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一种新型速效人胰岛素类似物的构建、制备及性质研究 被引量：5
1
作者 刘素丽 鲁勇 +4 位作者 王学军 曹荣月 刘景晶 范豪 李泰明 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2009年第5期371-375,共5页
目的:构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物(PIns),进行其性质研究。方法:采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28 a后,再... 目的:构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物(PIns),进行其性质研究。方法:采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28 a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白(1-20 aa)的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白(FKPPIns)的表达载体(pET28 a-FKPPIns)。此融合蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切。酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质。对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价。结果:获得了结构为R-P-K-P-Insu lin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降。结论:PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短。 展开更多
关键词 融合表达 速效人胰岛素类似物 单体胰岛素 药效学活性
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一种新型速效人胰岛素类似物的制备及药效学研究 被引量：3
2
作者 尤科军 鲁勇 +5 位作者 林明 孔婧 曹荣月 刘景晶 范豪 宗莉 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第4期334-337,共4页
制备一种新型速效胰岛素类似物PInsulin(PIns),利用Autoflex ToF/ToF质谱法对其进行鉴定,采取福林-酚试剂法测定其浓度;以人胰岛素、赖脯胰岛素作为对照品肌肉注射测定其对雄性SD大鼠的降血糖作用,并通过分子筛层析法考察其自聚合性质... 制备一种新型速效胰岛素类似物PInsulin(PIns),利用Autoflex ToF/ToF质谱法对其进行鉴定,采取福林-酚试剂法测定其浓度;以人胰岛素、赖脯胰岛素作为对照品肌肉注射测定其对雄性SD大鼠的降血糖作用,并通过分子筛层析法考察其自聚合性质。质谱法测得PIns的Mr为6286.50,浓度为0.227mg/ml;动物实验表明注射PIns后,大鼠血糖降至最低基础血糖浓度百分数和恢复至基础血糖浓度所需时间均显著小于人胰岛素(P<0.01);注射PIns后基础血糖浓度百分数的最低值与人胰岛素相当;分子筛层析法结果显示PIns的滞留时间大于人胰岛素,表明PIns自身聚合能力低于人胰岛素,是一种具有良好发展前景的新型速效胰岛素类似物。 展开更多
关键词 单体胰岛素 胰岛素类似物 自聚合性质 降血糖
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鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的纯化和复性研究(英文) 被引量：1
3
作者 曹荣月 陈檬 +5 位作者 葛驰宇 汤啸天 李飞 张鹏 徐茂磊 刘景晶 《药物生物技术》 CAS 2013年第5期386-391,共6页
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种造血生长因子和促炎细胞因子。重组鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在抗肿瘤及抗炎研究中有着极其重要的作用。以NcoI和BamH I为酶切位点将mGM-CSF编码序列插入到pET-28a载体中。转染E.coli... 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种造血生长因子和促炎细胞因子。重组鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在抗肿瘤及抗炎研究中有着极其重要的作用。以NcoI和BamH I为酶切位点将mGM-CSF编码序列插入到pET-28a载体中。转染E.coli宿主菌BL21后得到以包涵体形式表达的蛋白,表达量占菌体总蛋白量51.6%。包涵体的纯化条件在实验中进一步优化,然后溶解于8 mol/L尿素中。采用稀释法在2 mol/L尿素缓冲液中添加PEG对蛋白进行复性。复性后的产物经过离子交换层析纯化后得到高纯度的有活性的mGM-CSF。通过体内白细胞计数和体外髓样细胞增殖检测表明纯化的蛋白具有mGM-CSF全部的生物活性。这种制备方法能够从每升发酵液中获得8.06 mg蛋白,具有蛋白表达量高,复性和纯化方法简便易得的特点,适用于规模生产。 展开更多
关键词 重组鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 包涵体 聚乙二醇 纯化 复性 生物活性
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热休克蛋白保守性B细胞表位黏膜免疫可增强免疫应答(英文)
4
作者 贾绍辉 邓双玲 +3 位作者 熊祺琰 张宇 刘景晶 曹荣月 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2008年第6期397-403,共7页
目的:通过分枝杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位多次免疫小鼠,研究热休克蛋白65(HSP65)与动脉粥样硬化之间的关系。方法:PCR技术扩增出HSP65上与动脉粥样硬化密切相关的6个B细胞表位基因。将这6个表位的基因分成两组,分别与CTB基因相融合... 目的:通过分枝杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位多次免疫小鼠,研究热休克蛋白65(HSP65)与动脉粥样硬化之间的关系。方法:PCR技术扩增出HSP65上与动脉粥样硬化密切相关的6个B细胞表位基因。将这6个表位的基因分成两组,分别与CTB基因相融合并在大肠杆菌中表达。两种蛋白表达产物经过分离、纯化、混合复性,复性后的蛋白经GM1-ELISA证明可在体外自组装成5聚体。用复性后的重组蛋白小剂量多次滴鼻免疫ICR小鼠,然后用大量的HSP65蛋白经皮下免疫,采集血样,ELISA检测小鼠血清中抗HSP65的抗体。结果:重组蛋白预免疫ICR小鼠后,可以使免疫组较对照组对随后的大量HSP65刺激产生更加强烈的免疫反应。结论:分枝杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位经鼻黏膜的反复预免疫强化了小鼠对随后攻击性免疫的反应。 展开更多
关键词 攻击性免疫 动脉粥样硬化 热休克蛋白65 B细胞表位 小鼠
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