橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株 被引量：8

1

作者 戴雪梅 李哲 +4 位作者 华玉伟 黄天带 孙爱花 周权男 黄华孙 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2040-2045,共6页

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬... 【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。 展开更多

关键词 橡胶树 热研8-79 胚性悬浮细胞 原生质体 看护培养 植株再生

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一种优化的橡胶树木质部石蜡切片制作方法 被引量：8

2

作者 蔡海滨 涂敏 +4 位作者 胡彦师 程汉 安泽伟 华玉伟 黄华孙 《热带农业科学》 2015年第6期25-28,共4页

针对常规石蜡切片方法无法制得橡胶树木质部切片的问题,优化了橡胶树木质部切片制作方法并进行了验证评估。以3龄和30龄的橡胶树木材为材料,经FAA固定、乙醇预处理后,增加了以冰醋酸软化木质部这一步骤,用正丁醇取代二甲苯进行组织透明... 针对常规石蜡切片方法无法制得橡胶树木质部切片的问题,优化了橡胶树木质部切片制作方法并进行了验证评估。以3龄和30龄的橡胶树木材为材料,经FAA固定、乙醇预处理后,增加了以冰醋酸软化木质部这一步骤,用正丁醇取代二甲苯进行组织透明,其余步骤参考常规方法。结果表明,优化的石蜡切片方法可制作出完整、高质量的木质部切片,其木纤维的长度、宽度与硝酸离析所得到的木纤维一致度高,为橡胶树成龄木材的解剖学研究提供了方法。 展开更多

关键词 橡胶树 木质部 石蜡切片 木纤维

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AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响 被引量：4

3

作者 戴雪梅 黄天带 +3 位作者 李季 杨先锋 辛士超 黄华孙 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1426-1431,共6页

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 ... 橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。 展开更多

关键词 橡胶树 花药愈伤组织 AGNO3 细胞形态 体胚发生

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一种快速微量提取橡胶树胚基因组DNA的方法 被引量：2

4

作者 方家林 蔡海滨 +2 位作者 涂敏 华玉伟 黄华孙 《热带农业科学》 2013年第6期19-22,共4页

为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法。运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS法分别对1 mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证... 为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法。运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS法分别对1 mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证。结果表明,尿素改良法的DNA提取率高于SDS法和CTAB改良法;样品的DNA适合PCR检测需要。因此尿素改良法是适宜于微量橡胶树胚基因组DNA提取的理想方法。 展开更多

关键词 橡胶树 体胚 DNA提取

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橡胶树魏克汉种质分子量与非胶组分含量的比较分析 被引量：2

5

作者 蔡海滨 涂敏 +4 位作者 孙爱花 安泽伟 程汉 胡彦师 李维国 《热带农业科学》 2018年第10期46-49,56,共5页

天然橡胶分子量与非胶组分的含量对其品质影响巨大,为探究不同橡胶树种质分子量与非胶组分的差异,选取目前大面积种植的3份橡胶树魏克汉种质‘RRIM600’、‘热研73397’、‘热研879’为研究材料,种植7年后收集胶乳,制成干胶,分别检测分... 天然橡胶分子量与非胶组分的含量对其品质影响巨大,为探究不同橡胶树种质分子量与非胶组分的差异,选取目前大面积种植的3份橡胶树魏克汉种质‘RRIM600’、‘热研73397’、‘热研879’为研究材料,种植7年后收集胶乳,制成干胶,分别检测分子量与蛋白质、糖、脂肪、金属离子等4种非胶组分,并对其进行分析。结果表明, 3份种质差异显著,‘热研879’干胶分子量、糖、脂肪和金属离子含量显著高于其它两份种质;‘热研73397’干胶蛋白质含量最高;‘RRIM600’干胶分子量最低,非胶组分总体最少。 展开更多

关键词 天然橡胶 魏克汉种质 分子量 非胶组分

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巴西橡胶树红根病菌DNA提取有效方法比较 被引量：2

6

作者 涂敏 蔡海滨 +3 位作者 孙爱花 胡彦师 华玉伟 黄华孙 《中国农学通报》 CSCD 2012年第34期12-16,共5页

旨在筛选适用于橡胶树红根病菌DNA提取的有效方法并评价其效果。利用CTAB改良法、氯化苄改良法、SDS改良法等3种方法提取橡胶树红根病菌菌丝体DNA,并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量;再选... 旨在筛选适用于橡胶树红根病菌DNA提取的有效方法并评价其效果。利用CTAB改良法、氯化苄改良法、SDS改良法等3种方法提取橡胶树红根病菌菌丝体DNA,并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量;再选用提取效果最好的方法提取5个时间段(4、6、8、10、12天)的菌丝DNA并进行ITS-PCR检测。CTAB改良法提取的样品DNA纯度最好,产率最高,OD260/OD280为1.82～1.84,浓度可达280μg/mL;培养4～6天的菌丝提取的DNA质量最高,适合PCR检测需要。CTAB改良法是一种适用于橡胶树红根病菌DNA提取的理想方法。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 红根病菌 DNA提取 CTAB改良法

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橡胶灵芝菌(Ganoderma pseudoferreum)DNA条形码检测筛选（英文） 被引量：1

7

作者 蔡海滨 涂敏 +4 位作者 孙爱花 程汉 安泽伟 胡彦师 李维国 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2225-2234,共10页

选用10对DNA条形码标准序列ITS、COI、nrDNA-LSU、nrDNA-SSU和trnL DNA对海南和云南红根病区分离的21个橡胶灵芝菌进行检测。除COI和trnLDNA外,其他8对引物均扩增得到PCR产物,产物大小范围为268～1355bp,种内相似度为98.05%～99.54%。... 选用10对DNA条形码标准序列ITS、COI、nrDNA-LSU、nrDNA-SSU和trnL DNA对海南和云南红根病区分离的21个橡胶灵芝菌进行检测。除COI和trnLDNA外,其他8对引物均扩增得到PCR产物,产物大小范围为268～1355bp,种内相似度为98.05%～99.54%。分别将扩增得到的序列与GenBank公布上的Ganoderma属和常见真菌属序列,共77个ITS、74个nrDNA-LSU和74个nrDNA-SSU序列进行系统进化树构建与分析。结果表明:nrDNA-LSU序列和nrDNA-SSU序列种间差异较小,不能准确区分Ganoderma属及其他属;5对ITS序列均能区分Ganoderma属,但仅ITS1/ITS4序列能将Ganoderma属下16个种归入不同分支。ITS1/ITS4序列表现出适宜的种内与种间差异,适宜作为G. pseudoferreum的DNA条形码。 展开更多

关键词 橡胶灵芝菌 鉴定 DNA条形码 ITS

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橡胶树不同品种白粉病抗性鉴定 被引量：1

8

作者 方家林 涂敏 +4 位作者 蔡海滨 胡彦师 孙爱花 华玉伟 黄华孙 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期88-90,共3页

选取国内选育的50份橡胶树品种,将白粉病菌纯化后进行大田鉴定和室内鉴定,以评价各品种对白粉病的抗性。50份橡胶树品种人工接种大田鉴定结果为：抗病品种6份,中感品种26份,感病品种13份,高感品种5份。室内鉴定结果与大田鉴定结果显著相... 选取国内选育的50份橡胶树品种,将白粉病菌纯化后进行大田鉴定和室内鉴定,以评价各品种对白粉病的抗性。50份橡胶树品种人工接种大田鉴定结果为：抗病品种6份,中感品种26份,感病品种13份,高感品种5份。室内鉴定结果与大田鉴定结果显著相关,同时菌丝长度范围是26.90~53.22μm。 展开更多

关键词 橡胶树 白粉病 抗性鉴定

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巴西橡胶树48份野生种质对胶孢炭疽菌抗性评价

9

作者 蔡海滨 涂敏 +4 位作者 胡彦师 方家林 程汉 安泽伟 李维国 《湖北农业科学》 2018年第21期65-68,共4页

选取来自巴西3个州的48份橡胶树(Hevea brasiliensis)野生种质,将胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)活化后进行大田接种鉴定及自然条件评价,以筛选抗性种质。橡胶树种质人工接种大田鉴定结果表明,抗病种质3份,中感种质14份,... 选取来自巴西3个州的48份橡胶树(Hevea brasiliensis)野生种质,将胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)活化后进行大田接种鉴定及自然条件评价,以筛选抗性种质。橡胶树种质人工接种大田鉴定结果表明,抗病种质3份,中感种质14份,感病种质25份,高感种质6份;自然评价的结果与大田接种鉴定结果显著相关。3份抗性种质均来自于巴西Rondonia州。 展开更多

关键词 橡胶树(Hevea brasiliensis) 野生种质 胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides) 抗性评价

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橡胶树MSAP反应体系优化及其不同开割高度单株DNA甲基化分析 被引量：2

10

作者 吴春太 班硕 +1 位作者 黎瑜 曾日中 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期860-869,共10页

以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料,通过利用单因素和正交试验相结合的方法,对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化,建立橡胶树MSAP反应最佳体系,... 以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料,通过利用单因素和正交试验相结合的方法,对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化,建立橡胶树MSAP反应最佳体系,并用于高低割线橡胶树基因组DNA甲基化差异分析。结果表明:在50μL反应体系中,750 ng基因组DNA用EcoRⅠ20 U,HpaⅡ20 U或MspⅠ10 U于37℃恒温同步酶切10 h,酶切完全。最佳预扩增体系(20μL)为:连接产物4μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.15μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.1μL,上下游引物E-00/HM-00(10μmol·L^(-1))各0.3μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。最佳选择性扩增反应体系(20μL)为:稀释20倍的预扩增产物2μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.1μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.125μL,上下游引物E+3/HM+3(10μmol·L^(-1))各0.4μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。高低割线树DNA的甲基化比例分别为37.22%和36.43%,2种开割胶树基因组CCGG位点胞嘧啶全甲基化率明显高于半甲基化率,推测橡胶树基因组甲基化主要模式可能是Cp G型。综上表明,建立的MSAP反应体系稳定可靠且重复性好,为后续橡胶树不同胁迫(割胶)程度DNA甲基化的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 高低割线橡胶树 DNA甲基化 甲基化敏感扩增多态性(MSAP) 体系优化

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巴西橡胶树HbAGL62基因的克隆及表达分析 被引量：1

11

作者 蔡海滨 涂敏 +1 位作者 华玉伟 黄华孙 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第10期1766-1771,共6页

从巴西橡胶树早花材料与普通种质cDNA差减文库中筛选到一个具有MADS保守序列的EST基因片段,根据该片段序列信息设计特异引物,利用RACE进行特异片段的5′扩增,获得长度为935 bp的HbAGL62基因克隆。生物信息学分析表明,该基因包含795 bp... 从巴西橡胶树早花材料与普通种质cDNA差减文库中筛选到一个具有MADS保守序列的EST基因片段,根据该片段序列信息设计特异引物,利用RACE进行特异片段的5′扩增,获得长度为935 bp的HbAGL62基因克隆。生物信息学分析表明,该基因包含795 bp的开放阅读框,编码265个氨基酸,含有MADS保守结构域,与拟南芥、葡萄和苜蓿AGL62基因进化距离最近。实时荧光定量PCR表明,HbAGL62在橡胶树根和皮中不表达,在花和胚中表达,存在组织特异性表达;在叶芽分化阶段不表达,花芽分化时高效表达,表明HbAGL62与橡胶树开花调控有重要关系。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 HbAGL62 早花材料 MADS 基因克隆 表达分析

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