一种新型广谱流感病毒亚单位疫苗的表达与纯化 被引量：2

1

作者 魏义举 龙海亭 +4 位作者 杨旭 李建芳 毕研伟 李健峰 徐维明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期90-95,共6页

通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达... 通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区M2蛋白和HA多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的45%左右。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白。Westernblot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒 亚单位疫苗 多表位 表达纯化 抗原性

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应用线粒体DNA D-loop区遗传多样性分析云南4个少数民族的遗传关系 被引量：15

2

作者 钱亚屏 褚嘉佑 +3 位作者 初正韬 卫灿东 戴青 S Horai 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期291-300,共10页

对傣、佤、拉祜和藏族４个群体的９９名个体ｍｔＤＮＡ非编码区（Ｄ－ｌｏｏｐ）高变区I１６０４８～１６５６９及１～４１的５６３ｂｐ片段进行序列分析。计算了核酸多态度，并用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ 法构建系统进化树，... 对傣、佤、拉祜和藏族４个群体的９９名个体ｍｔＤＮＡ非编码区（Ｄ－ｌｏｏｐ）高变区I１６０４８～１６５６９及１～４１的５６３ｂｐ片段进行序列分析。计算了核酸多态度，并用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ 法构建系统进化树，在进化树中，９９个ｍｔＤＮＡ序列分别聚在４个群中。所有在ＣＯ Ⅱ ／ｔＲＡＮ Ｌｙｓ 基因间序列存在９ｂｐ缺失的个体均聚在Ｃ１群中，Ｃ２群由１个佤族个体和４个藏族个体组成，Ｃ３群中除２个藏族个体外均为其他３个民族个体，４个群体的大部分个体聚在Ｃ４群。根据核酸多态度计算的净遗传距离重建的进化树显示，傣族、佤族和拉祜族的亲缘关系较接近，与藏族距离较远。结果表明遗传距离与他们的地理分布是非常一致的。而拉祜族与相传同为氐羌后裔并有相近语言的藏族跗距离却较远，这一结果提示这两个民族可能具有不同的起源。 展开更多

关键词 MTDNA D-LOOP 多态性 云南少数民族 遗传关系 遗传多样性 线粒体

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巴斯德毕赤酵母研究进展 被引量：5

3

作者 丁云菲 刘勇 戴长柏 《生命科学》 CSCD 2003年第1期26-30,共5页

巴斯德毕赤酵母以其独特的生物学和遗传学特征成为当今一种诱人的外源基因表达系统,已成功地表达了各种类型的外源蛋白。本文综述了巴斯德毕赤酵母的一些特征及其作为外源基因表达系统,实现高表达的策略。

关键词 巴斯德毕赤酵母 特征 基因表达系统 高表达策略

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昆虫表达系统及其在基因工程抗体中的应用 被引量：3

4

作者 尹长城 刘晶 黄华梁 《生物工程进展》 CSCD 2001年第3期66-70,共5页

昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统 ,该系统具有与其他高等真核表达系统相似的翻译后修饰、加工及转移外源蛋白的能力。本文介绍了昆虫表达系统的构建过程 ,并以基因工程抗体为主讨论了外源蛋白在昆虫表达体系中的表达特征。

关键词 抗体工程 昆虫 表达系统 杆状病毒载体

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噬菌体抗体库技术:靠近理想的现实 被引量：9

5

作者 刘晶 黄华梁 姜述德 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期94-99,共6页

噬菌体抗体库技术是近年来在基因工程抗体研究领域中发展起来的一项新技术 ,该技术把特异性结合和高效筛选有机结合 ,大大缩减了获得目的性抗体的工作量。本文综述了噬菌体抗体库的构建 ,种类 ,筛选方法及最新进展。

关键词 噬菌体抗体库技术 构建 种类 筛选方法

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huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究 被引量：5

6

作者 孙强明 刘红岩 +3 位作者 戴长柏 马雁冰 孙茂盛 徐维明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期291-294,共4页

利用QSepharoseH .P .离子交换柱层析在 8mol L尿素变性条件下对huGM CSF(9 12 7) IL 6 (2 9 184)融合蛋白进行初步纯化 ,然后再利用SephacrylS 2 0 0分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白 ,其纯度达到 95 %以上。该纯化方案成功地解... 利用QSepharoseH .P .离子交换柱层析在 8mol L尿素变性条件下对huGM CSF(9 12 7) IL 6 (2 9 184)融合蛋白进行初步纯化 ,然后再利用SephacrylS 2 0 0分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白 ,其纯度达到 95 %以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行QSepharoseH .P .离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题 ,获得了较好的复性效果 ,复性率达到 80 %以上。使用该纯化方案 ,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程 。 展开更多

关键词 融合蛋白 复性 纯化 huGM-CSF/IL-6 造血细胞因子

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Wnt信号途径生物学活性研究概述 被引量：5

7

作者 马波 易红昆 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 2001年第1期10-13,共4页

Wnt信号途径是细胞发育和调节生长的一个关键途径 ,通过与果蝇Wingless同源的Wnt基因编码Wnt蛋白 ,与膜上相应受体接合引起一系列相关蛋白反应 ,最终会激活MYC基因。在正常情况下对胚胎的发育和成人的部分组织形成和功能发挥起着重要作... Wnt信号途径是细胞发育和调节生长的一个关键途径 ,通过与果蝇Wingless同源的Wnt基因编码Wnt蛋白 ,与膜上相应受体接合引起一系列相关蛋白反应 ,最终会激活MYC基因。在正常情况下对胚胎的发育和成人的部分组织形成和功能发挥起着重要作用。当该途径异常时 ,会导致癌症的发生。 展开更多

关键词 WNT 信号传导 生物学活性 细胞发育 WNT信号途径 癌症

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中国云南省五个民族DYS287位点多态性的调查 被引量：11

8

作者 钱亚屏 初正韬 +4 位作者 卫灿东 许绍斌 林克勤 陶玉芬 褚嘉佑 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期381-382,共2页

目的　对中国云南的汉族、傣族、拉祜族、佤族、藏族5 个群体的DYS287 位点多态性进行筛查。方法　利用PCR法对此位点进行扩增,经过琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果　汉、傣、拉祜、佤族均为YAP- ,扩增片段均为 150bp,而 30 个藏族人中有... 目的　对中国云南的汉族、傣族、拉祜族、佤族、藏族5 个群体的DYS287 位点多态性进行筛查。方法　利用PCR法对此位点进行扩增,经过琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果　汉、傣、拉祜、佤族均为YAP- ,扩增片段均为 150bp,而 30 个藏族人中有11 个为 YAP+ ,扩增片段为 455bp,YAP+ 频率达36.7% 。结论　DYS287 位点可以作为一种重要、稳定的遗传标记对遗传多样性研究提供可靠的证据。 展开更多

关键词 Y染色体 DYS287 多态性 云南 汉族 傣族 拉祜族

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分泌型乙型肝炎病毒包膜M蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：2

9

作者 丁云菲 刘勇 +4 位作者 刘红岩 马雁冰 孙强明 孙茂盛 戴长柏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期265-271,共7页

将乙肝病毒包膜中蛋白M基因插入酵母整合型表达质粒pAO818的醇氧化酶 (AOX1)启动子下游 ,构建携带 8拷贝M表达盒的重组载体 ,经电穿孔转化SMD116 8菌株和G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株 ,表达量超过 5 0mg L .经初... 将乙肝病毒包膜中蛋白M基因插入酵母整合型表达质粒pAO818的醇氧化酶 (AOX1)启动子下游 ,构建携带 8拷贝M表达盒的重组载体 ,经电穿孔转化SMD116 8菌株和G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株 ,表达量超过 5 0mg L .经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,重组蛋白具有preS2和S抗原性 ,可以形成颗粒 ,并具有一定程度的糖基化 .所构建的稳定重组菌株和所得到的重组蛋白颗粒 ,为进一步研究新一代的疫苗提供了必要的材料 . 展开更多

关键词 分泌型乙型肝炎病毒 包膜M蛋白 毕赤酵母中 表达 高拷贝重组质粒 包膜中蛋白 分泌表达 基因工程疫苗

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云南人群系统性红斑狼疮与TNF微卫星基因座关系的研究 被引量：3

10

作者 初正韬 孙浩 +3 位作者 钱亚屏 史磊 俞建昆 褚嘉祐 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期11-13,共3页

位于MHC内的肿瘤坏死因子 (tomornecrosisfactor,TNF)基因区域有 5个微卫星基因座a、b、c、d和e,本研究调查了中国云南汉族系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)与这几个微卫星基因座多态性的关系。本文用荧光标记引物和半... 位于MHC内的肿瘤坏死因子 (tomornecrosisfactor,TNF)基因区域有 5个微卫星基因座a、b、c、d和e,本研究调查了中国云南汉族系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)与这几个微卫星基因座多态性的关系。本文用荧光标记引物和半自动基因扫描方法对云南地区 97例SLE患者及 79例健康对照者的这 5个微卫星基因座进行了基因分型 ,结果发现 ,SLE患者的TNFa1(P =0 0 2 0 6 ) ,c2 (P =0 0 0 0 0 )等位基因频率较正常人显著增高 ,而TNFa2 (P =0 0 16 3) ,c3(P =0 0 0 6 5 ) ,c4(P =0 0 0 12 ) ,d6 (P =0 0 44 8)等位基因频率则是正常对照较SLE患者高。同时我们还发现在这 5个微卫星基因座中 ,与白种人比较中国人出现了尚未发现的新等位基因。 展开更多

关键词 SLE TNF 微卫星基因座 基因扫描 云南 系统性红斑狼疮

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bcl-2bcl-x和bax基因多态性与系统性红斑狼疮易感相关性 被引量：4

11

作者 苏湛 褚嘉祐 +5 位作者 许绍彬 史磊 黄小琴 俞建昆 冒长峙 李晓岚 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期265-268,共4页

目的探讨bcl-2、bcl-x和bax基因中7个多态位点同系统性红斑狼疮()是否存在SLE相关性。方法采用引物引入限制性内切酶分析(PIRA-PCR)、四引物扩增阻滞突变系统以及单链构象多态性(SSCP)技术,分析100名正常人和88例SLE患者bcl-2基因的3个... 目的探讨bcl-2、bcl-x和bax基因中7个多态位点同系统性红斑狼疮()是否存在SLE相关性。方法采用引物引入限制性内切酶分析(PIRA-PCR)、四引物扩增阻滞突变系统以及单链构象多态性(SSCP)技术,分析100名正常人和88例SLE患者bcl-2基因的3个单核苷酸多态性(SNP)位点(dbSNP:rs1800477,rs1801018,rs1564483)、bcl-x基因的3个SNP位点(dbSNP:rs6060900,rs6089046,rs5841091)及bax基因的1个微卫星位点。以Logistic回归分析统计实验数据。结果SLE患者组bcl-2基因rs1800477位点的GG基因型频率高于正常人群(P=0.013),rs1564483位点GG基因型频率则低于正常人群(P=0.024);rs1801018位点则无统计学意义。bcl-x和bax的所选位点均没有表现出多态性。结论bcl-2基因rs1800477和rs1564483两位点多态性可能与SLE相关。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 相关性 基因多态性 单核苷酸多态性(SNP) bcl-2基因 Logistic回归 限制性内切酶分析 扩增阻滞突变系统 单链构象多态性 BCL-X基因 bax基因 SLE患者 基因型频率 易感 正常人群 BCL-X SNP位点 微卫星位点

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基因芯片技术及应用 被引量：6

12

作者 孙强明 栗秀芳 +1 位作者 戴长柏 徐维明 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2002年第1期7-8,共2页

基因芯片是通过把巨大数量的核酸固定在一块面积很小的基板上而构成 ,利用核酸分子的杂交特性 ,通过芯片的制备 ,待测样品的准备 ,样品与芯片杂交以及杂交图谱的检测和读出四个基本步骤便可获得待测样品的巨大数量的生物信息。目前基因... 基因芯片是通过把巨大数量的核酸固定在一块面积很小的基板上而构成 ,利用核酸分子的杂交特性 ,通过芯片的制备 ,待测样品的准备 ,样品与芯片杂交以及杂交图谱的检测和读出四个基本步骤便可获得待测样品的巨大数量的生物信息。目前基因芯片已应用于生命科学和医学等领域。本文就基因芯片技术近期的研究进展作一综合介绍。 展开更多

关键词 基因芯片 测序 表达 癌症 诊断

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现代人类的起源和迁移:来自母性遗传的证据 被引量：4

13

作者 钱亚屏 初正韬 褚嘉祐 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期255-258,共4页

mtDNA具有极少发生重组、进化速度快等特点 ,能忠实反映群体的母性遗传 ,作为人类进化研究的一类重要工具 ,近年来取得了突出的成就 ,为现代人类的起源、迁移和进化提供了大量的证据。本文拟对这一领域的研究进展作一综述。

关键词 MTDNA 现代人类 起源 进化

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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 被引量：4

14

作者 孙强明 戴长柏 +4 位作者 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期253-257,共5页

目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0... 目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果　pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论　获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7) 展开更多

关键词 GM-CSF 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素-6 生物活性蛋白

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膀胱移行细胞癌p16缺失及其蛋白表达意义 被引量：3

15

作者 郭萍 许绍斌 +3 位作者 李泽惠 杨西敏 章宗籍 褚嘉佑 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2001年第1期7-10,共4页

目的　了解膀胱移行细胞癌中抑癌基因 p1 6缺失及其蛋白表达情况。方法　应用双重PCR和免疫组化 S- P法对 31例膀胱移行细胞癌组织分别进行缺失和突变检测。结果　发现有 7例存在 p1 6基因的缺失 ,缺失率为 2 2 .6%。其中有 1例外显子 ... 目的　了解膀胱移行细胞癌中抑癌基因 p1 6缺失及其蛋白表达情况。方法　应用双重PCR和免疫组化 S- P法对 31例膀胱移行细胞癌组织分别进行缺失和突变检测。结果　发现有 7例存在 p1 6基因的缺失 ,缺失率为 2 2 .6%。其中有 1例外显子 1缺失 ,有 5例外显子 2缺失 ,1、2外显子共缺失的有 1例。p1 6蛋白阴性率为 38.7%。结论　抑癌基因 p1 6的变异及其蛋白的不表达与膀胱移行细胞癌的发生有一定关系。 展开更多

关键词 膀胱移行细胞癌 双重PCR p16缺失 免疫组织化学

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Bax/Bcl-2mRNA在恒河猴药物流产胎盘中的表达

16

作者 高红军 代解杰 +2 位作者 王红星 唐东红 林海燕 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第2期21-24,共4页

目的:通过检测重要的细胞凋亡调节因子Bax和Bcl-2的表达,探讨恒河猴胎盘细胞凋亡与药物流产的关系。方法:利用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴对照组和药物流产组(RU-486与AG诱导)胎盘中Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果:Bax mRNA在流产... 目的:通过检测重要的细胞凋亡调节因子Bax和Bcl-2的表达,探讨恒河猴胎盘细胞凋亡与药物流产的关系。方法:利用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴对照组和药物流产组(RU-486与AG诱导)胎盘中Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果:Bax mRNA在流产胎盘中的表达量明显高于对照组胎盘。在胎盘绒毛滋养层细胞可见明显表达,基底层蜕膜细胞也有表达。Bcl-2 mRNA在流产胎盘中的表达量明显低于对照组胎盘,表达部位与Bax类似。结论:RU-486和AG可能通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA的表达,导致胎盘组织凋亡细胞的数量明显增加,从而影响胎盘的正常结构和功能,增加了流产的危险性。 展开更多

关键词 恒河猴 妊娠 流产 BAX BEL-2

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bcl-2家族与系统性红斑狼疮

17

作者 苏湛 褚嘉祐 《国外医学（遗传学分册）》 2004年第4期248-251,共4页

凋亡缺陷(defective apoptosis)在系统性红斑狼疮(systematic erythematosus lupus,SLE)的发病机制中扮演重要角色。bcl-2家族是调控线粒体介导凋亡的主要因子,有研究表明bcl-2家族的某些成员异常与SLE之间存在一定联系。然而关于其具... 凋亡缺陷(defective apoptosis)在系统性红斑狼疮(systematic erythematosus lupus,SLE)的发病机制中扮演重要角色。bcl-2家族是调控线粒体介导凋亡的主要因子,有研究表明bcl-2家族的某些成员异常与SLE之间存在一定联系。然而关于其具体特征和机制的实验结果并不一致。本文将就此领域的研究进行综述。 展开更多

关键词 bel-2家族 系统性红斑狼疮 系统性红斑狼疮 凋亡

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Ⅰ型单纯疱疹病毒ICPO蛋白:病毒与细胞间相互作用的重要调控因子 被引量：1

18

作者 李卫中 李琦涵 《微生物与感染》 2008年第1期43-46,56,共5页

关键词 单纯疱疹病毒 细胞间 调控因子 相互作用 Ⅰ型 早期基因 蛋白 基因表达

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HIV介导的细胞凋亡 被引量：1

19

作者 孙强明 徐维明 戴长柏 《生命的化学》 CAS CSCD 2002年第1期10-12,共3页

关键词 HIV感染 病毒蛋白 细胞因子 细胞凋亡 介导

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TPA对Bcl-X前体mRNA在U251细胞中选择性剪接调控的初步研究

20

作者 李长友 褚嘉祐 +6 位作者 刘晓娟 俞建昆 黄小琴 史荔 朱泳璋 纳剑波 谢久永 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1037-1045,共9页

以含有部分Bcl X序列的微小基因为研究模型 ,研究了TPA对Bcl X前体mRNA选择性剪接在体内和体外的调控作用。通过RT PCR和定点突变实验检测 ,结果表明PKC信号系统能调控Bcl X前体mRNA选择性剪接 ,其机制可能是通过应答序列来调控Bcl X前... 以含有部分Bcl X序列的微小基因为研究模型 ,研究了TPA对Bcl X前体mRNA选择性剪接在体内和体外的调控作用。通过RT PCR和定点突变实验检测 ,结果表明PKC信号系统能调控Bcl X前体mRNA选择性剪接 ,其机制可能是通过应答序列来调控Bcl X前体mRNA 展开更多

关键词 Bcl-XL/Bcl-Xa 选择性剪接 灯盏花乙素

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