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应用分子生物学方法鉴定6群肺炎链球菌血清型 被引量：7
1
作者 陈琼 李康 +4 位作者 梁丽 龙新星 黄洋 石继春 叶强 《微生物学免疫学进展》 2016年第4期12-16,共5页
目的利用分子生物学方法,鉴定26株6群肺炎链球菌的血清型。方法利用6群肺炎链球菌荚膜多糖相关基因设计合成6对特异性引物,PCR扩增26株肺炎链球菌,并对PCR产物进行基因序列的测定及分析。结果26株肺炎链球菌cpsD蛋白229个氨基酸中有7个... 目的利用分子生物学方法,鉴定26株6群肺炎链球菌的血清型。方法利用6群肺炎链球菌荚膜多糖相关基因设计合成6对特异性引物,PCR扩增26株肺炎链球菌,并对PCR产物进行基因序列的测定及分析。结果26株肺炎链球菌cpsD蛋白229个氨基酸中有7个突变点,第220~222位均没有缺失;其中,19株肺炎链球菌具有与wci Nα蛋白氨基酸序列完全一致的氨基酸组成,第150位均为Ala,第38位均为Asp,其余7株与wciN_α蛋白氨基酸序列没有相似性,但与wciN_β蛋白氨基酸序列相似性超过99%;15株wciP蛋白第195位为Ser,11株wci P蛋白第195位为Asn。综合分析比对后,26株6群肺炎链球菌中,11株属于6A型肺炎链球菌,8株属于6B型肺炎链球菌,4株属于6C型肺炎链球菌,3株属于6D型肺炎链球菌。结论分子生物学方法可用于6群肺炎链球菌血清型的鉴定,为完善6群肺炎链球菌的菌种档案提供了实验依据。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 血清型 鉴定 cpsD基因 wciN基因 wciP基因
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高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖及游离多糖的含量 被引量：5
2
作者 唐静 赵丹 +4 位作者 李红 李亚南 李茂光 陈翠萍 叶强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1804-1809,共6页
目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的多糖及游离多糖含量。方法:将疫苗中的有效抗原成分—Hib多糖,其结构为多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP),用6 mol... 目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的多糖及游离多糖含量。方法:将疫苗中的有效抗原成分—Hib多糖,其结构为多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP),用6 mol·L^(-1)盐酸进行水解,得到其核糖醇(ribitol)单体;使用Carbo Pac~?MA1阴离子交换柱(4 mm×250 mm),以580 mmol·L^(-1)氢氧化钠溶液为流动相,流速为0.4 m L·min^(-1),柱温35℃,进样体积100μL,脉冲安培检测器收集信号,核糖醇的含量以峰面积计算得到,再根据核糖醇占PRP干重的质量分数(41.3%),计算出Hib结合疫苗中PRP及游离多糖(Free PRP)的含量,并评估该方法的重复性和再现性。结果:核糖醇质量浓度在0.075~1.05μg·mL^(-1)范围内,与峰面积响应值呈良好的线性关系(r=0.999 9),最低检测限为2.5 ng·mL^(-1);标准品供试溶液连续进样6次,峰面积及保留时间的RSD均小于5%;核糖醇加标回收率在80%~120%之间;对来自5个企业的4个不同批次的Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量进行测定,结果均符合规定。结论:本方法在测定Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量时,样品前处理简单,分离效果好,且灵敏度高,结果稳定,可靠,对控制该疫苗的质量具有重要意义。 展开更多
关键词 B型流感嗜血杆菌结合疫苗 多聚磷酸核糖基核糖醇 核糖醇 阴离子交换色谱 脉冲安培检测
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高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法测定四价脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量 被引量：5
3
作者 唐静 贺鹏飞 +5 位作者 李茂光 李红 李亚南 梁丽 陈翠萍 叶强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第9期1313-1317,共5页
目的 采用高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法（high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD）测定四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A、C、Y、W135群多糖含量,并对该方法进行验证。方法 用... 目的 采用高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法（high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD）测定四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A、C、Y、W135群多糖含量,并对该方法进行验证。方法 用三氟乙酸对四价脑膜炎球菌结合疫苗进行水解,得到各群多糖的水解产物：唾液酸、葡萄糖、半乳糖、6-磷酸葡萄糖胺（ManN-6-P）,采用HPAEC-PAD法,CarboPac PA10分离柱分别测定缓冲提取液中的总唾液酸、葡萄糖、半乳糖、ManN-6-P的含量,利用归一化的峰面积计算相应唾液酸系数,再计算C群脑膜炎球菌唾液酸含量。对HPAEC-PAD法进行验证,并与传统火箭电泳法检测结果进行比较。结果 四价脑膜炎球菌结合疫苗水解后得到的4群单糖均呈良好线性,分离度和峰形均良好;HPAEC-PAD法检测4群糖的日内和中间精密性的RSD均小于5%;各群多糖峰面积的回收率均在80%～120%之间;3批四价脑膜炎球菌多糖疫苗水解后,经HPAEC-PAD法测定的各群多糖含量与传统火箭电泳法测定结果相当。结论 HPAEC-PAD法检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中的A、C、Y、W135群多糖含量准确、简便、快速、可靠,对控制该疫苗的质量具有重要意义。 展开更多
关键词 离子色谱 积分脉冲安培检测 脑膜炎球菌多糖疫苗 多糖
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11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究 被引量：5
4
作者 陈琼 龙新星 +4 位作者 李红 李康 黄洋 陈翠萍 叶强 《微生物学免疫学进展》 2018年第5期49-54,共6页
目的利用分子生物学方法,研究7株11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)。方法根据11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因设计合成5对特异性引物,以7株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定及基因序... 目的利用分子生物学方法,研究7株11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)。方法根据11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因设计合成5对特异性引物,以7株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定及基因序列比对,确定其血清型。多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术分析7株11群肺炎链球菌序列型(ST)。采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和cps基因分别绘制系统发育树。结果根据wcw C、gct和wcj E等3个基因产物确定5株原11A型肺炎链球菌为11A型,无11E型;根据wcwR和gct等2个基因产物确定2株原11B型肺炎链球菌为11B型。获得7株不包括4个合成调控基因(wzg、wzh、wzd和wze)的11群肺炎链球菌cps loci,长度为11～12 kb,11A型具有12个开放式阅读框(ORF),11B型具有11个ORF。5株11A型肺炎链球菌部分cps基因序列差异较大; 2株11B型肺炎链球菌部分cps基因序列相似性高于99%。根据MLST分析发现3种新的ST型。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树和cps基因绘制的系统发育树差异很大。结论从分子水平上确定了11A和11B血清型。获得了5株11A型和2株11B型肺炎链球菌ST型和部分荚膜多糖合成相关基因(cps loci),完善了11群肺炎链球菌的菌种档案。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 荚膜多糖合成相关基因 多位点序列分型 系统发育树
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我国2012年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗质量趋势分析及评价 被引量：4
5
作者 唐静 李亚南 +5 位作者 贺鹏飞 李茂光 李红 梁丽 陈翠萍 叶强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第9期1224-1226,共3页
脑膜炎球菌（meningococcus）,学名为脑膜炎奈瑟球菌（N.meninyitidis）,为流行性脑脊髓膜炎（流脑）的病原菌。脑膜炎球菌性脑膜炎是一种细菌性脑膜炎,因围绕大脑和脊髓的内皮发生严重感染而造成[1]。A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗系用相... 脑膜炎球菌（meningococcus）,学名为脑膜炎奈瑟球菌（N.meninyitidis）,为流行性脑脊髓膜炎（流脑）的病原菌。脑膜炎球菌性脑膜炎是一种细菌性脑膜炎,因围绕大脑和脊髓的内皮发生严重感染而造成[1]。A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗系用相应群的脑膜炎球菌培养液,分别提取和纯化,获得相应群的荚膜多糖抗原,加入适宜稳定剂后冻干制成,用于预防由相应群脑膜炎球菌引起的疾病。 展开更多
关键词 脑膜炎球菌疫苗 质量控制 趋势分析
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应用whaF基因序列鉴定20型肺炎链球菌血清型 被引量：3
6
作者 陈琼 李康 +5 位作者 徐潇 黄洋 李红 王春娥 陈翠萍 叶强 《微生物学免疫学进展》 2016年第2期16-21,共6页
目的应用wha F基因测序方法,对20型肺炎链球菌进行血清型鉴定。方法采用血清凝集法和用20型肺炎链球菌型特异性基因(wci L基因)合成的引物进行PCR扩增,对中国医学细菌保藏管理中心所保藏的20型肺炎链球菌进行血清学鉴定;根据Gen Bank上... 目的应用wha F基因测序方法,对20型肺炎链球菌进行血清型鉴定。方法采用血清凝集法和用20型肺炎链球菌型特异性基因(wci L基因)合成的引物进行PCR扩增,对中国医学细菌保藏管理中心所保藏的20型肺炎链球菌进行血清学鉴定;根据Gen Bank上发表的wha F基因设计合成引物,PCR扩增wha F基因,利用测序获得基因序列,分析wha F基因多态性。结果 7株20型肺炎链球菌菌株均能与20型血清产生血清凝集反应,wci L基因PCR扩增产物,可见与预期相符大小500 bp的特异性条带。wha F基因PCR扩增产物,除20-3外,其余6株菌均可见1 000bp大小与预期相符的PCR扩增产物。wha F基因测序和分析显示:20-2、20-4、20-5、20-7与20B亚型(Gen Bank accession No.:CR931679和JQ653093)的wha F基因序列相同;20-6与20A亚型(Gen Bank accession No.:JQ653094)的wha F基因序列相同;20-1与CR931679和JQ653093相比,在898有点突变(A→C)。20-3的wha F基因比20A亚型和20B亚型的wha F基因均少了约600 bp。结论 20-6为20A亚型肺炎链球菌,20-2、20-4、20-5、20-7均为20B亚型肺炎链球菌。 展开更多
关键词 20型肺炎链球菌 血清型 wha F基因 基因多态性 点突变
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我国ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗趋势分析及质量评价 被引量：3
7
作者 唐静 李亚南 +5 位作者 赵丹 李茂光 李红 梁丽 叶强 陈翠萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期657-661,共5页
ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗是我国于21世纪新研制的疫苗,用于预防由相应群脑膜炎球菌引起的疾病[1-2]。我国对疫苗实行批签发监管制度,2007年签发了第1批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗,迄今为止,由2007年的1家企业至今已有5家企业获得... ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗是我国于21世纪新研制的疫苗,用于预防由相应群脑膜炎球菌引起的疾病[1-2]。我国对疫苗实行批签发监管制度,2007年签发了第1批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗,迄今为止,由2007年的1家企业至今已有5家企业获得了生产文号,共签发近500批制品约4 000万人份。仅2013年,该疫苗批签发85批次,共计7 484 833人份。 展开更多
关键词 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗 趋势分析 质量评价
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人血清中肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体定量ELISA的初步验证 被引量：2
8
作者 李红 李亚南 +5 位作者 石刚 刘文宾 陈琼 王春娥 陈翠萍 叶强 《微生物学免疫学进展》 2017年第3期24-30,共7页
目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中... 目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体进行定量检测,并对该方法的线性、检测限、检测范围、准确度、精密度、特异性进行初步验证。结果该方法检测13份质控血清的12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的范围分别是0.02~4.38 ng/m L、0.14~34.68 ng/m L、0.10~25.20 ng/m L和0.12~29.78 ng/m L,r2均>0.99,最低检测限分别为0.35 ng/m L、0.37 ng/m L、0.44 ng/m L和0.88 ng/m L。准确度为71.15%;试验间CV值均<20%;特异性均>85%。结论肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测,需对准确度、精密度和特异性进一步验证。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 血清 抗体 酶联免疫吸附试验 验证
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1,3,5和7F型肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量检测ELISA方法的验证 被引量：1
9
作者 李红 李亚南 +4 位作者 李茂光 陈琼 王春娥 陈翠萍 叶强 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第13期1551-1555,共5页
目的:验证1,3,5和7F型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法。方法:以国际参考血清007sp为标准,分别测定肺炎国际质控血清盘(12/278)共12份血清中的1,3,5和7F型IgG抗体含量,计算线性、检测限及检测范围;同时测定准确性;连续... 目的:验证1,3,5和7F型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法。方法:以国际参考血清007sp为标准,分别测定肺炎国际质控血清盘(12/278)共12份血清中的1,3,5和7F型IgG抗体含量,计算线性、检测限及检测范围;同时测定准确性;连续测定3份质控血清,计算精密度。利用1份质控血清进行抑制试验,绘制抑制曲线,计算特异性。结果:该方法的相关性、检测范围、检测限均可达到可接受标准,准确性较高,精密度良好,特异性较好。结论:该定量检测方法经过验证可用于肺炎球菌疫苗临床血清抗体检测。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 临床血清 抗体 ELISA 验证
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不同品牌胎牛血清用于肺炎链球菌调理吞噬作用的比较 被引量：2
10
作者 黄洋 徐潇 +5 位作者 李康 李江姣 杜慧竟 郑锐 孙文媛 叶强 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期22-26,共5页
目的 比较不同品牌的胎牛血清用于HL-60细胞分化,以及配制成调理缓冲液后对肺炎链球菌调理吞噬杀菌力的影响。方法 采用5个不同品牌(品牌1~5)的胎牛血清用于HL-60细胞分化培养液和调理缓冲液的配制,计算分化后细胞活力,并进行肺炎链球... 目的 比较不同品牌的胎牛血清用于HL-60细胞分化,以及配制成调理缓冲液后对肺炎链球菌调理吞噬杀菌力的影响。方法 采用5个不同品牌(品牌1~5)的胎牛血清用于HL-60细胞分化培养液和调理缓冲液的配制,计算分化后细胞活力,并进行肺炎链球菌调理吞噬杀菌试验,比较对照孔菌数和质控血清的调理指数。结果 与品牌1胎牛血清分化细胞的活力相比较,品牌5分化的细胞活力差异具有统计学意义(P=0.023,P<0.05),而品牌2、3、4分化细胞的活力差异均不具有统计学意义(P=0.129、0.186、0.440,P>0.05);使用品牌5分化的细胞,对3、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F血清群/型调理指数因为调理吞噬后菌落数过少,无法计算。使用品牌5配制的调理缓冲液,对3、9V、19F血清群/型调理指数因为调理吞噬后菌落数过少,无法计算。结论 为保障肺炎链球菌调理吞噬试验的稳定性,建议对试验过程中使用的胎牛血清进行筛选。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 调理吞噬 胎牛血清
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