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野生革耳菌漆酶cDNA在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量：7
1
作者 张敏 肖亚中 +1 位作者 余聪 龚为民 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期757-762,共6页
将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分... 将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分泌表达活性漆酶.低温培养是该漆酶基因活性表达的必要条件.培养基中添加400μmol/L的CuSO4最有利于漆酶的活性表达. 展开更多
关键词 野生革耳菌 漆酶 CDNA序列 毕赤酵母 表达
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乙肝病毒表面抗原Pre-S1的N端片段溶液构象研究 被引量：3
2
作者 龚庆国 吴季辉 +4 位作者 刘琴 施蕴渝 崔大敷 徐来根 张友尚 《中国科学（C辑）》 CSCD 1999年第1期45-55,共11页
利用二维核磁方法对乙肝病毒表面抗原Pre S1N端 2 0～ 47肽段进行溶液构象研究 ,并用距离几何方法搭建分子结构 ,最后用分子动力学模拟方法对结构进行优化 .分析结果发现该肽段存在 4个 β turn ,位置与免疫学定义的抗原抗体结合位点相符 .
关键词 NMR溶液结构 乙肝病毒 距离几何 HBSAG PRE-S1
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野生革耳菌组成型漆酶的生成条件及性质研究 被引量：5
3
作者 张敏 肖亚中 +3 位作者 王芳 张仁云 刘林 龚为民 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期462-469,共8页
首次发现野生革耳菌 (Panusrudis)在 39℃液体振荡培养条件下 ,不需诱导剂的诱导 ,能持续产生漆酶 .优化后培养基的碳氮源分别为 2 %蔗糖和 2 6mM酵母抽提物 ,最高酶活达 1 .6× 1 0 4U/L ,属于目前已知的组成型漆酶高产菌株 .发酵... 首次发现野生革耳菌 (Panusrudis)在 39℃液体振荡培养条件下 ,不需诱导剂的诱导 ,能持续产生漆酶 .优化后培养基的碳氮源分别为 2 %蔗糖和 2 6mM酵母抽提物 ,最高酶活达 1 .6× 1 0 4U/L ,属于目前已知的组成型漆酶高产菌株 .发酵液经硫酸铵沉淀 ,DEAE Sepharose ,SephacrylS 2 0 0 ,MonoQ柱层析分离纯化后 ,可得电泳纯漆酶蛋白 .该酶为单体蛋白 ,分子量为 58kDa .以愈创木酚为底物 ,该酶的最适作用pH为4 5,最适反应温度为 50℃ ,Km值为 0 .2 1mM ,并表现出较好的热稳定性 。 展开更多
关键词 野生革耳菌 漆酶 产酶条件 酶学性质 振荡培养 多酚氧化酶
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转录因子E2F在细胞周期调控中的重要作用 被引量：1
4
作者 姜勇 涂晓明 施蕴渝 《细胞生物学杂志》 CSCD 2000年第1期13-18,共6页
转录因子E2F在细胞周期调控中起重要作用。E2F的活性受到pRb,细胞周期素和细胞周期素依赖性激酶的控制。近年来,许多有关E2F研究的新进展揭示了E2F与肿瘤发生、细胞凋亡、肿瘤抑制等均有密切关系。
关键词 转录因子 E2F 细胞周期 调控 PRB 细胞凋亡 肿瘤
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真菌漆酶的结构与功能 被引量：39
5
作者 张敏 肖亚中 龚为民 《生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期6-8,共3页
漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,能催化氧化酚类和芳香类化合物,同时伴随4个电子的转移,并将分子氧还原成水。漆酶结构的解析是阐明其催化作用机理、了解蛋白质结构与功能关系的基础。综述近年来对真菌漆酶蛋白结构及其功能研究的进展。
关键词 真菌漆酶 晶体结构 催化机理 功能 蛋白结构
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壳聚糖固定化真菌漆酶及其用于处理酚类污染物的研究 被引量：29
6
作者 肖亚中 张书祥 +3 位作者 胡乔彦 江维 蒲春雷 施蕴渝 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期245-250,共6页
Trametessp.AH2 8 2在液体培养条件下经邻甲苯胺诱导能有效合成漆酶同工酶A。以壳聚糖为载体 ,戊二醛为交联剂进行了漆酶A的固定化研究 ,确定酶固定化适宜条件为 :0 1g壳聚糖与 1 5mL 5 %戊二醛交联 8h后 ,加入 30 0U酶固定 1 2h。在... Trametessp.AH2 8 2在液体培养条件下经邻甲苯胺诱导能有效合成漆酶同工酶A。以壳聚糖为载体 ,戊二醛为交联剂进行了漆酶A的固定化研究 ,确定酶固定化适宜条件为 :0 1g壳聚糖与 1 5mL 5 %戊二醛交联 8h后 ,加入 30 0U酶固定 1 2h。在此条件下获得的固定化漆酶催化能力为 1 76 4U g载体 ,酶活回收率 5 8 5 %。与游离酶相比 ,固定化漆酶与作用底物愈创木酚的亲和力降低 ,但固定化酶的稳定性有明显改善。固定化漆酶的最适温度为5 5℃ ,比游离酶提高 5℃ ;70℃条件下保温 8h ,固定化酶保留酶活 5 6 5 % ,而在相同条件下游离酶酶活明显下降。使用固定化漆酶反应装置进行酚类化合物转化实验 ,连续进行 1 2批次操作 ,固定化酶酶活仍保持 60 %以上 。 展开更多
关键词 壳聚糖 固定化 真菌漆酶 酚类污染物
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hPRS1蛋白酶的同步辐射真空紫外圆二色光谱研究 被引量：3
7
作者 程兵兵 刘洪林 +4 位作者 张国斌 罗昭锋 彭晓晖 滕脉坤 韦世强 《核技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期161-164,共4页
人的PRPP合成酶1(hPRS1:Human phosphoribosylpyrophosphate synthetase)是与人体核苷酸代谢途径密切相关的一种重要合成酶。本文利用同步辐射真空紫外圆二色光谱(SRCD)实验方法研究hPRS1二级结构特征,以及通过添加反应底物,观察hPRS1... 人的PRPP合成酶1(hPRS1:Human phosphoribosylpyrophosphate synthetase)是与人体核苷酸代谢途径密切相关的一种重要合成酶。本文利用同步辐射真空紫外圆二色光谱(SRCD)实验方法研究hPRS1二级结构特征,以及通过添加反应底物,观察hPRS1二级结构的变化。研究发现,在添加相应底物的条件下,显示出hPRS1二级结构富有弹性,在外界因素发生改变时,二级结构相应发生较大变化,这个结果表明hPRS1蛋白二级结构的改变对于发挥功能作用是必需的。 展开更多
关键词 hPRS1 圆二色谱 SRCD 二级结构
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