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壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果 被引量：6
1
作者 任燕 张小江 +3 位作者 陶家发 李宁求 石存斌 吴淑勤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期110-114,共5页
目的制备包裹哈维弧菌（Vibrio harveyi,Vh）重组外膜蛋白Omp K的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白Omp K,制备微囊疫苗,测定其粒径... 目的制备包裹哈维弧菌（Vibrio harveyi,Vh）重组外膜蛋白Omp K的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白Omp K,制备微囊疫苗,测定其粒径、包裹率及载抗原量;经口灌服免疫斜带石斑鱼,2周后进行加强免疫,设Omp K蛋白组和空白对照组,ELISA法检测免疫后斜带石斑鱼血清及后肠黏膜上清抗体水平;于免疫后30 d,经斜带石斑鱼腹腔注射1.0×10^7 CFU/ml的哈维弧菌,计算各组相对保护率（relative percent survival,RPS）。结果微囊为球形或类球形,粒径5.0~20.0μm,平均粒径10.6μm;微囊中蛋白平均包裹率为71.26%,平均载抗原量为1.67%。微囊疫苗组血清抗体效价峰值为29,明显高于Omp K蛋白组（P〈0.01）;微囊疫苗组后肠黏膜上清的吸光值（A450-A630）明显高于Omp K蛋白组和空白对照组（P〈0.01）。微囊疫苗组的RPS达62.5%,高于Omp K蛋白组（P〈0.01）。结论制备的壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗口服石斑鱼后,具有较好的免疫效果,作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。 展开更多
关键词 壳聚糖 海藻酸盐 外膜蛋白 微囊 疫苗 斜带石斑鱼 口服免疫
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草鱼源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析 被引量：20
2
作者 高彩霞 任燕 +7 位作者 王庆 曾伟伟 李莹莹 王英英 常藕琴 石存斌 张德锋 方珍珍 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2018年第3期409-415,共7页
从贵州兴义某水库网箱养殖的患病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝脏中分离出菌落大小、形态一致的细菌,编号为GZ09007。经革兰氏染色、生理生化反应等表型鉴定为气单胞菌(Aeromonas)。通过扩增16S rRNA和gyrB基因序列并构建系统发育树... 从贵州兴义某水库网箱养殖的患病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝脏中分离出菌落大小、形态一致的细菌,编号为GZ09007。经革兰氏染色、生理生化反应等表型鉴定为气单胞菌(Aeromonas)。通过扩增16S rRNA和gyrB基因序列并构建系统发育树,进一步鉴定该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。该菌株具有act、aer、lip、exu、fla、ser等毒力相关基因,不具有alt、ast、gca T和ahy B等毒力相关基因。人工感染试验表明该菌对草鱼、鲫、团头鲂和鳙均具有强致病性,半数致死量LD_(50)分别为7.45×10~5、1.27×10~5、1.76×10~5和5.36×10~4 CFU·(g·B·W)^(-1)。药物敏感性试验表明该菌对萘啶酸、恩诺沙星和左旋氧氟沙星等12种药物敏感,对新霉素、呋喃唑酮中度敏感,对氨苄西林耐受。研究结果表明维氏气单胞菌GZ09007是引起此次草鱼发病的致病菌。 展开更多
关键词 草鱼 维氏气单胞菌 鉴定 毒力基因 药物敏感性
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两株草鱼源维氏气单胞菌菌株的主要表型特征及致病力比较 被引量：14
3
作者 任燕 高彩霞 +6 位作者 曾伟伟 王庆 王英英 李莹莹 尹纪元 常藕琴 石存斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期145-150,共6页
维氏气单胞菌(A.veronii)是严重危害草鱼的一种病原。本研究从电镜观察、Biolog微生物自动分析仪鉴定、细菌游动能力、胞外产物活性、细胞黏附性、对草鱼致病力和毒力基因等方面,比较草鱼源A.veronii菌株GZ09007和FS12001的表型特征和... 维氏气单胞菌(A.veronii)是严重危害草鱼的一种病原。本研究从电镜观察、Biolog微生物自动分析仪鉴定、细菌游动能力、胞外产物活性、细胞黏附性、对草鱼致病力和毒力基因等方面,比较草鱼源A.veronii菌株GZ09007和FS12001的表型特征和致病性差异。结果显示,两株细菌菌体均呈短杆状或弧形、两端钝圆,在透射电镜下可见单鞭毛。Biolog微生物自动分析仪鉴定结果显示菌株均为A.veronii,两株细菌均具有游动能力,胞外产物具有溶血活性、溶蛋白活性和脂肪酶活性,但GZ09007的游动能力、溶血活性、蛋白酶活性均显著强于FS12001 (p<0.05)。GZ09007对EPC、CIK细胞黏附性弱,FS12001的细胞黏附性强,两株细菌的细胞黏附性差异显著(p<0.05)。菌株GZ09007具有aerA、act、lip、ser、exu、fla毒力基因,但未检测到ast、alt、gcaT、ahyB等毒力基因;菌株FS12001具有aerA、act、alt、ast、lip、ser、ahyB、exu毒力基因,但未检测到gcaT、fla毒力基因。两株细菌均可以造成草鱼发病死亡,GZ09007对草鱼的LD_(50)为5.6×10~6cfu,而FS12001的LD_(50)则高于1.5×10~8cfu。表明GZ09007为强毒株,FS12001为弱毒株。推测A.veronii胞外产物的溶血活性和溶蛋白活性在其感染和致死草鱼过程中起到了关键作用。本研究结果为进一步探究A.veronii菌株的致病机理提供依据。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 毒力 表型 致病性
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一种佐剂新材料在嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫中的应用效果 被引量：4
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作者 任燕 时云朵 +1 位作者 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期112-119,共8页
为研究蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷(CPMG)在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的佐剂作用,将CPMG和嗜水气单胞菌灭活疫苗联合施用,二次浸泡免疫异育银鲫后饲养在室内玻璃缸中,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测加强免疫后2、4、7、11、14和21 d脾脏中... 为研究蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷(CPMG)在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的佐剂作用,将CPMG和嗜水气单胞菌灭活疫苗联合施用,二次浸泡免疫异育银鲫后饲养在室内玻璃缸中,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测加强免疫后2、4、7、11、14和21 d脾脏中Ig M、IL-1β、C3、C-凝集素和溶菌酶的m RNA表达量,首次免疫30 d后用同源菌株活菌攻击实验鱼;同时,用含CPMG、山莨菪碱复合佐剂的灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫一次后饲养在池塘网箱中,定期抽取血液检测血清抗体效价并用同源菌株人工感染实验鱼。结果显示,CPMG佐剂组和无佐剂组的5个免疫相关基因的相对表达量显著高于对照组,CPMG组Ig M基因较无佐剂组更早表达,补体C3、C-凝集素以及溶菌酶的基因表达量更高或表达持续时间更长。血清抗体效价在免疫后2周达到160,6周达到峰值640,12周降低为40。室内玻璃缸中二次免疫30 d后,CPMG组的平均相对保护率达到70.6%,复合佐剂组达到88.2%,均显著高于无佐剂组的56.0%。池塘网箱中一次浸泡免疫30、60和120 d后,平均相对保护率分别为54.6%、44.0%和12.5%。研究表明,CPMG与嗜水气单胞菌灭活疫苗共同浸泡免疫异育银鲫,增强了脾脏中Ig M、IL-1β、C3、C-凝集素以及溶菌酶基因表达,提高了异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的能力。 展开更多
关键词 异育银鲫 蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷 山莨菪碱 灭活疫苗 浸泡免疫
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黄金鲫源霍乱弧菌的分离鉴定及毒力检测 被引量：4
5
作者 任燕 王庆 +4 位作者 王英英 李莹莹 曾伟伟 高彩霞 石存斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期891-896,共6页
为研究引起江苏连云港某水产养殖场黄金鲫死亡的病原,本研究对黄金鲫内脏进行细菌分离、鉴定,并将获得的优势菌株进行动物回归实验、毒力因子检测和药物敏感试验。细菌的表型特征、16SrRNA和gyrB基因进化分析及血清型鉴定结果显示该菌... 为研究引起江苏连云港某水产养殖场黄金鲫死亡的病原,本研究对黄金鲫内脏进行细菌分离、鉴定,并将获得的优势菌株进行动物回归实验、毒力因子检测和药物敏感试验。细菌的表型特征、16SrRNA和gyrB基因进化分析及血清型鉴定结果显示该菌株为非O1/非O139群霍乱弧菌(Vibrio cholerae),编号为YQ1。该菌株具有lolB、ompU、hlyAClass、hlyAET、toxR等毒力基因,但不具有ctxA、ctxB、tcpAClass、tcpAET、tcpI、zot、stn/sto等毒力基因。动物回归实验显示该菌为致病菌,能够导致健康黄金鲫鱼死亡,其半数致死量LD50为3.0×10~5cfu。该菌株对萘啶酸、恩诺沙星等12种抗生素敏感,对新霉素中度敏感,对磺胺间甲氧嘧啶、氨苄西林耐药。研究结果确定非O1/非O139群V.choleraeYQ1为引起黄金鲫大量死亡的致病菌。本研究为该病的诊断和防治提供实验依据。 展开更多
关键词 黄金鲫 非O1/非O139群霍乱弧菌 鉴定 毒力基因 药物敏感性
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鱼源嗜水气单胞菌疫苗生产菌株与分离株的抗原性分析 被引量：2
6
作者 任燕 张德峰 +5 位作者 孙承文 陶家发 李宁求 刘礼辉 石存斌 吴淑勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期207-210,共4页
为分析商品化嗜水气单胞菌（Ah）败血症灭活疫苗生产菌株J-1与近年来分离的YYK090901菌株的抗原性是否存在差异,本研究应用western blot检测了抗J-1血清和抗YYK090901血清识别28株嗜水气单胞菌全菌蛋白情况,并通过细菌凝集试验测定了这... 为分析商品化嗜水气单胞菌（Ah）败血症灭活疫苗生产菌株J-1与近年来分离的YYK090901菌株的抗原性是否存在差异,本研究应用western blot检测了抗J-1血清和抗YYK090901血清识别28株嗜水气单胞菌全菌蛋白情况,并通过细菌凝集试验测定了这2种抗血清与28株菌株的凝集效价。结果表明2种抗血清均能够识别25株菌株的大多数全菌蛋白,但识别GYK1、G060718-2L、Ah120606L 3株菌株的蛋白条带较少,2种抗血清识别同一株菌的全菌蛋白条带不完全一致。抗YYK090901血清对YYK090901、Ah120606L、JX120701具有较高的凝集价（211）,对J-1、GYK1等16株菌的凝集价为26~210,其中对J-1、GYK1的凝集价分别为27、210;对N-1-2、TTF20130613L等9株菌的凝集价较低,为24~25。抗J-1血清对1990s年和2012年~2013年分离的大部分菌株均具有较高的凝集价（211~212）,仅对GYK1、TTF20130613L等6菌株凝集价较低,为24~25。本研究结果表明,J-1与YYK090901的抗原性存在一定的差异。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 商品化疫苗 抗原性 凝集效价
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