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鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品的研制 被引量：3
1
作者 徐潇 石继春 +6 位作者 王春娥 李康 黄洋 李江姣 梁丽 陈驰 叶强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期307-312,318,共7页
目的研制鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,用于该试剂盒的质量评价。方法收集10株鲍氏不动杆菌和10株阴性参考菌株(同属不同种的不动杆菌及与鲍氏不动杆菌感染部位相同或感染症状相似的病原菌)新鲜培养物,进行灭活、分装。并对参... 目的研制鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,用于该试剂盒的质量评价。方法收集10株鲍氏不动杆菌和10株阴性参考菌株(同属不同种的不动杆菌及与鲍氏不动杆菌感染部位相同或感染症状相似的病原菌)新鲜培养物,进行灭活、分装。并对参考品进行均匀性及稳定性评估,同时验证其准确性、特异性、重复性、最低检出限。组织7家实验室对制备的参考品开展协作标定。结果成功制备了鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,包括10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品。阳性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品Ct值的CV均<2.5%;与-20℃保存的参考品比较,于2~8、25、37℃分别放置3、7、14 d及冻融3、5次后参考品Ct值的差异均无统计学意义(P> 0.05)。制备的参考品具有良好的准确性、特异性、重复性,最低检出限为1.0×10^(3)个/mL。参加协作标定的7家实验室中,除1家出现假阳性结果,其他实验室的准确性、特异性和重复性验证均符合规定;有1家实验室的最低检出限高于1.0×10^(3)个/mL。结论本实验研制的参考品可用于鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒的质量评价。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 核酸 参考品 验证 协作标定 试剂盒
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流感嗜血杆菌核酸检测试剂盒国家参考品的建立 被引量：3
2
作者 黄洋 李康 +6 位作者 徐潇 李江姣 王春娥 梁丽 陈驰 刘茹凤 叶强 《分子诊断与治疗杂志》 2021年第11期1740-1743,1747,共5页
目的建立流感嗜血杆菌(HI)核酸检测试剂盒国家参考品。方法将10株流感嗜血杆菌和10株非流感嗜血杆菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜的无菌培养物,计数并灭活后制备成10份阳性参考品、10份阴性参考品、1份最低检... 目的建立流感嗜血杆菌(HI)核酸检测试剂盒国家参考品。方法将10株流感嗜血杆菌和10株非流感嗜血杆菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜的无菌培养物,计数并灭活后制备成10份阳性参考品、10份阴性参考品、1份最低检出限参考品和3份重复性参考品,使用两家试剂盒对参考品进行确证,考察参考品分装的均匀性以及在不同处理条件下的稳定性,并组织7家相关企业进行协作标定。结果本参考品具有良好的准确性、特异性、重复性以及分装均匀性;反复冻融3、5次和分别于2~8℃、室温、37℃放置3、7、14天后均不影响参考品的稳定性;协作标定结果显示7家企业的试剂盒准确性、特异性和重复性均符合规定;最低检出限结果显示2家为10^(2)个/mL、3家为10^(3)个/mL、2家在10^(4)个/mL仍未检出。结论建立了HI核酸检测试剂盒国家参考品,可用于相关试剂盒的质量评价。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 核酸检测 国家参考品
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检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株分子特征分析 被引量：3
3
作者 黄洋 徐潇 +5 位作者 李康 李江姣 石继春 郑锐 孙文媛 叶强 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第5期509-513,共5页
目的检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株分子特征分析,为肺炎球菌疫苗的临床评价奠定基础。方法对24株检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株的16S rRNA基因片段进行PCR扩增、测序,并运用多位点序列分析(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方... 目的检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株分子特征分析,为肺炎球菌疫苗的临床评价奠定基础。方法对24株检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株的16S rRNA基因片段进行PCR扩增、测序,并运用多位点序列分析(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方法,对相关菌株进行分子分型。结果16S rRNA基因序列比对结果显示24株菌株的基因序列与肺炎链球菌模式株NCTC 7465的16S rRNA基因序列(LN831051)的相似性在98.35%~99.86%之间,碱基的差异在2~23 bp;多位点序列分析结果显示24株标准菌株的ST型各不相同;PFGE分析结果表明24株标准菌株100~1000 Kb大小的DNA片段得到了较好的分离效果,各血清群/型的菌株各具其特征性的条带(12~15个片段)。结论本研究发现检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株的ST型和PFGE图型均不相同,具有代表性,为肺炎球菌功能性抗体检测用标准菌株质量控制方法提供参考。 展开更多
关键词 肺炎球菌疫苗 功能抗体检测 标准菌株 分子分型
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A族链球菌核酸检测试剂国家参考品的研制 被引量：2
4
作者 石继春 刘茹凤 +8 位作者 徐潇 李康 黄洋 李江姣 梁丽 陈驰 龙新星 王春娥 叶强 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第2期6-12,共7页
目的研制A族链球菌核酸检测试剂国家参考品。方法将10株A族链球菌株和10株非A族链球菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。采用A族链球菌核酸检... 目的研制A族链球菌核酸检测试剂国家参考品。方法将10株A族链球菌株和10株非A族链球菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。采用A族链球菌核酸检测试剂对阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性和最低检出限进行了适用性验证,并组织4家实验室开展了协作标定。结果建立了由10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成的A族链球菌核酸检测试剂评价用国家参考品。经评估该参考品具有良好的均匀性及稳定性,协作标定结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性参考品均符合要求,最低检出限参考品菌液浓度两家实验室标定为1×10^(4)个/mL,两家实验室标定为1×10^(3)个/mL。结论研制的参考品可以用于A族链球菌核酸检测试剂的质量评价。 展开更多
关键词 A族链球菌 核酸 国家参考品 均匀性 稳定性 协作标定
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不同来源屎肠球菌的全基因组序列分析
5
作者 王春娥 石继春 +6 位作者 徐潇 李康 梁丽 陈驰 龙新星 叶强 徐颖华 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第13期4250-4257,共8页
目的 了解不同分离来源的屎肠球菌(Enterococcus faecium)标准菌株的全基因组特征。方法 采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的分离于食品和临床患者的6株屎肠球菌标准菌株进行全基因组测序,采用velvet 1.2.03和glimmer ... 目的 了解不同分离来源的屎肠球菌(Enterococcus faecium)标准菌株的全基因组特征。方法 采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的分离于食品和临床患者的6株屎肠球菌标准菌株进行全基因组测序,采用velvet 1.2.03和glimmer 3.02等生物信息学软件对测序数据进行基因组装、基因预测及功能注释,分析基因组中所含耐药基因和毒力基因;并与已发表的6株临床分离的代表性屎肠球菌进行核心基因组和泛基因组比较分析,构建系统发育分子进化树。结果 6株屎肠球菌标准菌株的基因组序列大小约为2.9Mbp,不同菌株基因组中共鉴定出2669~3085个基因,平均G+C含量为38.0%;基因组耐药基因注释分析发现,每株屎肠球菌含有21~37种数量不等的耐药基因,食品来源菌株所携带耐药基因明显少于临床分离株(P=0.009)。而不同来源菌株之间所含毒力基因数量无显著性差异,含有5~8种数量不等的毒力基因,其中参与生物膜形成的基因BopD和胆盐水解酶基因bsh存在于所有菌株中。比较基因组学分析结果显示,随着屎肠球菌基因组测序数量的增加,泛基因组所含基因数量随之增加,而核心基因组则趋于稳定。全基因组的系统发育树进化分析结果显示, 12株屎肠球菌被分成3个进化分支,其中5株食品来源的菌株均分布在同一个进化分支。结论 本研究获得6株屎肠球菌标准菌株的全基因组序列,证实食品来源菌株均携带一定数量的耐药基因和毒力基因,提示应加强食源性菌株的安全监测。本研究结果可为后续屎肠球菌耐药机制、致病性等研究提供数据支持。 展开更多
关键词 屎肠球菌 不同来源 全基因组序列分析 食源性微生物
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脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂国家参考品的研制
6
作者 李江姣 刘茹凤 +7 位作者 李康 黄洋 徐潇 石继春 王春娥 梁丽 陈驰 叶强 《中国医药生物技术》 2022年第3期268-270,共3页
脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm),又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌,是一种革兰氏阴性菌,根据荚膜多糖可分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群,主要寄居在人体鼻咽部,可通过飞沫传播。人感染脑膜炎... 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm),又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌,是一种革兰氏阴性菌,根据荚膜多糖可分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群,主要寄居在人体鼻咽部,可通过飞沫传播。人感染脑膜炎奈瑟菌可引起败血症或流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)等急性呼吸道传染病,常伴随着较高的死亡率[1-3]。建立高效的Nm检测方法对流脑的临床诊断有重要的意义。 展开更多
关键词 流行性脑脊髓膜炎 飞沫传播 脑膜炎奈瑟菌 国家参考品 脑膜炎双球菌 荚膜多糖 血清群 临床诊断
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高等级生物安全实验室终末消毒效果评价用枯草芽孢杆菌标准株的评价与应用
7
作者 王劲松 黄洋 +4 位作者 龙新星 牛群 李康 叶强 徐潇 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1498-1501,共4页
目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)建立高等级生物安全实验室终末消毒评价用枯草芽孢杆菌标准菌株。方法选择4株国内分离的枯草芽孢杆菌,通过对标准菌株菌落形态、染色特性、生化特性以及全基因组... 目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)建立高等级生物安全实验室终末消毒评价用枯草芽孢杆菌标准菌株。方法选择4株国内分离的枯草芽孢杆菌,通过对标准菌株菌落形态、染色特性、生化特性以及全基因组测序,对标准菌株进行生物学特性和分子特征分析;再将4种标准菌株制成一定浓度的菌片,与市售的菌片一起对动物生物安全三级实验室及关键防护设备进行终末消毒效果的评价。结果候选4株菌株均鉴定为枯草芽孢杆菌,全基因组均为环形,不含质粒;在相同消毒条件下,与ATCC9372一样,置于房间、生物安全柜和小鼠通风笼架4种候选菌株的菌片均可完全被杀灭。结论本研究建立了高等级生物安全实验室终末消毒评价用枯草芽孢杆菌标准菌株,这些标准菌株的建立为消毒评价用菌株的国产化奠定了物质基础。 展开更多
关键词 高等级生物安全实验室 终末消毒效果 枯草芽孢杆菌 标准株
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铜绿假单胞菌核酸检测用试剂盒国家参考品的研究 被引量：1
8
作者 梁丽 陈驰 +9 位作者 石继春 王春娥 龙新星 刘茹凤 黄洋 李康 徐潇 李江姣 徐颖华 叶强 《中国医药生物技术》 2022年第2期168-171,175,共5页
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单... 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单胞菌,甚至多批次样品的检出率大于10%,为一种重要的水源和食源性致病菌[2-4]。因此在我国饮用天然矿泉水(GB 8537-2016)[5]和包装饮用水(GB 19298-2014)[6]的国家标准中均明确规定不得检出铜绿假单胞菌。此外,在2015年我国颁布的《化妆品安全技术规范》也要求化妆品中不得有铜绿假单胞菌检出[7]。铜绿假单胞菌作为医院内感染的主要病原菌之一,在机体免疫力低下时,例如术后和恶性肿瘤的患者容易感染本菌,且铜绿假单胞菌的耐药性强,在治疗时往往需要使用多种抗生素进行联合用药[8-9]。因此,快速而准确地鉴定出铜绿假单胞菌对保障食品安全和人民健康具有重要的意义。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 国家参考品 核酸检测 饮用天然矿泉水 医院内感染 凉拌菜 食源性致病菌 熟肉制品
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鲍曼不动杆菌参考品候选株的比较分析研究
9
作者 徐潇 黄洋 +6 位作者 石继春 王春娥 李康 梁丽 郑锐 孙文媛 叶强 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第3期27-35,共9页
目的对20株不动杆菌进行分子特征描述和比较研究,用于鲍曼不动杆菌参考品的研制。方法结合生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、rpoB基因序列分析和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等四种鉴定方法对菌株进行精准鉴定,并通过脉冲场凝胶电... 目的对20株不动杆菌进行分子特征描述和比较研究,用于鲍曼不动杆菌参考品的研制。方法结合生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、rpoB基因序列分析和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等四种鉴定方法对菌株进行精准鉴定,并通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)进行多样性和进化关系的分析。结果综合比较不同方法的鉴定结果,完成20株不动杆菌的精准鉴定。分子分型显示,菌株具有多样性,且进化关系清晰,发现了16种新基因型和7种新ST型。结论本研究通过组合鉴定方式精准鉴定参考品制备用候选不动杆菌,并分析了菌株的多样性和进化关系,为参考品研制提供资源支持。 展开更多
关键词 不动杆菌 细菌鉴定 分子分型 参考品
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一株支气管炎鲍特杆菌国家标准菌种的再鉴定
10
作者 石继春 龙新星 +6 位作者 陈驰 梁丽 郑锐 孙文媛 杜慧竟 徐潇 叶强 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期69-79,共11页
通过生化试验、质谱鉴定、16S rRNA基因序列分析、全基因组序列测定及生物信息学分析等方法对国家标准菌种CMCC(B)40001进行再鉴定。对菌株的毒力、耐药和MLST进行分析,并对鲍特杆菌(Bordetella spp.)的群体进化进行分析。结合不同方法,... 通过生化试验、质谱鉴定、16S rRNA基因序列分析、全基因组序列测定及生物信息学分析等方法对国家标准菌种CMCC(B)40001进行再鉴定。对菌株的毒力、耐药和MLST进行分析,并对鲍特杆菌(Bordetella spp.)的群体进化进行分析。结合不同方法,CMCC(B)40001再鉴定为支气管炎鲍特杆菌(Bordetella bronchiseptica),且其作为标准菌种能够发挥国家标准描述的质控作用。同时获取该菌株的新ST型,在进化关系上,其与百日咳鲍特杆菌(Bordetella pertussis)和副百日咳鲍特杆菌(Bordetella parapertussis)遗传距离近。本研究再鉴定了国家标准菌种CMCC(B)40001为支气管炎鲍特杆菌,并分析了其遗传特征,为国家标准菌种的应用提供资源描述支持。 展开更多
关键词 细菌鉴定 质谱鉴定 基因组测序 群体进化分析 质量控制
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