几种海洋微藻基因组DNA的分离提取及PCR检测 被引量：17

1

作者 张桂和 徐碧玉 王珺 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期68-72,共5页

用改良CTAB法分别提取6种海洋微藻的基因组DNA,发现提取的DNA纯度、产率高(>100μg.g-1鲜重),DNA完整性好。以6种海洋微藻的基因组DNA为模板,并以5'TTCGAGCCAG3'(OPC-01)为随机引物,对PCR反应条件进行研究。结果表明,25μl... 用改良CTAB法分别提取6种海洋微藻的基因组DNA,发现提取的DNA纯度、产率高(>100μg.g-1鲜重),DNA完整性好。以6种海洋微藻的基因组DNA为模板,并以5'TTCGAGCCAG3'(OPC-01)为随机引物,对PCR反应条件进行研究。结果表明,25μl反应体系中,Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol.L-1、1.6U、20pmol.L-1、50ng和2.5mmol.L-1。扩增程序优化为:94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,循环45次,最后于72℃再延伸10min。酶切实验结果表明,6种海洋微藻的基因组DNA都能被EcoRⅠ酶切,酶切图谱呈弥散状,满足分子水平操作的要求,可直接应用于进一步的分子生物学实验。 展开更多

关键词 海洋微藻 DNA提取 CTAB 酶切 PCR检测

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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8

2

作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页

采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot

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油梨在中国的发展前景 被引量：9

3

作者 施宗强 郑德龙 喻时周 《福建热作科技》 2007年第4期37-38,34,共3页

通过介绍油梨的基本情况,简述油梨生产的不利因素,论述油梨在我国栽培的有利条件及对发展油梨生产的几点建议。

关键词 油梨 发展前景

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巴西橡胶树的分子生物学研究进展 被引量：5

4

作者 彭世清 陈守才 《生物技术通讯》 CAS 2001年第4期314-317,共4页

巴西橡胶树是一种重要的热带经济作物 ,由于橡胶树体内橡胶含量多 ,且容易采收 ,所以橡胶树一直是天然橡胶的商业来源。相比于模式植物和粮食等经济作物来说 ,分子生物学研究显著滞后。而且橡胶树是多年生乔木 ,经济性状多集中于胶乳 ,... 巴西橡胶树是一种重要的热带经济作物 ,由于橡胶树体内橡胶含量多 ,且容易采收 ,所以橡胶树一直是天然橡胶的商业来源。相比于模式植物和粮食等经济作物来说 ,分子生物学研究显著滞后。而且橡胶树是多年生乔木 ,经济性状多集中于胶乳 ,因此研究难度大 ,研究者也不多。本文就巴西橡胶的分子生物学方面的研究进行综述。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 基因克隆 表达 分子生物学 综述

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无机焦磷酸化酶融合基因克隆分析及表达载体的构建 被引量：1

5

作者 范海阔 黄东杰 +2 位作者 刘巧泉 顾丽红 张树珍 《西南农业学报》 CSCD 2007年第6期1267-1271,共5页

无机焦磷酸化酶(PPa)基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因,为将该基因运用于甘蔗转基因的研究,从面包酵母克隆了该基因,利用生物信息学方法对该基因进行组成成分和理化性质分析,预测分析其疏水性/亲水性,并将其核苷酸和编码氨基... 无机焦磷酸化酶(PPa)基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因,为将该基因运用于甘蔗转基因的研究,从面包酵母克隆了该基因,利用生物信息学方法对该基因进行组成成分和理化性质分析,预测分析其疏水性/亲水性,并将其核苷酸和编码氨基酸序列提交Genbank进行比对分析。利用从武运粳8号水稻中克隆得到Rub isco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区rbcS启动子,构建了由rbcS引导的无机焦磷酸化酶融合基因,并将其转入根癌农杆菌EHA105菌株中。 展开更多

关键词 转基因甘蔗 PPA 水稻rbcS 生物信息学

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山蛭基因组DNA的提取及其PCR扩增产物的分析 被引量：2

6

作者 谭琳 康由发 +1 位作者 施江 郑学勤 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期8-9,共2页

利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素 (抗凝血蛋白 )基因 ,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA ,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法 ,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素 ,得到的基因组DNA... 利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素 (抗凝血蛋白 )基因 ,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA ,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法 ,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素 ,得到的基因组DNA保持完整 ,无降解。以之作为模板 ,进行PCR扩增 ,获得一个长度约为 2 37bp的特异性片段 ,此片段与印度山蛭蛭素的cDNA大小几乎一致。初步表明 ,这个序列没有内含子 。 展开更多

关键词 山蛭 基因组DNA 提取 PCR扩增产物 山蛭素

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无机焦磷酸化酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：2

7

作者 黄东杰 张树珍 +2 位作者 冯翠莲 顾丽红 范海阔 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期69-73,共5页

提取面包酵母基因组DNA,用无机焦磷酸化酶(PPase)基因特异引物通过PCR扩增出864bp的片段,并将该片段克隆至pMD18-T上。序列分析结果表明,该克隆序列与GeneBank上的PPase基因序列同源性达到100%。进一步将叶肉细胞特异性启动子rbcS和PPas... 提取面包酵母基因组DNA,用无机焦磷酸化酶(PPase)基因特异引物通过PCR扩增出864bp的片段,并将该片段克隆至pMD18-T上。序列分析结果表明,该克隆序列与GeneBank上的PPase基因序列同源性达到100%。进一步将叶肉细胞特异性启动子rbcS和PPase基因克隆至植物表达载体pCBI上,构建了由rbcS启动子调控的PPase基因植物表达载体pCBIPR。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌EHA105中,为农杆菌介导的PPase基因对植物的遗传转化奠定基础。 展开更多

关键词 甘蔗 Ppase RBCS 植物表达载体

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双价抗病基因导入籽瓜的遗传转化研究 被引量：1

8

作者 辛莉 施江 +3 位作者 乐锦华 郑学勤 陆璐 王登伟 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第2期16-19,共4页

以籽瓜主栽品种新籽瓜2号、五原籽瓜等为研究材料,用苗龄1-3d的子叶切块作外植体,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2 mg/L+IBA 0.1 mg/L,芽伸长培养基为MS+KT 0.2 mg/L,诱导生根的培养基是MS+IAA 0.5 mg/L。籽瓜遗传转化研究结果表明农杆菌... 以籽瓜主栽品种新籽瓜2号、五原籽瓜等为研究材料,用苗龄1-3d的子叶切块作外植体,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2 mg/L+IBA 0.1 mg/L,芽伸长培养基为MS+KT 0.2 mg/L,诱导生根的培养基是MS+IAA 0.5 mg/L。籽瓜遗传转化研究结果表明农杆菌感染时间以10min,共培养时间以2d为合适。共获得抗卡那霉素100mg/L的试管苗41个,PCR检测呈阳性的有15株,转化率为34.9%。该研究初步建立了籽瓜的遗传转化体系和转化体的检测体系。 展开更多

关键词 籽瓜 植株再生 遗传转化 PCR

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海南岛王下沟兰科植物多样性研究

9

作者 施宗强 林芳升 喻时周 《福建热作科技》 2008年第4期20-22,共3页

简要介绍海南坝王岭山区的王下沟一带兰科植物物种和生境的多样性,通过对沟谷内兰科植物的种类、数目、生境、海拔等项目进行综合调查,进一步研究和分析了沟谷兰科植物的物种多样性以及现阶段沟谷兰科植物所面临的问题,并对王下沟内丰... 简要介绍海南坝王岭山区的王下沟一带兰科植物物种和生境的多样性,通过对沟谷内兰科植物的种类、数目、生境、海拔等项目进行综合调查,进一步研究和分析了沟谷兰科植物的物种多样性以及现阶段沟谷兰科植物所面临的问题,并对王下沟内丰富而宝贵的兰科植物物种资源的合理利用和保护提出了一些意见和建议。 展开更多

关键词 海南 王下沟 兰科植物 多样性

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植物基因沉默信号分子的研究进展

10

作者 田娥 刘志昕 秦云霞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第S1期55-58,共4页

RNA沉默是广泛存在于真核生物中作用于特定RNA的降解机制,其在植物中的系统性传播主要依靠可移动的沉默信号分子.信号在植株中能进行双向性的远距离传播,但向上比向下传播更有效率.目前对这方面的研究主要在嫁接、农杆菌侵染和基因枪轰... RNA沉默是广泛存在于真核生物中作用于特定RNA的降解机制,其在植物中的系统性传播主要依靠可移动的沉默信号分子.信号在植株中能进行双向性的远距离传播,但向上比向下传播更有效率.目前对这方面的研究主要在嫁接、农杆菌侵染和基因枪轰击三个体系中进行.此信号分子的成分可能是siRNA、异常RNA及dsRNA中的一种. 展开更多

关键词 RNA沉默 信号分子 SIRNA 异常RNA DSRNA

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几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定 被引量：28

11

作者 郭安平 黄明 +3 位作者 郑学勤 彭世清 程新奇 黎宇 《中国麻作》 北大核心 1997年第4期4-10,共7页

采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标... 采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标记。本研究发展的这一快速、简便、适于麻类作物及其近缘种植物的总DNA提取方法，将有助于在DNA分子水平研究麻类种质资源的遗传多样性。 展开更多

关键词 麻类作物 DNA提取 限制性内功酶 PCR

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双价抗菌肽基因转化辣椒 被引量：23

12

作者 李乃坚 余小林 +3 位作者 李颖 黄自然 张银东 王得元 《热带作物学报》 CSCD 2000年第4期45-51,共7页

在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株... 在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株，对部分ＫａｎＲ植株进行点杂交、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测，结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验，结果显示，转基因植株具有较强的抗病力。 展开更多

关键词 辣椒 抗菌肽 双基因表达载体 基因转化

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建兰花叶病毒的分离、鉴定及检测研究 被引量：22

13

作者 潘俊松 刘志昕 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期63-70,共8页

从石料兰病株中获得一个病毒分离物，利用曼陀罗进行分离纯化和繁殖．并通过梯度离心获得提纯病毒，经生物学、血清学鉴定及电镜观察，鉴定该分离物属于建兰花叶病毒（CyMV）。分别用纯化病毒及SDS-PAGE回收病毒外壳蛋白免疫家兔，获得... 从石料兰病株中获得一个病毒分离物，利用曼陀罗进行分离纯化和繁殖．并通过梯度离心获得提纯病毒，经生物学、血清学鉴定及电镜观察，鉴定该分离物属于建兰花叶病毒（CyMV）。分别用纯化病毒及SDS-PAGE回收病毒外壳蛋白免疫家兔，获得2种特异性抗血清，并用SPA-ELISA方法对兰花样品进行了检测研究。 展开更多

关键词 兰花 建兰 花叶病毒 血清学检测

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核酶基因转化番木瓜的研究 被引量：19

14

作者 赵志英 周鹏 +1 位作者 曾宪松 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1998年第2期20-26,共7页

利用核酶（Ribozyme，Rib．）基因转化番木瓜（CaricapapayaL．）探索培育抗番木瓜环斑病毒（PapayaRingspotVirus，PRV）品种的新途径。用三亲交配法将切割PRVRNA的Rib．基因的表达载体（P35s／NPTⅡ，Rib．）转入农杆菌LBA4404，采用... 利用核酶（Ribozyme，Rib．）基因转化番木瓜（CaricapapayaL．）探索培育抗番木瓜环斑病毒（PapayaRingspotVirus，PRV）品种的新途径。用三亲交配法将切割PRVRNA的Rib．基因的表达载体（P35s／NPTⅡ，Rib．）转入农杆菌LBA4404，采用农杆菌介导转化将Rib．基因和NPTⅡ基因导入番木瓜细胞的核基因组中。其培养的外植体在含有Kan．100μg／mL，Carb．500μg／mL的选择培养基上产生抗性的愈伤组织，并通过体胚途径再生植株。经DNAdotblot，Southernblot分子杂交检测证明，Rib．基因已整合到番木瓜再生植株的核基因组中。RNAdotblot分析和攻毒试验结果表明，核酶基因在转基因植株中获得了表达，转基因番木瓜植株对PRV具有一定的抗性。 展开更多

关键词 番木瓜 核酶基因 基因转化 转基因植株 检测

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EMS诱变菠萝愈伤组织选择抗性突变体的研究 被引量：14

15

作者 黄俊生 孔德春 黄峰 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期1-6,共6页

菠萝愈伤组织继代培养时间３０ｄ，ＥＭＳ（甲基磺酸乙酯）诱变剂浓度对愈伤组织的存活率有影响，而对继代５ｄ到１５ｄ的愈伤组织类型，三种ＥＭＳ浓度（０．２５％～０．７５％）影响不显著。ＥＭＳ诱变处理时间对存活力影响很大，而... 菠萝愈伤组织继代培养时间３０ｄ，ＥＭＳ（甲基磺酸乙酯）诱变剂浓度对愈伤组织的存活率有影响，而对继代５ｄ到１５ｄ的愈伤组织类型，三种ＥＭＳ浓度（０．２５％～０．７５％）影响不显著。ＥＭＳ诱变处理时间对存活力影响很大，而且愈伤组织类型即继代培养天数也与ＥＭＳ诱变处理有关。继代１５ｄ的愈伤组织可选择０．２５％～０．７５％ｋＥＭＳ浓度和１０ｈ诱变处理时间；而继代３０ｄ的愈伤组织可选择０．７５％ＥＭＳ浓度和１０ｈ诱变处理时间。愈伤组织切割为几小块后，如果不经过一定时间（１５－３０ｄ）的预培养，如Ｙ１经ＥＭＳ诱变后将大多数死亡，达不到最后选择的目的。未经ＥＭＳ诱变剂处理的继代愈伤组织，在羟脯氨酸浓度为１．００％的选择培养基培养２０ｄ再在基本培养基中继代培养时，愈伤组织的生长受到严重的抑制最后死亡；而经ＥＭＳ诱变处理的菠萝愈伤组织，在羟脯氨酸浓度为１．０％的选择培养基培养２０ｄ后还有２８．６％的存活率。这说明经ＥＭＳ诱变剂处理的愈伤组织出现大量的变异，其中有部分变异细胞可以在羟脯氨酸存在下的选择培养基生长。经ＥＭＳ诱变处理并经羟脯氨酸选择继代后存活下来的愈伤组织，其体内游离的脯氨酸含量是对照组的１．６－２．８倍，这说明经? 展开更多

关键词 甲基磺酸乙酯(EMS)菠萝 愈伤组织 突变体

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基因枪法转化甘蔗胚性愈伤组织获得转基因甘蔗白化苗 被引量：14

16

作者 林俊芳 张银东 +1 位作者 陈如凯 郑学勤 《福建农业大学学报》 CSCD 1997年第1期18-23,共6页

采用ＪＱ－７００型高速基因枪，以ＮＰＴⅡ基因为选择标记基因，以抗菌肽Ｄ基因为目的基因，设２５ｍｍ和３５ｍｍ２种火药套管，长短２种容器室，一次和两次轰击共８种处理组合，对甘蔗胚性愈伤组织进行轰击转化．结果２５ｍｍ火药套... 采用ＪＱ－７００型高速基因枪，以ＮＰＴⅡ基因为选择标记基因，以抗菌肽Ｄ基因为目的基因，设２５ｍｍ和３５ｍｍ２种火药套管，长短２种容器室，一次和两次轰击共８种处理组合，对甘蔗胚性愈伤组织进行轰击转化．结果２５ｍｍ火药套管短容器室二次轰击和３５ｍｍ火药套管短容器室二次轰击的２种处理组合。 展开更多

关键词 甘蔗 基因枪法 遗传转化 转基因甘蔗

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天蚕抗菌肽B基因在广霍香抗病育种中的应用 被引量：16

17

作者 周鹏 郑学勤 陈向民 《热带作物学报》 CSCD 1998年第2期27-31,共5页

用天蚕抗菌肽B基因转化广霍香，以期产生抗广霍香青枯病的转基因株系。通过农杆菌介导的叶盘法将抗菌肽B基因转入广霍香的组织细胞，在Kan的筛选培养基上经过丛芽途径获得转基因植株；采用DNADotblot、Southernblot、RNADotblot和大田... 用天蚕抗菌肽B基因转化广霍香，以期产生抗广霍香青枯病的转基因株系。通过农杆菌介导的叶盘法将抗菌肽B基因转入广霍香的组织细胞，在Kan的筛选培养基上经过丛芽途径获得转基因植株；采用DNADotblot、Southernblot、RNADotblot和大田攻毒试验证实抗菌肽B基因已整合到再生植株的核基因组中，获得了高水平的表达，产生较强的抗病效果。 展开更多

关键词 广霍香 天蚕抗菌肽 B基因 抗病育种 转基因植株

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香蕉ACC合成酶cDNA的PCR扩增及序列测定 被引量：14

18

作者 金志强 彭世清 +2 位作者 邵寒霜 孔德骞 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1998年第1期48-51,共4页

从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保... 从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保守区中的7个，并且包括该酶的活性中心。 展开更多

关键词 香蕉 ACC合成酶 PCR CONA 序列测定

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转基因番木瓜小规模田间攻毒试验 被引量：11

19

作者 周鹏 郑学勤 +1 位作者 陈向民 刘北洋 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期58-62,共5页

采用人工接种PRV（木瓜环斑病毒）和大田自然攻毒试验．检测了木瓜环斑病毒外壳蛋白基因转基因木瓜（PRV-CP+）和木瓜环斑病毒外壳蛋白基因──核酸酶SN基因的议价基因（PRV—CP－SN）转基因木瓜（PRVCP一SN+）对PRV侵染的抗病能力。试... 采用人工接种PRV（木瓜环斑病毒）和大田自然攻毒试验．检测了木瓜环斑病毒外壳蛋白基因转基因木瓜（PRV-CP+）和木瓜环斑病毒外壳蛋白基因──核酸酶SN基因的议价基因（PRV—CP－SN）转基因木瓜（PRVCP一SN+）对PRV侵染的抗病能力。试验结果表明，绝大多数的转基因植株对PRV的浸染表现不同程度的延缓能力，部分植株能抵抗PRV达2－3个月以上，甚至更长时间。两样本均数之差的显著性测验结果表明，PRV-CP－SN+的大田自然攻毒表现对PRV的抵抗能力比PRV－CP+的强。 展开更多

关键词 转基因 番木瓜 人工接种 田间攻毒 抗病性

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抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究 被引量：12

20

作者 张家明 孙雪飘 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期50-57,共8页

将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于，克隆到双元表达载体PBin19上，构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404，再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿... 将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于，克隆到双元表达载体PBin19上，构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404，再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿香，获27个转基因植株。Southern杂交结果表明，抗菌肽B、D基因已同时整合进3个株系染色体组中。与病原细菌Pseudomonassolanacearum试管共培养结果表明，转基因植株获得较强抗病性。盆栽接菌试验结果也表明．转基因植株具有较强抗病性。 展开更多

关键词 广藿香 抗菌肽 双基因表达载体 转基因植株

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