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题名人心肌肌酸激酶MB同工酶的原核表达及纯化
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作者
李子颖
贾娟娟
刘一兵
韩世泉
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机构
原子高科股份有限公司医学二部
中国食品药品检定研究院化学药品检定所抗肿瘤与放射性药品室
中国原子能科学研究院同位素研究所
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2013年第7期931-934,共4页
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文摘
目的原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)。方法分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57%,主要以包涵体形式存在;纯化的CK-MB蛋白纯度大于90%,可与兔抗CK-B、CK-M多克隆抗体特异性结合。结论成功原核表达并纯化了重组CK-MB蛋白,为其大量生产奠定了基础。
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关键词
心肌
肌酸激酶
同工酶
原核细胞
基因表达
纯化
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Keywords
Cardiac muscle
Creatine kinase
Isoenzyme
Prokaryotic cells
Gene expression
Purification
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分类号
R446.112
[医药卫生—诊断学]
Q786
[医药卫生—临床医学]
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