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烟草花叶病毒运动蛋白cDNA的克隆及融合蛋白的表达 被引量：4
1
作者 李艳利 马中良 +2 位作者 林杰 田波 杨怀义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期182-184,共3页
从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (... 从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (GenBank登陆号为NC- 0 0 136 7)和同属的番茄花叶病毒 (ToMV ,GenBank登陆号为NC- 0 0 2 6 92相比核苷酸的同源性分别为 98 0 %和 80 9% ,氨基酸的同源性分别为 99 1%和 80 0 %。将目的片段亚克隆到表达载体pET 30a上 ,并在大肠杆菌JM10 9中诱导表达 ,诱导 9h后 ,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDS PAGE检测 ,融合蛋白以可溶形式存在。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 运动蛋白 CDNA 克隆 融合蛋白 表达 TMV RT-PCR 核苷酸 同源性
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