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神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：1
1
作者 李宏图 刘晓玉 庞希宁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期760-764,803,共6页
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进... 目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。 展开更多
关键词 神经元抑制性沉默元件 双链RNA 慢病毒载体
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神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系
2
作者 刘斌 李宏图 +3 位作者 张涛 孟凡彪 刘晓玉 庞希宁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期702-706,799,共6页
目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的D... 目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 神经元限制性沉默因子 分化 神经元
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正畸力引起的牙周组织内白细胞介素-1 mRNA含量变化的研究 被引量：2
3
作者 阎秀林 王岩 +1 位作者 伊哲 朱丽 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期248-250,共3页
目的研究在正畸牙移动中牙周组织炎症反应的情况和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)mRNA表达水平是否发生一定的变化。方法选取中国医科大学实验动物部Wistar大鼠36只,分别采用石蜡切片HE染色和实时定量RT-PCR的方法检测施加正畸力后1... 目的研究在正畸牙移动中牙周组织炎症反应的情况和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)mRNA表达水平是否发生一定的变化。方法选取中国医科大学实验动物部Wistar大鼠36只,分别采用石蜡切片HE染色和实时定量RT-PCR的方法检测施加正畸力后1、3、7和14 d牙周组织内炎症反应和IL-1α及IL-1βmRNA的含量变化。结果机械力使牙周组织内炎症反应明显,同时IL-1α和IL-1βmRNA的含量增加,对于IL-1α,其mRNA含量在3 d后明显增加,7 d后达到高峰,之后下降;而IL-1βmRNA的含量在加力1 d后即开始增加,3 d后达到峰值,随后下降。结论在正畸牙移动中,牙周组织内炎症反应明显;IL-1α和IL-1βmRNA的含量增加,并有一定的时相特异性。 展开更多
关键词 正畸学 白细胞介素-1 信使RNA
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正畸力引起的牙周组织内肿瘤坏死因子-α含量变化的研究
4
作者 阎秀林 孙明哲 +1 位作者 戚琳 朱丽 《中国血液流变学杂志》 CAS 2009年第1期33-35,57,共4页
目的研究在正畸牙移动中牙周组织内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平是否发生一定的变化。方法选取Wistar大鼠32只，分别以实时定量RT-PCR和Westernblotting的方法检测施加正畸力后1d、3d、7d和14d牙周组织内TNF-αmRNA含量和蛋白表... 目的研究在正畸牙移动中牙周组织内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平是否发生一定的变化。方法选取Wistar大鼠32只，分别以实时定量RT-PCR和Westernblotting的方法检测施加正畸力后1d、3d、7d和14d牙周组织内TNF-αmRNA含量和蛋白表达的变化。结果正畸力使牙周组织内TNF-αmRNA和蛋白含量均增加，这一含量的变化在1d时即已出现，7d时达到最高峰，之后下降，至14d时含量已降至接近1d时的水平。结论在正畸牙移动中，牙周组织内TNF-α含量变化明显，并有一定的时相特异性。TNF-α在正畸牙移动中可能具有一定的作用。 展开更多
关键词 正畸学 肿瘤坏死因子-Α 信使RNA 蛋白免疫印迹
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