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胶原基因家族的研究进展 被引量：1
1
作者 丁莉莉 钟斌 商庆新 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 1993年第5期221-224,共4页
胶原是一类结构相似的蛋白质,以不同的超分子形式广泛分布于细胞间质中,是间质主要的结构成分。胶原基因突变将引起各种遗传性骨和软骨发育异常,还可导致其它纤维性疾病。
关键词 胶原 基因突变 研究 家族性
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生物图式调节的非线性场动力学:次级场中的重肢形成
2
作者 丁达夫 冯祖康 《生物数学学报》 CSCD 北大核心 1991年第2期124-140,共17页
Totafurno和Trainor[1]提出和分析了次级场图式调节的非线性动力学方程,证实嫁接致生重肢可用自发对称破缺机制解释,从而指出了解决French等人的极坐标模型[2]在180°同侧嫁接情况所遇困难的可能途径。本文运用群表示论和分岔分析... Totafurno和Trainor[1]提出和分析了次级场图式调节的非线性动力学方程,证实嫁接致生重肢可用自发对称破缺机制解释,从而指出了解决French等人的极坐标模型[2]在180°同侧嫁接情况所遇困难的可能途径。本文运用群表示论和分岔分析处理了一般的同侧嫁接和异侧嫁接致生正常重肢的形成问题。所获理论预测与实验观察符合很好。 展开更多
关键词 图式调节 对称破缺分岔 重肢形成
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Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达 被引量：1
3
作者 贺华君 杨卫东 +4 位作者 常雅宁 施惠娟 杨冠珍 吴祥甫 袁勤生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期566-569,共4页
将Mn SOD与抗癌胚抗原 (CEA)单链抗体基因 (ScFvgene)融合 ,重组到含T7启动子的表达载体 pET 2 2b(+)中 ,构建表达质粒pETMn SOD ScFv ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印... 将Mn SOD与抗癌胚抗原 (CEA)单链抗体基因 (ScFvgene)融合 ,重组到含T7启动子的表达载体 pET 2 2b(+)中 ,构建表达质粒pETMn SOD ScFv ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物分子量为 45kD与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性的与抗原CEA结合 ,同时邻苯三酚法测定也表明表达产物具有SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 癌胚抗原 单链抗体 MN-SOD 融合表达 肿瘤治疗
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人GDNF在甲醇酵母及家蚕幼虫中的表达 被引量：1
4
作者 陈哲宇 黄爱军 +2 位作者 何成 路长林 吴祥甫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期561-565,共5页
将人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因克隆入酵母分泌型表达载体 pPIC9K中 ,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合 ,经G418筛选得到多拷贝转化子 ,甲醇诱导表达。将人GDNF基因克隆入昆虫病毒转移载体 pBacPAK8中 ,与线性化Bm Bac... 将人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因克隆入酵母分泌型表达载体 pPIC9K中 ,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合 ,经G418筛选得到多拷贝转化子 ,甲醇诱导表达。将人GDNF基因克隆入昆虫病毒转移载体 pBacPAK8中 ,与线性化Bm BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染家蚕细胞 ,经体内重组 ,筛选到重组病毒。用重组病毒感染家蚕幼虫 ,5d后收集血淋巴。SDS PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了酵母培养上清液及家蚕幼虫血淋巴中含有GDNF蛋白。活性研究表明 ,甲醇酵母及家蚕幼虫表达的GDNF蛋白能促进多巴胺能神经元的存活和突起生长。 展开更多
关键词 GDNF 甲醇酵母 多巴胺能神经元 杆状病毒表达
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酵母酸性磷酸酯酶基因PHO5的上游调控序列
5
作者 於勤 王静英 敖世洲 《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》 1991年第1期57-61,共5页
PHO5是酵母细胞的一种阻遏型酸性磷酸酯酶基因,它的表达能被低浓度无机磷诱导。构建PHO5-lacZ融合基因,以β-半乳糖苷酶的活力表示PHO5的表达水平。对PHO55′上游核苷酸序列作Bal31核酸外切酶的缺失,获得一系列缺失突变株,不同缺失突变... PHO5是酵母细胞的一种阻遏型酸性磷酸酯酶基因,它的表达能被低浓度无机磷诱导。构建PHO5-lacZ融合基因,以β-半乳糖苷酶的活力表示PHO5的表达水平。对PHO55′上游核苷酸序列作Bal31核酸外切酶的缺失,获得一系列缺失突变株,不同缺失突变株的β-半乳糖苷酶活力显示,在PHO5起始密码上游-419——395和-380——352之间存在两个UAS功能区,是低浓度无机磷诱导作用必需的顺式作用元件。 展开更多
关键词 酸性磷酸酯酶 上游激活序列
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人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达 被引量：7
6
作者 施惠娟 陈哲宇 +3 位作者 李明峰 魏东芝 吴祥甫 袁勤生 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期601-603,共3页
甲醇酵母 (Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人 Cu,Zn- SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体 p PIC3.5K,经转化 his4缺陷型酵母 GS1 1 5,用 MD培养基及 PCR方法筛选阳性转化子 ,并用含 G41 8的 YPD培养基筛选多拷... 甲醇酵母 (Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人 Cu,Zn- SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体 p PIC3.5K,经转化 his4缺陷型酵母 GS1 1 5,用 MD培养基及 PCR方法筛选阳性转化子 ,并用含 G41 8的 YPD培养基筛选多拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达。 SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人 Cu,Zn- SOD,经计算机扫描分析 ,表达量占酵母可溶性蛋白的 1 4% ,所表达的人 Cu,Zn- SOD比活可达每毫克蛋白质 77U。 展开更多
关键词 人Cu Zn-SOD 甲醇酵母 基因表达 蛋白质印迹
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抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达 被引量：1
7
作者 杨卫东 李彪 +2 位作者 朱承谟 杨冠珍 吴祥甫 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期333-336,共4页
制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠... 制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。 展开更多
关键词 癌胚抗原 单链抗体 链霉亲和素 基因表达
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基因重组幽门螺杆菌HspA—Zot融合蛋白质口服疫苗的研制 被引量：1
8
作者 李明峰 程军 +2 位作者 何志勇 熊伟民 吴祥甫 《中华腹部疾病杂志》 2003年第8期547-551,562,共6页
目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA—Zot(HZ)；观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况；观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应。方法①用PCR方法... 目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA—Zot(HZ)；观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况；观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应。方法①用PCR方法扩增HspA和Zot两个目的基因片段，将它们分别克隆至pSK(+)质粒上，然后插入含T7启动子pET一28a(+)的表达载体中，构建含双基因的表达质粒pET—hz，转化E，coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达高效的融合蛋白HZ；②融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后，与HspA重组蛋白质共同标记同位素^125I，经小鼠灌胃实验观察其在小鼠小肠内的吸收情况。结果①经测序，hspA-zot(hz)融合基因片段由1 575bp组成，为编码515个氨基酸残基的多肽。经SDS—PAGE检测发现，融合基因表达的蛋白质相对分子质量(M)r约为65×10^3。②标记同位素^125I的HZ和HspA，经小鼠灌胃实验观察不同时间段的吸收，情况，结果发现在5～10min时间段，HZ组出现吸收峰值，约为对照组的8．65倍(P<0．001)，且吸收峰值时问明显提前。结论融合蛋白质HZ经口服后可以在小鼠小肠内迅速被大量吸收，经口服免疫后可以刺激机体产生较高滴度特异性抗体。HZ可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的候选口服疫苗株。 展开更多
关键词 基因重组 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 霍乱弧菌封闭小带毒素 融合蛋白质 口服疫苗 免疫应答
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拟南芥ATLP-3基因在转基因烟草中的整合和表达 被引量：1
9
作者 黄虎 耿川东 +3 位作者 李家大 郝建疆 谢伟军 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期217-221,共5页
将拟南芥 ATL P- 3基因从质粒 p UCTL 亚克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,得到的质粒命名为p BITL。被亚克隆到重组质粒 p BITL 的 ATL P- 3基因通过农杆菌 L BA44 0 4介导法导入烟草 (N icotiana tobacco L.var Gexin No.1)。通过卡那... 将拟南芥 ATL P- 3基因从质粒 p UCTL 亚克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,得到的质粒命名为p BITL。被亚克隆到重组质粒 p BITL 的 ATL P- 3基因通过农杆菌 L BA44 0 4介导法导入烟草 (N icotiana tobacco L.var Gexin No.1)。通过卡那霉素抗性筛选 ,得到 19株再生烟草植株。PCR(用根据 ATL P- 3基因合成的引物 )检测到其中 4株 (A1、A4、B2、C6 )有 ATL P- 3基因的整合。进一步的 PCR(用根据 Ca MV35 s启动子和 NOS终止子序列合成的引物 )分析表明 ,ATL P- 3基因是在 Ca MV35 s启动子和 NOS终止子控制下整合到烟草的基因组 DNA中的。 4株转基因烟草的 Southern blotting检测结果显示 ,只有被整合到 B2和 C6的 ATL P- 3基因稳定地存在于基因组 DNA中 ;Western blotting检测分析表明 ,仅有 C6转基因植株表达了 ATL P- 展开更多
关键词 拟南芥ATLP-3基因 转基因烟草 整合 表达
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核骨架与真核基因复制起点 被引量：3
10
作者 何明亮 李载平 《细胞生物学杂志》 CSCD 1995年第4期155-162,共8页
一、核骨架 核骨架(nuclear scaffold)又名核基质(nuclear matrix,NM),是细胞核内一种动态亚组分结构,其功能是将DNA组织成相对独立的区域(domain),并为其提供专一性的转录、复制及RNA加工的控制位点。它在形态上为一种细胞核内不溶的... 一、核骨架 核骨架(nuclear scaffold)又名核基质(nuclear matrix,NM),是细胞核内一种动态亚组分结构,其功能是将DNA组织成相对独立的区域(domain),并为其提供专一性的转录、复制及RNA加工的控制位点。它在形态上为一种细胞核内不溶的骨架网络,包括核纤层(lamina)、内层蛋白纤维颗粒、残留的核仁和核孔复合体。它普遍存在于真核细胞中,维持了细胞核的基本形态。 展开更多
关键词 细胞 核骨架 真核基因 复制 细胞生物学
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