乌拉坦和戊巴比妥钠对手术后长期饲养动物的影响 被引量：15

1

作者 王春晓 曹荣月 +3 位作者 蔡曼玲 杜鹏 刘承初 刘景晶 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第21期2559-2564,共6页

目的:探讨麻醉药乌拉坦的副作用及手术造模后需长期饲养的动物麻醉用药的选择.方法:将大鼠用乌拉坦(n=90)及戊巴比妥钠(n=48)分别进行麻醉,观察较长期的生存及死亡状态,并对乌拉坦对动物脏器的影响做了肉眼观察,度量比较,扫描电子显微... 目的:探讨麻醉药乌拉坦的副作用及手术造模后需长期饲养的动物麻醉用药的选择.方法:将大鼠用乌拉坦(n=90)及戊巴比妥钠(n=48)分别进行麻醉,观察较长期的生存及死亡状态,并对乌拉坦对动物脏器的影响做了肉眼观察,度量比较,扫描电子显微镜下观察肠内壁绒毛,腺体以及微绒毛的形态特征.结果:使用乌拉坦的动物死亡率非常高,达33.3-40.0%,死亡动物的内脏严重受损.使用戊巴比妥钠的大鼠死亡率在假手术组为8.3%,在手术组为6.25%.假手术组以及手术组与正常组比较,脾系数极度减小(0.78±0.38,0.77±0.21vs3.44±1.16,P<0.01),盲肠与回肠直径极度增加(3.20±0.79,2.23±0.34vs1.26±0.24,P<0.01;1.68±0.44,1.46±0.36vs0.46±0.07,P<0.01),细胞变性严重.透射电镜下观察到用乌拉坦19wk的大鼠,小肠黏膜上皮细胞明显水肿,表面有的微绒毛已脱落,整体数量减少.结论:乌拉坦不适用于对手术后需长期饲养的动物进行麻醉,而戊巴比妥钠可作为术后需长期饲养动物的手术麻醉用药. 展开更多

关键词 肠 乌拉坦 戊巴比妥钠 长期饲养

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乳酸乳球菌在疫苗递呈载体中的应用 被引量：5

2

作者 刘晓锐 张晓红 吴洁 《药物生物技术》 CAS 2014年第1期75-80,共6页

乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级微生物。近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展。乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的模式菌种,其基因组测序已经完成,因而方便研究者根据实际需... 乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级微生物。近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展。乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的模式菌种,其基因组测序已经完成,因而方便研究者根据实际需要利用分子生物学工具将其改造为各种表达载体可用的受体菌。目前已经开发了一系列质粒型克隆载体和整合型克隆载体系统及蛋白定位系统,已有多种病原微生物抗原成功在乳酸乳球菌中表达,重组乳酸乳球菌作为粘膜免疫疫苗的递呈载体呈现非常好的应用前景,文章介绍了近年来乳酸乳球菌在疫苗递呈载体中的应用情况,重点阐述了其在抗感染、抗肿瘤、抗自身免疫性方面的研究进展及其在疫苗研制中遇到的困难及需要解决的问题,并对其应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 疫苗 抗原 表达 粘膜免疫 载体

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热休克蛋白65及其两个功能表位在调节动脉粥样硬化中的作用 被引量：5

3

作者 李祝方 龙军 +4 位作者 孙云霄 熊祺琰 曹荣月 刘景晶 李泰明 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第1期1-7,共7页

动脉粥样硬化是一种自身免疫性疾病。人自身热休克蛋白60是主要的自身免疫原之一，能引起人自身免疫性反应进而促进动脉粥样硬化的发生，热休克蛋白65与人热休克蛋白60有较高的同源性，同源性为46％左右，具有相似的抗原表位，通过诱导... 动脉粥样硬化是一种自身免疫性疾病。人自身热休克蛋白60是主要的自身免疫原之一，能引起人自身免疫性反应进而促进动脉粥样硬化的发生，热休克蛋白65与人热休克蛋白60有较高的同源性，同源性为46％左右，具有相似的抗原表位，通过诱导粘膜免疫耐受产生抗炎效果将会对动脉粥样硬化产生积极的影响。热休克蛋白65鼻黏膜免疫动脉粥样硬化模型新西兰大白兔，能显著减轻主动脉粥样斑块，与PBS组存在极显著差异（P〈0．01）。热休克蛋白65上31-46片段，180-188片段与霍乱毒素B亚单位的融合蛋白鼻黏膜免疫动脉粥样硬化模型新西兰大白兔．不能显著减轻主动脉粥样斑块，与PBS组不存在显著性差异（P〉0．05）。结果表明HSP65鼻黏膜免疫新西兰大白兔能有效诱导兔黏膜免疫耐受，预防动脉粥样硬化；热休克蛋白65上31-46片段和180～188片段，虽然有文献报道通过诱导免疫耐受在小鼠自身免疫性疾病佐剂性关节炎中有很好的预防作用，但在动脉粥样硬化中却不能有效诱导黏膜免疫耐受而显著改善病情。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 热休克蛋白65 免疫耐受 霍乱毒素B亚单位 免疫分析

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重组人甲状旁腺素相关肽Pro-Pro-[Arg^(11)]-hPTH(1-34)-Pro-Pro的制备工艺及活性研究 被引量：4

4

作者 庄志华 施小明 +3 位作者 王春晓 吴洁 刘景晶 李泰明 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第5期337-342,共6页

该研究优化了工程菌pED-4P-[Arg11]hPTH(1-34)/BL21的表达条件,目的蛋白表达量可达50%以上;运用正交设计法,确定包涵体溶解及融合蛋白乙醇沉淀的最佳条件,融合蛋白经酸水解后进行阳离子交换柱层析,最后采用阶段洗脱,回收率约为11 mg/L... 该研究优化了工程菌pED-4P-[Arg11]hPTH(1-34)/BL21的表达条件,目的蛋白表达量可达50%以上;运用正交设计法,确定包涵体溶解及融合蛋白乙醇沉淀的最佳条件,融合蛋白经酸水解后进行阳离子交换柱层析,最后采用阶段洗脱,回收率约为11 mg/L发酵液。卵巢摘除大鼠模型验证了其药效学活性。该工艺稳定,简便,易于控制,为后期中试及大规模生产提供了思路。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺素 包涵体 正交实验设计 骨密度

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一种新型hPTH(1-34)基因相关肽的制备及其应用的初步研究 被引量：4

5

作者 施小明 王春晓 +4 位作者 庄志华 吴洁 李泰明 曹荣月 刘景晶 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2008年第1期31-36,共6页

目的:对hPTH(1-34)进行结构改造,提高蛋白水解酶的稳定性,增强酶活性,使之更适合制成滴鼻剂,并验证治疗骨质疏松症的效果。方法:确定将hPTH(1-34)改造成为Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro后,构建表达质粒pED-4PhPTH(1-34),转化E.coli... 目的:对hPTH(1-34)进行结构改造,提高蛋白水解酶的稳定性,增强酶活性,使之更适合制成滴鼻剂,并验证治疗骨质疏松症的效果。方法:确定将hPTH(1-34)改造成为Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro后,构建表达质粒pED-4PhPTH(1-34),转化E.coliBL21(DE3)LysE,乳糖诱导表达,经分离纯化获得目的多肽。将目的多肽与二甲基-β-环糊精、聚丙烯酸、EDTA制成滴鼻剂,治疗卵巢摘除大鼠(OVXed Rats)的骨质疏松症。结果:获得纯度较高的Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro,将制成的滴鼻剂用于卵巢摘除大鼠,与生理盐水滴鼻治疗组相比能显著增加大鼠椎骨骨密度(P<0.01)及股骨头骨小梁厚度(P<0.001),对鼻黏膜没有损伤。结论:Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro制成滴鼻剂治疗卵巢摘除大鼠的骨质疏松症效果明显,有进一步开发的前景。 展开更多

关键词 人甲状旁腺素 滴鼻剂 骨质疏松症 骨密度 骨小梁

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中性粒细胞胞外诱捕网在自身免疫性疾病中的研究进展 被引量：4

6

作者 刘坤锋 吴洁 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期65-68,共4页

中性粒细胞是非特异性免疫系统中的重要一员,介导吞噬和杀菌作用。中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)是中性粒细胞受到刺激后释放的一种纤维网状结构。近年来,NETs作为中性粒细胞一种全新的机制在自身免疫性... 中性粒细胞是非特异性免疫系统中的重要一员,介导吞噬和杀菌作用。中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)是中性粒细胞受到刺激后释放的一种纤维网状结构。近年来,NETs作为中性粒细胞一种全新的机制在自身免疫性疾病上的研究备受关注。NETs在固有免疫中主要利用其特殊的网状结构捕获病原微生物并对其消化加工。内源性和外源性抗原的修饰是中性粒细胞胞外诱捕网主要特点,可产生多种新的自身抗原。诱捕网中组蛋白瓜氨酸化已确定参与多种自身免疫病,并且患者体内存在异常的NETs,并与疾病严重程度呈正相关。文章结合近年来的文献对NETs的形成、NETs参与自身免疫性疾病的发生发展以及探索其应用于临床研究的可能机制分别进行了综述。 展开更多

关键词 中性粒细胞胞外诱捕网 自身免疫病 炎症 抗原修饰 组蛋白 免疫复合物

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金黄色葡萄球菌核酸酶对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的保护作用 被引量：3

7

作者 张婷婷 梅银柳 +3 位作者 董万法 王镜勋 金亮 吴洁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期198-205,共8页

探究金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠结肠炎的改善作用及机制。用2.5%TNBS溶液灌肠雌性BALB/c小鼠建立结肠炎模型,并连续6 d灌胃给予以重组乳酸菌为递呈载体的SNase。探究SNase介导的中性粒细胞胞外诱捕... 探究金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠结肠炎的改善作用及机制。用2.5%TNBS溶液灌肠雌性BALB/c小鼠建立结肠炎模型,并连续6 d灌胃给予以重组乳酸菌为递呈载体的SNase。探究SNase介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的降解对小鼠结肠炎的影响。实验分为正常组、TNBS模型组、NZ9000乳酸菌组、表达SNase的重组乳酸菌组。每日观测小鼠体质量、粪便性状和粪便隐血情况,观察期结束取结肠组织进行HE病理分析,检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)酶活和促炎细胞因子的mRNA表达水平,检测血清炎性细胞因子含量,同时免疫组化检测结肠组织中性粒细胞及其NETs标志物的表达水平。结果表明,乳酸菌递呈的SNase能缓解TNBS诱导的结肠炎小鼠体质量下降,降低疾病活动指数(DAI)评分,缓解结肠缩短并减轻病理损伤,降低结肠组织MPO酶活及炎性细胞因子表达,同时改善了血清炎性水平,免疫组化结果表明结肠组织Ly6G和citH3水平下降。初步机制表明,SNase能够下调炎性细胞因子的表达,降低NETs水平从而缓解小鼠结肠炎。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌核酸酶 乳酸乳球菌 2 4 6-三硝基苯磺酸 中性粒细胞胞外诱捕网 结肠炎

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1型糖尿病疫苗临床研究进展 被引量：3

8

作者 卢世平 金亮 吴洁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期625-631,共7页

1型糖尿病是由于自身免疫系统紊乱损伤胰岛β细胞造成的自身免疫性疾病。患者必须采用注射胰岛素进行治疗。随着对1型糖尿病认识的不断深入,人们开始关注对糖尿病的预防和早期诊断。本文对临床在研及临床前研究的糖尿病疫苗研究进展进... 1型糖尿病是由于自身免疫系统紊乱损伤胰岛β细胞造成的自身免疫性疾病。患者必须采用注射胰岛素进行治疗。随着对1型糖尿病认识的不断深入,人们开始关注对糖尿病的预防和早期诊断。本文对临床在研及临床前研究的糖尿病疫苗研究进展进行了综述,从自身抗原、针对自身抗原的单克隆抗体、相关细胞因子等生物靶标介绍1型糖尿病疫苗的研究进展。 展开更多

关键词 1型糖尿病 疫苗 自身抗原 单克隆抗体 临床进展

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重组HSP65-6P277乳酸乳球菌疫苗对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用 被引量：2

9

作者 吴洁 刘晓锐 +5 位作者 杨雪 侯景 徐茂磊 申丽丽 黄东成 刘坤锋 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期106-110,共5页

探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制。采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型。将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000pCYT∶HSP65-6P277和组... 探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制。采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型。将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000pCYT∶HSP65-6P277和组成型表达菌株L.lactis NZ9000 pHJ∶HSP65-6P277及无关蛋白对照菌株L.lactis NZ9000 pCYT∶Nuc灌胃1型糖尿病小鼠(2×109CFU,200μL),每天灌胃1次,连续7 d,之后每周灌胃1次,持续16周。每月从小鼠眼眶静脉丛取血1次,血糖检测仪检测STZ造模小鼠血糖水平并称体重。4个月后将小鼠处死,取小鼠脾脏做脾细胞增殖实验,采用ELISA试剂盒分别检测脾细胞上清液中的IL-10和IFN-γ细胞因子水平以及血清IgG抗体水平。结果显示,与对照组相比,pCYT∶HSP65-6P277组和pHJ∶HSP65-6P277组可以一定程度上降低STZ造模小鼠血糖水平(P<0.05),并能维持其正常体重稳定,降低脾细胞针对HSP65和P277的增殖(P<0.05),脾细胞上清液中IFN-γ细胞因子水平明显降低(P<0.05),血清IgG抗体水平无明显差异(P>0.05)。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 疫苗 P277 黏膜免疫 1型糖尿病

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Notch信号通路与肿瘤的发生及其靶向抗肿瘤疗法 被引量：1

10

作者 马艳君 赵智明 刘景晶 《药学进展》 CAS 2009年第3期104-111,共8页

综述Notch信号通路的组成、生理作用和转导途径,探讨Notch信号通路紊乱与肿瘤发生的关系及诱导肿瘤形成的机制,并概述Notch信号通路靶向肿瘤疗法的研究,包括对γ-分泌酶抑制剂、Notch受体拮抗剂和Notch-1小分子干扰RNA的研发。Notch信... 综述Notch信号通路的组成、生理作用和转导途径,探讨Notch信号通路紊乱与肿瘤发生的关系及诱导肿瘤形成的机制,并概述Notch信号通路靶向肿瘤疗法的研究,包括对γ-分泌酶抑制剂、Notch受体拮抗剂和Notch-1小分子干扰RNA的研发。Notch信号通路在决定细胞命运中发挥着重要作用,它参与调控许多与肿瘤发生有关的细胞功能和微环境,包括细胞增殖、凋亡、黏附、上皮-间质转化以及血管发生等生物学过程,有望成为肿瘤治疗的新靶点。 展开更多

关键词 NOTCH信号通路 肿瘤发生 抗肿瘤靶点

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抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定 被引量：1

11

作者 林洁 刘景晶 +1 位作者 陈庆梅 施小明 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2006年第4期232-235,共4页

目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗。方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ1-15基因,通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段,与大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合,构建表达质粒pET28 a-AnsB-TTP-Aβ1-15... 目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗。方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ1-15基因,通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段,与大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合,构建表达质粒pET28 a-AnsB-TTP-Aβ1-15。转化至E.coliBL-21,TBYE培养基(Kanr)培养,乳糖诱导表达,通过渗透休克、DEAE52-cellu lose和Sepha-dex G-100柱层析制备融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,通过酶活力和抗原性测定鉴定融合蛋白。结果:获得的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15保留了AnsB 71%的催化活力,具有与抗Aβ1-42抗体特异性结合的能力。结论:获得了在AnsB多聚酶分子表面呈现有Aβ1-15表位的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,为抗阿尔茨海默病疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 重组疫苗 表位 表面呈现 抗原性

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分支杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位经鼻粘膜的反复预免疫对随后攻击性免疫的强化作用 被引量：1

12

作者 邓双玲 贾绍辉 +3 位作者 熊祺琰 张宇 吴洁 刘景晶 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第5期325-330,共6页

为了研究热休克蛋白65与动脉粥样硬化的关系,扩增出HSP65上与动脉粥样硬化密切相关的6个B细胞表位。将这6个表位分成两组,每组包含3个表位,其基因分别与CTB基因相融合,转化到大肠杆菌并表达蛋白。表达产物经过一系列的分离纯化步骤,并... 为了研究热休克蛋白65与动脉粥样硬化的关系,扩增出HSP65上与动脉粥样硬化密切相关的6个B细胞表位。将这6个表位分成两组,每组包含3个表位,其基因分别与CTB基因相融合,转化到大肠杆菌并表达蛋白。表达产物经过一系列的分离纯化步骤,并复性后经GM1-ELISA证明可在体外自组装成五聚体。用复性后的重组蛋白小剂量多次滴鼻免疫ICR小鼠,随后用大量的HSP65蛋白皮下免疫,ELISA检测小鼠血清中抗HSP65的抗体。初步药效学实验表明,重组蛋白预免疫ICR小鼠后,可以使免疫组较对照组对随后的大量HSP65刺激产生更加强烈的免疫反应。 展开更多

关键词 HSP65/60 动脉粥样硬化 表位 免疫 粘膜

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胰岛素依赖型糖尿病疫苗研究进展

13

作者 马艳君 吴洁 《生命的化学》 CAS CSCD 2014年第6期749-756,共8页

胰岛素依赖型糖尿病是一种以机体对胰脏β细胞自身抗体耐受的丧失为标志的自身免疫性疾病,发病者会出现胰岛损伤、血糖失控、并往往有严重的长期并发症。导致这种自身反应性疾病的一个原因就是自身抗原与免疫系统的相互作用。这些自身... 胰岛素依赖型糖尿病是一种以机体对胰脏β细胞自身抗体耐受的丧失为标志的自身免疫性疾病,发病者会出现胰岛损伤、血糖失控、并往往有严重的长期并发症。导致这种自身反应性疾病的一个原因就是自身抗原与免疫系统的相互作用。这些自身抗原本身的性质决定了其是否会促进自身免疫或者参与免疫保护,一旦发生自身免疫性疾病,目前尚无能安全而有效的根治这些疾病的方法。因此,与完全依赖于广泛的免疫抑制的其它疗法相比,在发生自身免疫性疾病之前采用疫苗预防措施,或者利用机体免疫调节的疗法就显得尤为重要并具有极大的吸引力。这里,我们综述了近年来胰岛素依赖型糖尿病疫苗的发展,并探讨了基于自身抗原的疫苗疗法以及联合免疫疫苗在胰岛素依赖型糖尿病防治中的作用和运用前景。 展开更多

关键词 疫苗 胰岛素依赖 糖尿病 自身免疫性疾病

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重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究

14

作者 杨亚男 鲁勇 +1 位作者 刘景晶 曹荣月 《西北药学杂志》 CAS 2010年第3期206-208,共3页

目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化... 目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干燥,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验。结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg。结论该工艺耗时短,效果好,成本较低。 展开更多

关键词 基因工程 重组人胰岛素 纯化 磺酸化

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分子模拟在门冬酰胺酶Ⅱ表面呈现多肽技术中的应用(英文)

15

作者 杨欣 李文佳 刘景晶 《生物信息学》 2007年第2期70-73,共4页

简要地介绍了表面呈现技术和组合酶技术的应用以及发展前景,描述了一种应用分子建模系统辅助进行抗动脉粥样硬化的嵌合酶疫苗的构建过程。门冬酰胺酶活力测定结果证明,嵌合酶的空间结构和活性位点均能够依照设计要求保留。提供了一种生... 简要地介绍了表面呈现技术和组合酶技术的应用以及发展前景,描述了一种应用分子建模系统辅助进行抗动脉粥样硬化的嵌合酶疫苗的构建过程。门冬酰胺酶活力测定结果证明,嵌合酶的空间结构和活性位点均能够依照设计要求保留。提供了一种生物信息学手段在组合生物合成领域中的应用方法。 展开更多

关键词 组合生物合成 表面呈现 分子建模

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