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实时荧光定量PCR与酶联定量PCR技术在HBV-DNA载量检测中的比较研究 被引量：19
1
作者 马力 赵桂珍 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期341-343,共3页
目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性。为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据。方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检... 目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性。为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据。方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检测228例(4组)HBV感染者血清。结果:RQ-PCR和ELQ-PCR方法检测HBV-DNA,其阳性检出率分别为HBsAg,HBeAg,HBcAb-IgG(+)组100%和82.61%;HBsAg,HBeAb,HBcAb-IgG(+)组90.63%和73.21%;HBsAg,HBcIgG,HBcAb-IgM(+)组80.00%和57.58%;HBsAg,HB-cAb-IgG(+)组70.15%和51.43%。HBV-DNA载量的阳性检出率,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。结论:RQ-PCR方法检测HBV-DNA载量在实时监测,节时快速,高灵敏,高精确度等方面都更优于ELQ-PCR。 展开更多
关键词 实时定量PCR 酶联定量PCR 乙型肝炎病毒核酸
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关于HCMV潜伏感染与激活感染研究的新进展 被引量：5
2
作者 单幼兰 张笋华 +2 位作者 陈伟华 江培学 陈家梁 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第17期3382-3385,共4页
人巨细胞病毒(HCMV)是疱疹病毒科中最大的病毒,结构复杂,其感染在人群中非常普遍,近年来免疫妥协(immunocompromised)群体尤其是移植群体中的HCMV潜伏感染和激活感染越来越受到临床重视。本文就HCMV的感染与免疫、HCMV的致病机制、宿主... 人巨细胞病毒(HCMV)是疱疹病毒科中最大的病毒,结构复杂,其感染在人群中非常普遍,近年来免疫妥协(immunocompromised)群体尤其是移植群体中的HCMV潜伏感染和激活感染越来越受到临床重视。本文就HCMV的感染与免疫、HCMV的致病机制、宿主的抗感染与免疫、HCMV的免疫逃逸、HCMV的潜伏与激活及HCMV相关研究的困境与展望近年来此方面研究新进展作一简要综述。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 潜伏感染 激活感染 免疫逃逸
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肿瘤坏死因子α对暴发性肝衰竭小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响 被引量：10
3
作者 崔巍 王颖 +2 位作者 马力 闻颖 刘沛 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期478-481,共4页
目的研究 TNFα对暴发性肝衰竭(FHF)小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白 occludin 表达的影响。方法采用 D-氨基半乳糖(GalN)和内毒素(LPS)联合腹腔注射(ip)制备 FHF 小鼠动物模型,并设立 TNFα组(TNFα 10μg/kg,ip),TNFα抗体组(注射 LPS ... 目的研究 TNFα对暴发性肝衰竭(FHF)小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白 occludin 表达的影响。方法采用 D-氨基半乳糖(GalN)和内毒素(LPS)联合腹腔注射(ip)制备 FHF 小鼠动物模型,并设立 TNFα组(TNFα 10μg/kg,ip),TNFα抗体组(注射 LPS 和 GalN 前30min 尾静脉注射TNFα抗体100μg/只)。在不同的时间点(6h,9h)处死动物,应用免疫组织化学技术、Western blot及实时定量 PCR 检测各组小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白 occludin 表达的变化。结果在生理盐水(NS)对照组,几乎整张切片上均可见到沿大肠黏膜上皮细胞膜顶端呈线性分布的 occludin 阳性染色,但 FHF 组及 TNFα组小鼠的阳性染色较之明显减弱,TNFα抗体组 occludin 的阳性反应与 NS 对照组比较无明显减弱。Western blot 结果与免疫组织化学结果相一致,FHF 组及 TNFα组小鼠9h 时occludin 蛋白含量明显下降,与 NS 对照组相比差异有统计学意义(0.36±0.05,0.48±0.02比0.71±0.09,P<0.05),TNFα抗体组与 NS 对照组相比差异无统计学意义(0.74±0.03比0.71±0.09,P>0.05)。实时定量 PCR 结果显示,FHF 组与 TNFα组小鼠6h 时 occludin mRNA 水平最低,与 NS 对照组相比差异有统计学意义(0.72±0.04,0.81±0.03比1.00±0.05,P<0.05),TNFα抗体组与 NS对照组相比差异无统计学意义(1.01±0.10比1.00±0.05,P>0.05)。结论在小鼠暴发性肝衰竭过程中,TNFα介导大肠上皮细胞间紧密连接蛋白 occludin 表达的下降。 展开更多
关键词 肝功能衰竭 肿瘤坏死因子 紧密连接部
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HBV前S2蛋白的研究进展 被引量：5
4
作者 赖梅梅 郑建 《实用肝脏病杂志》 CAS 2008年第2期127-129,共3页
随着现代分子生物学和病毒基因工程技术的广泛应用,有关乙型肝炎病毒颗粒表面的preS2蛋白的研究己取得了较大进展。本文综述了近年来有关研究的成果,重点对preS2的基因结构、生物学功能及临床诊断意义等方面的进展进行讨论。
关键词 乙型肝炎病毒 前S2 诊断意义
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人工栽培灵芝中多糖的部分理化性质及免疫调节作用 被引量：19
5
作者 熊川 罗强 +4 位作者 金鑫 陈诚 李强 陈祖琴 黄文丽 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期825-835,共11页
【背景】灵芝是一种广受关注的药食两用真菌,在中国作为传统药材和健康食品已有几千年历史,近年来中国人工栽培灵芝规模扩展迅速,而多糖被认为是灵芝中最主要的活性成分。【目的】分离和纯化人工栽培灵芝子实体多糖,并对其结构和免疫调... 【背景】灵芝是一种广受关注的药食两用真菌,在中国作为传统药材和健康食品已有几千年历史,近年来中国人工栽培灵芝规模扩展迅速,而多糖被认为是灵芝中最主要的活性成分。【目的】分离和纯化人工栽培灵芝子实体多糖,并对其结构和免疫调节活性进行研究。【方法】采用水提醇沉法提取灵芝子实体多糖(GLP),采用DE-52纤维素柱和Sephadex G-100进行多糖的分离纯化,高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮(PMP)柱前衍生法测定单糖组成,红外光谱进行结构分析,噻唑蓝(MTT)比色法测定多糖对小鼠脾细胞增殖的影响,同时评价其对RAW 264.7细胞吞噬能力和细胞因子分泌能力的促进作用。【结果】GLP平均分子量为1.93×10~4 Da,单糖组成包含葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)及甘露糖(Man),占比为Glc:Gal:Man=3.3:1.3:1.0。红外光谱显示,GLP的异头碳为β构型。GLP能直接促进脾细胞的增殖,且能显著增强刀豆蛋白A(Con A)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖。此外,对于RAW 264.7细胞的吞噬能力及细胞因子分泌具有一定的促进作用。【结论】灵芝多糖可作为一个潜在的免疫调节药物而开发利用。 展开更多
关键词 灵芝 多糖提取 分离纯化 免疫调节
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六妹羊肚菌多糖部分理化性质及抗氧化活性研究 被引量：18
6
作者 熊川 罗强 +3 位作者 李强 陈诚 陈祖琴 黄文丽 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1182-1187,1153,共7页
分离纯化人工栽培的六妹羊肚菌子实体多糖,对其结构和抗氧化活性进行研究。采用水提醇沉法提取六妹羊肚菌子实体多糖(MSP),采用DE-52纤维素柱和Sephadex G-100进行多糖的分离纯化,借助HPGPC和HPLC测定多糖分子量及单糖组成。通过DPPH自... 分离纯化人工栽培的六妹羊肚菌子实体多糖,对其结构和抗氧化活性进行研究。采用水提醇沉法提取六妹羊肚菌子实体多糖(MSP),采用DE-52纤维素柱和Sephadex G-100进行多糖的分离纯化,借助HPGPC和HPLC测定多糖分子量及单糖组成。通过DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用,评估其体外抗氧化活性。构建H_2O_2介导的氧化压力损伤的PC12细胞模型,评估其基于抗氧化的神经保护作用。结果显示,六妹羊肚菌水溶性多糖平均分子量为287 588 Da,单糖组成为甘露糖,葡萄糖和半乳糖,占比约为9∶1∶6。六妹羊肚菌多糖具有优良的自由基清除活性,同时,能够通过重塑SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶系活性,缓解H_2O_2诱发的氧化压力的细胞损伤,抑制PC12细胞凋亡。涉及通路为Bax/Bcl及Caspase。六妹羊肚菌水溶性多糖具有优良的抗氧化活性,表现出一定的神经保护作用。 展开更多
关键词 六妹羊肚菌 多糖提取 PC12细胞 抗氧化 神经保护
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一种羊肚菌源多肽MIP-16的分离纯化及其神经保护活性 被引量：8
7
作者 熊川 黄文丽 +5 位作者 金鑫 罗强 李萍 张璐 李强 朱宇 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2021年第9期1519-1526,共8页
分离纯化人工栽培的梯棱羊肚菌子实体多肽(MIP-16),对其结构和神经保护活性进行研究。采用磷酸盐缓冲液提取,分子排阻色谱分离,反相高效液相色谱纯化获得梯棱羊肚菌子实体多肽,通过液相色谱-质谱连用技术完成氨基酸序列鉴定。构建6-羟... 分离纯化人工栽培的梯棱羊肚菌子实体多肽(MIP-16),对其结构和神经保护活性进行研究。采用磷酸盐缓冲液提取,分子排阻色谱分离,反相高效液相色谱纯化获得梯棱羊肚菌子实体多肽,通过液相色谱-质谱连用技术完成氨基酸序列鉴定。构建6-羟基多巴胺处理后引起凋亡的PC12细胞模型,验证MIP-16对PC12细胞的保护作用。结果显示:MIP-16由16个氨基酸组成,相对分子质量为1762 Da,氨基酸组成序列为Thr-Ile-Thr-Leu-Glu-Val-Glu-Ser-Ser-Asn-Ile-Thr-Asn-Asp-Val-Lys。细胞实验发现,MIP-16能够抑制PC12细胞丙二醛(MDA)产生,降低活性氧(ROS)水平,调节Bcl-2和Bax的比例,并降低Caspase蛋白的表达。MIP-16通过细胞线粒体途径抑制PC12细胞凋亡,具有神经保护活性,可作为一种辅助治疗帕金森综合症的药物开发。 展开更多
关键词 梯棱羊肚菌 多肽 凋亡 神经保护活性
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藜麦皂苷的提取及其酪氨酸酶抑制活性 被引量：6
8
作者 李萍 罗强 +5 位作者 金鑫 李强 蒋云 黎青 李健伟 熊川 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第5期196-202,129,共8页
探究藜麦"陇藜1号"籽粒中皂苷的最佳提取条件并验证其酪氨酸酶抑制活性。设计三因素三水平正交实验,探索料液比,乙醇浓度及超声时间对藜麦皂苷提取得率的影响。构建L-多巴诱导的B16细胞模型,测定藜麦皂苷对细胞活性及酪氨酸... 探究藜麦"陇藜1号"籽粒中皂苷的最佳提取条件并验证其酪氨酸酶抑制活性。设计三因素三水平正交实验,探索料液比,乙醇浓度及超声时间对藜麦皂苷提取得率的影响。构建L-多巴诱导的B16细胞模型,测定藜麦皂苷对细胞活性及酪氨酸酶活性的影响,最终通过免疫印迹法(Westernblot)探索藜麦皂苷影响酪氨酸酶活性的作用通路。结果显示:藜麦皂苷最佳提取条件为料液比1:40,70%浓度的乙醇下超声60 min,得率为17.85 mg/g。当藜麦皂苷的浓度低于200μg/m L时,其对B16细胞无显著抑制作用,但能显著抑制酪氨酸酶的活性和黑色素的形成,200μg/m L藜麦皂苷处理B16细胞72 h,黑色素相对含量降至73.85%,酪氨酸酶活性降至53.31%。藜麦皂苷通过抑制小眼畸型相关转录因子(MITF)及酪氨酸酶(TYR)蛋白表达来抑制黑色素形成。藜麦皂苷可以作为一种具有美白活性的组分在化妆品或药品中应用。 展开更多
关键词 藜麦籽粒 皂苷 酪氨酸酶
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菜籽饼粕中多肽的提取纯化及抗肿瘤活性 被引量：2
9
作者 熊川 罗强 +4 位作者 黄文丽 李萍 张娟 金鑫 朱宇 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期81-88,共8页
从菜籽饼粕中分离纯化多肽,并验证其抗肿瘤活性。采用超声-微波协同萃取法获得菜籽饼粕总蛋白,通过碱性蛋白酶水解提取菜籽饼粕总多肽,连用分子排阻色谱和反相高效液相色谱纯化获得菜籽饼粕多肽(RMP)。通过对Hela细胞生长的抑制作用评价... 从菜籽饼粕中分离纯化多肽,并验证其抗肿瘤活性。采用超声-微波协同萃取法获得菜籽饼粕总蛋白,通过碱性蛋白酶水解提取菜籽饼粕总多肽,连用分子排阻色谱和反相高效液相色谱纯化获得菜籽饼粕多肽(RMP)。通过对Hela细胞生长的抑制作用评价RMP的抗肿瘤活性。结果显示:RMP由8个氨基酸组成,序列为Asp-Val-Phe-Val-Pro-Pro-Val-Leu,相对分子质量为886 u。RMP的处理会改变Hela细胞细胞核形态,诱导细胞凋亡。作用机制涉及降低Hela细胞线粒体膜电位,促进细胞色素C从线粒体中释放,进而增强Caspase蛋白的活性,从而实现线粒体途径的细胞凋亡。因此,RMP可作为一个潜在的抗肿瘤活性物质在预防和治疗肿瘤的保健品和药品中开发利用。 展开更多
关键词 菜籽饼粕 多肽 抗肿瘤活性 凋亡
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