。方法删去M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区,并在此位置插入3个内切酶识别位点,用于外源基因的插入,构建成重组噬菌体基因组BP-M13KO7。将重组噬菌体BP-M13KO7的培养液上清液感染XL1-Blue,检测其感染背景。结果重组噬菌体BP-M13KO7培养液上清液不具有感染性,完全消除了背景。结论通过将M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区置换成3个内切酶识别位点,构建成的重组噬菌体无感染性背景。 展开更多
关键词 选择性感染噬菌体 M13KO7 甘氨酸丰富区
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