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结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究 被引量：17
1
作者 李桂莲 张敬蕊 +3 位作者 赵秀芹 杨骜 连璐璐 万康林 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第6期354-359,共6页
目的探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。方法采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum in... 目的探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。方法采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。结果 INH MIC为0.2500～1.0000μg/ml(低水平耐药菌株)和MIC≥2.0000μg/ml(高水平耐药菌株)的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者[53.8%(7/13),4.3%(2/46)],katG315突变率前者低于后者[15.4%(2/13),76.1%(35/46)],χ2值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000μg/ml和MIC≥32.0000μg/ml的RFP耐药株,rpoB531和526位总突变率前者低于后者[62.5%(5/8),95.5%(21/22)],P确切概率=0.048。结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG315突变与INH高水平耐药有关;rpoB531和526位突变与RFP高水平耐药有关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 微生物敏感性试验 RFP INH 突变
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单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究 被引量：6
2
作者 逄宇 李桂莲 +5 位作者 王玉峰 宋媛媛 李强 欧喜超 董海燕 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第5期275-279,共5页
目的探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。方法从国家结核病参比实验室2007—2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突... 目的探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。方法从国家结核病参比实验室2007—2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果在23株单耐利福平的菌株中,有16株(69.6%)检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192μg/ml和256μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75μg/ml、4μg/ml、2μg/ml和0.5μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为8μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32μg/ml和16μg/ml。结论不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 利福平 抗药性 细菌
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基于hsp65基因的PCR-RFLP用于陕速鉴定分枝杆菌菌种的初步研究 被引量：7
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作者 王心 张媛媛 +5 位作者 陈保文 刘志广 赵秀芹 王国治 李月红 万康林 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期616-618,共3页
目的基于hsp65基因的PCR-限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）用于快速鉴定分枝杆菌菌种的方法的建立和评价。方法选择分枝杆菌hsp65基因作为目的基因，对分枝杆菌标准株进行PCR扩增，扩增产物经HaeIH和BstpI两种限制性内切酶酶切，... 目的基于hsp65基因的PCR-限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）用于快速鉴定分枝杆菌菌种的方法的建立和评价。方法选择分枝杆菌hsp65基因作为目的基因，对分枝杆菌标准株进行PCR扩增，扩增产物经HaeIH和BstpI两种限制性内切酶酶切，酶切产物采用4％MetaPhor琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带位置，计算条带分子量，确定不同菌种的特异指纹图谱。结果共对40种（株）分枝杆菌进行分析，6株结核分枝杆菌复合体菌株呈现两种指纹图谱，34株非结核分枝杆菌标准株均具有惟一的指纹图谱。结论基于hsp65基因的PCR-RFLP可用于分枝杆菌菌种的快速鉴定，且方法简便，易于标准化。 展开更多
关键词 分枝杆菌 菌种鉴定 PCR-限制性酶切片段长度多态性
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马赛分枝杆菌肺病一例并文献复习 被引量：3
4
作者 王涛 张媛媛 +4 位作者 秦雪冰 李晓亮 赵秀芹 刘志广 万康林 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期571-574,共4页
目的分析马赛分枝杆菌肺病的临床特征，探讨其鉴别诊断方法。方法分析患者的临床表现及实验室检测结果，对其临床分离菌株进行细菌学检查和分子生物学鉴定，采用PCR扩增rpoB和hsp65基因片段和双向DNA测序，并与美国国立生物技术信息中心... 目的分析马赛分枝杆菌肺病的临床特征，探讨其鉴别诊断方法。方法分析患者的临床表现及实验室检测结果，对其临床分离菌株进行细菌学检查和分子生物学鉴定，采用PCR扩增rpoB和hsp65基因片段和双向DNA测序，并与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库比对进行菌种鉴定。结果患者女，72岁，体质瘦弱，因反复出现呼吸道症状而入院，既往多次治疗无效。该病例的临床分离菌株经细菌学检查和分子生物学鉴定确定为马赛分枝杆菌，rpoB和hsp65基因片段测序结果与NCBI数据库马赛分枝杆菌相应片段的同源性分别为100％和99％，结合临床表现确诊为马赛分枝杆菌肺病。药敏试验结果显示该菌株对多种药物耐药，根据药敏试验结果和患者的身体条件确定治疗方案，采用静脉滴注头孢西丁和口服阿米卡星治疗有效。结论马赛分枝杆菌肺病多发于免疫功能低下人群，其临床和影像学表现与结核病相似，通过实验室细菌学检测和菌种鉴定，可以对二者进行鉴别。 展开更多
关键词 分枝杆菌感染 分枝杆菌 马赛
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肺结核患儿胃液样本结核分枝杆菌培养阳性率提高方法的探讨 被引量：2
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作者 李桂莲 方敏 +11 位作者 姜靖伟 王瑞欢 钱程宇 于晋杰 曹滨 许达 赵秀芹 李马超 刘海灿 孙琳 朱渝 万康林 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第1期31-37,共7页
目的:建立提高肺结核患儿胃液样本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)培养阳性率的方法,同时,探讨培养液的pH值对MTB抗原-胶体金检测试剂正确判读结果的影响和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)对结核样本前处理... 目的:建立提高肺结核患儿胃液样本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)培养阳性率的方法,同时,探讨培养液的pH值对MTB抗原-胶体金检测试剂正确判读结果的影响和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)对结核样本前处理液pH值的调节作用。方法:将70份疑似肺结核患儿胃液样本同时用两步培养法、传统培养法和Xpert Ultra进行检测。两步培养法为先将胃液样本直接接种到罗氏培养基上,约20~30 d后收集可疑MTB菌落再行常规的碱处理-中和离心法处理进行分离培养(传统培养法)。比较传统培养法和两步法阳性检出率的差异;以样本的Xpert Ultra检测结果作为菌载量标准,分析两步法在不同菌载量样本中的阳性检出率差异。同时,配制系列pH值梯度的溶液,确定MTB抗原-胶体金检测试剂获得最佳显示结果的最适pH值范围;用系列体积的PBS缓冲液(pH=6.8)中和3%或4%NaOH与等体积样本的混合液,确定pH值至7~9时所需的体积稀释倍数。结果:传统培养法阳性检出率为26.5%(18/68),两步法阳性检出率为23.1%(15/65),未发现两种方法的阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=0.125,P>0.05)。两步法在传统培养法的基础上将阳性检出率从26.5%(18/68)提高到32.4%(22/68)。两步法在菌载量低级及以上分级样本中的阳性检出比例(44.0%,11/25)明显高于菌载量极低级及以下标本的阳性检出比例(11.8%,4/34),差异有统计学意义(χ^(2)=7.896,P=0.005)。本研究所选用的MTB抗原-胶体金检测试剂最适pH值范围为6~9。胃液模拟样本经3%或4%的NaOH处理后,调节pH值至7~9时需用PBS缓冲液(pH=6.8)稀释至少10或14倍,而痰液模拟样本经3%或4%的NaOH处理后,调节pH值至7~9时需用PBS缓冲液(pH=6.8)稀释至少12或16倍。结论:分离培养两步法的阳性检出率未优于传统培养法,可作为传统培养法的补充,推荐对难以确诊的高度可疑肺结核患儿使用该方法进行检测� 展开更多
关键词 儿童 结核 肺 胃液 诊断技术和方法
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