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肺癌组织3号染色体短臂上抑癌基因异常改变的初步分析 被引量:14
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作者 李立 安倩 +5 位作者 冯晓莉 张建军 黄进丰 刘乐尧 程书钧 高燕宁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期399-401,共3页
目的 探讨 3号染色体短臂上的抑癌基因Fhit、hMLH1及VHL在肺癌发展中的可能作用。方法 选取上述基因内含子或附近的微卫星多态位点对 45例肺癌组织进行杂合性缺失 (LOH)分析 ,并对其中 17例进行了Fhit蛋白的免疫组化染色。结果 Fhit... 目的 探讨 3号染色体短臂上的抑癌基因Fhit、hMLH1及VHL在肺癌发展中的可能作用。方法 选取上述基因内含子或附近的微卫星多态位点对 45例肺癌组织进行杂合性缺失 (LOH)分析 ,并对其中 17例进行了Fhit蛋白的免疫组化染色。结果 Fhit基因内含子 3个位点D3S12 34、D3S130 0及D3S410 3的杂合率分别为 77.8% (35 / 45 )、73.3% (33/ 45 )和 82 .2 % (37/ 45 ) ,LOH阳性率分别为 6 2 .9% (2 2 / 35 )、6 3 6 % (2 1/ 33)和 5 9.5 % (2 2 / 37)。与hMLH1基因连锁的两个位点D3S15 6 1、D3S16 12杂合率分别为 48.9% (2 2 / 45 )、42 .2 % (19/ 45 ) ,LOH阳性率分别为 5 4.5 % (12 / 2 2 )和 6 3.2 %(12 / 19)。与VHL基因连锁的两个位点D3S10 38、D3S12 83的杂合率分别为 6 2 .2 % (2 8/ 45 )和 80 .0 %(36 / 45 ) ,LOH阳性率分别为 6 4 3% (18/ 2 8)和 41.7% (15 / 36 )。 17例肺癌组织有 6 4.7% (11/ 17)Fhit蛋白表达缺失。在Fhit蛋白缺失的 11个病例中 ,有 10例存在一个或多个Fhit基因位点的LOH。结论 上述 3个抑癌基因存在的高频率LOH可为肺癌的早期诊断提供新的途径和依据。Fhit基因的杂合性缺失可能是Fhit蛋白表达下调的机理之一。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 FHIT基因 HMLH1基因 VHL基因 肺癌 基因诊断
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微卫星分析在膀胱癌诊断中应用的进一步研究 被引量:9
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作者 张建军 郑闪 +8 位作者 邸雪冰 肖泽均 王栋 安倩 李长岭 郭素萍 韩迺珺 程书钧 高燕宁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第20期1224-1226,共3页
目的 研究微卫星分析在膀胱癌诊断中的应用价值 ,并比较该方法与尿细胞学的优缺点。方法 利用前续工作建立的 9位点的诊断组合和新筛选的 4个微卫星位点 ,对 1 43例膀胱病变和非膀胱病变个体的尿沉渣进行盲性分析 ,同时进行尿细胞学检... 目的 研究微卫星分析在膀胱癌诊断中的应用价值 ,并比较该方法与尿细胞学的优缺点。方法 利用前续工作建立的 9位点的诊断组合和新筛选的 4个微卫星位点 ,对 1 43例膀胱病变和非膀胱病变个体的尿沉渣进行盲性分析 ,同时进行尿细胞学检查 ,比较二者的结果。结果  89%(97/1 0 9)的膀胱癌 ,86% (6/7)的膀胱内翻性乳头状瘤 ,3例膀胱炎 (共检测 7例 )和 1例不明原因血尿的病人的尿沉渣至少在 1 3个位点中的一个检测出异常 ,1 9例非膀胱病变病人的尿沉渣未检测到任何异常。检测到尿沉渣微卫星异常的 3例膀胱炎和 1例不明原因血尿的病人 ,其细胞学也提示核异型或可疑癌细胞。在同时进行了尿沉渣微卫星分析和细胞学检查的 81例膀胱癌中 ,细胞学检出率为51 % (4 1 /81 ) ,而且主要集中于中晚期病人 ,微卫星分析的检出率为 90 % (73 /81 ) ,与分期分级无关。 1 2例微卫星分析阴性的膀胱癌病人中 ,有 4例细胞学发现癌细胞。结论 尿沉渣微卫星分析对于膀胱癌的诊断有一定意义。尿沉渣微卫星分析与传统尿细胞学有一定互补作用。 展开更多
关键词 微卫星 膀胱肿瘤 诊断 膀胱癌
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微切割喉鳞状细胞癌9p13-23区域微卫星杂合性缺失的研究 被引量:4
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作者 徐先发 安倩 +2 位作者 张建军 唐平章 程书钧 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期367-371,共5页
目的 探讨喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )在 9p13 2 3区域微卫星 (microsatellite)发生杂合性缺失 (lossofheterozygosity,LOH)的热点。方法 采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织 ,选取位于 9p13 2 3区域的 13个高多态性微卫星引物对 4... 目的 探讨喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )在 9p13 2 3区域微卫星 (microsatellite)发生杂合性缺失 (lossofheterozygosity,LOH)的热点。方法 采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织 ,选取位于 9p13 2 3区域的 13个高多态性微卫星引物对 42例喉鳞癌组织进行聚合酶链反应和变性凝胶电泳。结果 ① 42例喉鳞癌在 9p13 2 3区域等位基因LOH的总发生率是 97 6 %(4 1/ 42 )。在 13个微卫星引物中 ,LOH发生率最高者是位于 9p2 2 2 3的D9S16 2 (89 5 %) ,其次是位于 9p2 1的D9S171(80 0 %)。与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅 5 0 0 %。②等位基因缺失作图分析发现 42例喉鳞癌组织在 9p13 2 3上存在 2个明显的LOH较小区域 ,分别位于 9p2 1的D9S16 1~D9S171之间和 9p2 2 2 3的IFNA和D9S16 2之间。结论 喉鳞癌在 9p13 2 3区域除抑癌基因p16以外可能还存在 2个或 2个以上候选抑癌基因 ,这些候选抑癌基因也许和p16一样与喉鳞癌的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 喉肿瘤 鳞状细胞癌 9p13-23基因 杂合性丢失 DNA 微卫星
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全基因组扩增——微量DNA分析的金钥匙 被引量:5
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作者 张建军 高燕宁 程书钧 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期447-449,共3页
关键词 全基因组扩增 微量DNA分析 WGA 质量控制
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核苷酸切除修复系统基因遗传多态与晚期非小细胞肺癌患者铂类药物敏感性关系 被引量:46
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作者 袁芃 缪小平 +6 位作者 张雪梅 王中华 谭文 张湘茹 孙燕 徐兵河 林东昕 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1510-1513,共4页
背景与目的:肿瘤细胞对铂类药物的化疗敏感性与个体的DNA损伤修复能力关系密切,本研究探讨核苷酸切除修复系统(nucleotideexcisionrepair,NER)的重要成员XPC、XPD和ERCC1基因的遗传多态与晚期非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSC... 背景与目的:肿瘤细胞对铂类药物的化疗敏感性与个体的DNA损伤修复能力关系密切,本研究探讨核苷酸切除修复系统(nucleotideexcisionrepair,NER)的重要成员XPC、XPD和ERCC1基因的遗传多态与晚期非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者对铂类药物敏感性的关系。方法:对接受含铂类药物化疗的200例晚期NSCLC患者进行临床疗效评价。以聚合酶链-扩增片段长度多态性(PCR-AFLP)和限制性片段长度多态性(RFLP)的方法检测XPC-PAT、XPDLys751Gln(rs1052559)和ERCC1C8092A(rs1052559)多态的基因型,比较不同基因型与化疗敏感性的关系。结果:结合疗效情况,XPC-PAT遗传多态各基因型在化疗有效组(CR+PR)和无效组(SD+PD)中的分布频率差异有显著性(!2检验,P=0.023),携带XPCLL基因型个体的化疗敏感性是XPCSS基因型携带者的3.04倍(95%CI为1.25~7.41,P=0.015)。没有发现XPDLys751Gln和ERCC1C8092A多态与化疗敏感性的相关性。但联合分析后发现,核苷酸切除修复系统的这三个遗传多态在晚期NSCLC患者对铂类药物敏感性中存在一定的联合作用(趋势检验,P=0.021)。结论:核苷酸切除修复系统中XPC-PAT、XPDLys751Gln和ERCC1C8092A遗传多态可能与NSCLC患者对铂类药物敏感性相关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞性 基因遗传变异 XPC XPD ERCC1 药物敏感性
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TPX2在肺鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达和意义 被引量:29
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作者 林冬梅 马莹 +7 位作者 肖汀 郭素萍 韩迺珺 苏凯 易胜中 方健 程书钧 高燕宁 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期540-544,共5页
目的探讨 Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)在肺鳞癌及其癌前病变中的表达和意义。方法 Western blot 分析 TPX2蛋白在2株肺鳞癌细胞系和4株永生化支气管上皮细胞系中的表达。逆转录聚合酶链反应分析21对新鲜肺鳞癌组织... 目的探讨 Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)在肺鳞癌及其癌前病变中的表达和意义。方法 Western blot 分析 TPX2蛋白在2株肺鳞癌细胞系和4株永生化支气管上皮细胞系中的表达。逆转录聚合酶链反应分析21对新鲜肺鳞癌组织及其远端正常肺组织 TPX2的 mRNA表达水平。构建肺癌组织微阵列,针对其中的319例肺鳞癌患者的组织样品及其相应的114例癌前病变组织的常规石蜡切片进行 TPX2免疫组织化学(SP 法)染色,结果与临床病理参数比较分析。结果 TPX2蛋白在被测肺鳞癌和永生化支气管上皮细胞系中均有水平不一的表达。在新鲜组织标本中76.2%的肿瘤组织较正常组织 TPX2 mRNA 明显高表达。免疫组织化学分析结果显示,TPX2蛋白的表达在肿瘤组织(64.2%)中明显高于正常组织,且与肿瘤组织病理学分级、临床分期及淋巴结转移相关。TPX2蛋白在肺鳞癌的癌前病变中的表达显著高于正常组织,且随支气管上皮病变程度加重(鳞状化生、不典型增生、原位癌)而增高。结论 TPX2蛋白的表达有可能促进支气管上皮癌变和肺鳞癌进展,而且是肺鳞癌淋巴转移的危险因素。TPX2有望成为监测肺鳞癌发生发展的候选标志物。 展开更多
关键词 肺肿瘤 鳞状细胞 TPX2 组织芯片
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ERCC6 C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌患者生存相关 被引量:7
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作者 刘炬 张雪梅 +3 位作者 张湘茹 袁芃 徐兵河 林东昕 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第11期943-947,共5页
背景与目的:个体化治疗和靶向治疗是目前实体瘤治疗的两大发展方向。基因单核苷酸多态(SNP)不同基因型患者化疗疗效之间存在显著的差别,基因型与疗效之间的相关研究可能为实现个体化治疗提供重要的理论基础。已有研究证实DNA损伤修... 背景与目的:个体化治疗和靶向治疗是目前实体瘤治疗的两大发展方向。基因单核苷酸多态(SNP)不同基因型患者化疗疗效之间存在显著的差别,基因型与疗效之间的相关研究可能为实现个体化治疗提供重要的理论基础。已有研究证实DNA损伤修复基因ERCC1、XRCC1、XPD等基因的遗传变异与非小细胞肺癌铂类药物治疗的疗效及预后相关,尚无小细胞肺癌患者化疗疗效与损伤修复基因SNP相关研究的报告。本研究观察了ERCC6基因C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌化疗近期疗效和生存的关系。方法:采用回顾性研究方法,分析了95例局限期小细胞肺癌患者经卡铂加VPl6(CE)方案一线或辅助治疗后的近期疗效及生存期与ERCC6 C6530GSNP的关系。ERCC6 C6530G基因型分析采用PCR—RFLP方法。组间比较采用卡方检验,生存分析采用Kaplan—Meier Log—rank检验法。结果:ERCC6 6530位点CC、CG和GG基因型患者的近期疗效分别为88.9%、90.3%和85.7%,差异无显著意义(P=1.0)。CG+GG基因型患者中位TTP为13个月(95%CI=9.2~16.8),CC基因型患者中位1TrP为9个月(95%CI=7.3~10.6;P=0.19)。ERCC6 C6530GSNP和是否手术切除原发病灶两个因素与CE方案治疗后的生存期有关,其中CG+GG基因型患者中位生存期为24个月(95%CI=18.4~29.6),CC基因型患者治疗后中位生存为16个月(95%CI=9.9~22.0),差异有显著性(P〈0.05)。手术切除原发病灶的患者中位生存期在中位随访时间28.5个月时尚未得到,未行手术切除的患者中位生存时间为18个月(95%CI 12.5~23.5),差异有显著性(P〈0.01)。结论:ERCC6 C6530GSNP与局限期小细胞肺癌患者CE方案近期疗效无关但与生存相关。ERCC6 C6530G基因型可能成为局限期小细胞肺癌患者化疗方案个体化选择的依据。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 ERCC6 单核苷酸多态 卡铂 依托泊苷 预后 化疗
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osteopontin在非小细胞肺癌中的异常表达及其临床意义 被引量:4
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作者 胡智 肖汀 +5 位作者 林冬梅 郭素萍 张自强 邸雪冰 程书钧 高燕宁 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期591-595,共5页
目的探讨细胞外基质蛋白分子osteopontin(OPN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达状况及特点,以及其在肺癌发生演进中的作用及其临床意义。方法35例新鲜NSCLC肿瘤及其对照肺组织,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术,分析OPN基因在RNA水平的表达改变... 目的探讨细胞外基质蛋白分子osteopontin(OPN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达状况及特点,以及其在肺癌发生演进中的作用及其临床意义。方法35例新鲜NSCLC肿瘤及其对照肺组织,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术,分析OPN基因在RNA水平的表达改变。大样本石蜡包埋组织(662个有效样品的组织微阵列)以免疫组织化学染色,检测OPN蛋白在NSCLC中的表达状况,并分析其与肿瘤的组织学及临床特征的关系。结果RT-PCR分析显示,OPN在80.0%的NSCLC肿瘤组织中转录上调。免疫组化染色分析显示,OPN蛋白在肿瘤组织中的表达(59.6%)显著高于正常肺组织(25.2%,P<0.001),且OPN在鳞癌中的表达高于腺癌。通过对鳞癌的深入分析则表明,OPN蛋白表达水平在有淋巴结转移和无淋巴结转移的原发癌间有统计学意义(68.6%和49.7%,P= 0.001),而在同一组患者的原发癌和淋巴结转移癌之间的表达水平则趋于一致(68.6%和75.5%,P=0.171)。结论OPN在NSCLC(尤其是鳞癌)中表达水平明显升高,其过表达与肺鳞癌淋巴结转移密切相关,增加了肿瘤转移的风险(OR=2.212);OPN有促进肺癌恶性演进的作用。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白分子 OSTEOPONTIN 非小细胞肺癌
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中国常见肿瘤的全基因组关联研究进展 被引量:6
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作者 李娇元 缪小平 林东昕 《自然杂志》 2015年第1期1-7,共7页
肿瘤的遗传学病因复杂,全面系统地了解遗传变异在肿瘤发生中的作用是一项艰巨任务。全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在全基因组水平探讨常见单核苷酸多态性与疾病或其他表型的关联,为了解复杂性疾病的发病机制提... 肿瘤的遗传学病因复杂,全面系统地了解遗传变异在肿瘤发生中的作用是一项艰巨任务。全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在全基因组水平探讨常见单核苷酸多态性与疾病或其他表型的关联,为了解复杂性疾病的发病机制提供新策略。针对不同肿瘤的GWAS,验证了一些基于候选策略所发现的肿瘤相关变异,发现了一系列新的肿瘤易感基因或染色体区域。主要介绍在中国人群中开展的肿瘤GWAS所取得的一些成果,并在此基础上阐述GWAS为中国常见恶性肿瘤遗传病因学研究带来的机遇与挑战。 展开更多
关键词 肿瘤 病因学 中国人群 全基因组关联研究
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凋亡相关基因FAS及其配体FASL基因单核苷酸多态与大肠癌风险 被引量:3
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作者 杨燊 缪小平 +8 位作者 张雪梅 孙瞳 曲世宁 熊萍 叶颖江 郭永丽 谭文 王杉 林东昕 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第30期2132-2135,共4页
目的凋亡相关基因FAS及其配体FASL系统与肿瘤发生关系密切。本研究主要探讨FAS1377G/A和FASL844T/C多态与大肠癌风险的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析方法,检测了382例大肠癌患者和648例配对的正常... 目的凋亡相关基因FAS及其配体FASL系统与肿瘤发生关系密切。本研究主要探讨FAS1377G/A和FASL844T/C多态与大肠癌风险的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析方法,检测了382例大肠癌患者和648例配对的正常对照者FAS1377G/A和FASL844T/C多态基因型,比较不同基因型与大肠癌发生的关系。结果与FAS1377GG基因型和FASL844TT基因型者相比,FAS1377AA基因型和FASL844CC基因型携带者罹患大肠癌的风险分别增加了64.0%(95%CI,1.11~2.44)和69.0%(95%CI,1.03~2.78)。同时,我们发现这两个多态在大肠癌发生过程中存在明显的基因基因交互作用,同时携带FAS1377AA和FASL844CC基因型者发生大肠癌的风险是同时携带FAS1377GG/GA和FASL844TT/TC基因型者的3.6倍(95%CI,2.09~3.60)。结论凋亡相关基因FAS1377G/A及其配体FASL844T/C多态可能是中国人大肠癌的遗传易感因素。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 直肠肿瘤 FAS/FASL 基因多态 分子遗传学
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单体型在肿瘤研究中的应用与展望 被引量:5
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作者 林东昕 孙瞳 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期257-259,共3页
关键词 单体型 肿瘤 人类基因组全序列 单核苷酸多态
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膀胱移行细胞癌中FHIT基因杂合性缺失及其蛋白表达的研究 被引量:1
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作者 肖泽均 郑闪 +5 位作者 邸雪冰 肖汀 李长岭 何祖根 程书钧 高燕宁 《中国肿瘤临床与康复》 2004年第4期303-306,共4页
目的分析候选抑癌基因FHIT及其蛋白表达在中国人膀胱移行细胞癌(transitionalcellcarcinoma,TCC)中的异常改变,探讨其潜在的临床意义。方法选取两个位于FHIT基因第5内含子的微卫星多态标记,对40例膀胱TCC患者的肿瘤组织和尿沉渣DNA进行... 目的分析候选抑癌基因FHIT及其蛋白表达在中国人膀胱移行细胞癌(transitionalcellcarcinoma,TCC)中的异常改变,探讨其潜在的临床意义。方法选取两个位于FHIT基因第5内含子的微卫星多态标记,对40例膀胱TCC患者的肿瘤组织和尿沉渣DNA进行杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)分析,同时对相应的组织病理切片进行FHIT蛋白的免疫组化染色。结果在40例膀胱TCC患者的肿瘤组织中,两个微卫星多态标记D3S1234和D3S1300中至少有一个发生LOH的频率为57.8%;而在相应的尿沉渣DNA中,这两个位点中至少有一个发生LOH的频率为55.8%。同时在62.5%(2540)的膀胱TCC肿瘤组织检出FHIT蛋白表达缺失;而在FHIT蛋白表达缺失的25例肿瘤组织中,有20例存在一个或两个上述微卫星位点的LOH。结论FHIT基因在膀胱TCC患者的肿瘤组织和尿沉渣DNA中存在高频率LOH,提示这一基因在膀胱TCC的发生发展中可能起重要作用;杂合性缺失可能是膀胱TCC中FHIT蛋白表达下调的重要机理之一。而尿沉渣DNA中FHIT基因的LOH则有可能成为膀胱TCC早期诊断的潜在分子标志之一。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 FHIT基因 杂合性缺失
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中国人群常见恶性肿瘤遗传风险预测模型研究进展 被引量:2
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作者 田剑波 缪小平 林东昕 《生物产业技术》 2016年第6期10-15,共6页
肿瘤的发生发展是一个涉及多基因、多阶段、多步骤的过程。由于肿瘤表型的高度异质性以及肿瘤病因的复杂性,其风险预测模型构建一直是研究的热点和难点之一。全基因组关联研究(genome wide association studies,GWAS)是分子流行病学研... 肿瘤的发生发展是一个涉及多基因、多阶段、多步骤的过程。由于肿瘤表型的高度异质性以及肿瘤病因的复杂性,其风险预测模型构建一直是研究的热点和难点之一。全基因组关联研究(genome wide association studies,GWAS)是分子流行病学研究的重要策略,迄今发现了大量与肿瘤风险相关的易感基因与遗传位点。在传统肿瘤风险预测模型基础上纳入遗传信息,对肿瘤高危人群早期识别、精准预防以及个体化干预具有重大的公共卫生转化意义。文章主要介绍中国人群常见恶性肿瘤遗传风险预测模型的研究现状,以及所面临的机遇和挑战。 展开更多
关键词 预测模型研究 遗传度 关联研究 肿瘤病 预测能力 易感位点 风险预测 公共卫生 评价指标 交互效应
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肿瘤干细胞的研究进展
14
作者 时岚 赵玫 黄常志 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第4期785-787,共3页
近年来随着对肿瘤研究的不断深入,以及对干细胞了解的日益加深,越来越多的证据显示肿瘤与干细胞有着密切的关系,肿瘤可能是干细胞在异常微环境中差异分化的结果,并提出了肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)的学说。本文综述了肿瘤干细胞... 近年来随着对肿瘤研究的不断深入,以及对干细胞了解的日益加深,越来越多的证据显示肿瘤与干细胞有着密切的关系,肿瘤可能是干细胞在异常微环境中差异分化的结果,并提出了肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)的学说。本文综述了肿瘤干细胞的发现、特点,以及在肿瘤的诊断、治疗和预后判断中的作用,旨在为肿瘤发生发展研究及干细胞在肿瘤治疗方面的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 肿瘤 干细胞 治疗
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抗PIP5KL1多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 时岚 赵玫 +4 位作者 时茜 方明镜 罗清 戴亚云 黄常志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期155-157,共3页
目的:构建人4-磷酸-磷脂酰肌醇-5-激酶(phos-phatidylinositol-4-phosphate5-kinases-like1,PIP5KL1)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到相对分子质量(Mr)为42000的融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备兔抗PIP5KL1多克隆抗体。方法:采用PCR的... 目的:构建人4-磷酸-磷脂酰肌醇-5-激酶(phos-phatidylinositol-4-phosphate5-kinases-like1,PIP5KL1)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到相对分子质量(Mr)为42000的融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备兔抗PIP5KL1多克隆抗体。方法:采用PCR的方法获得编码人PIP5KL1的cDNA序列,将其克隆入pET-32a,构建pET32a-PIP5KL1表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人PIP5KL1血清,以Westernblot和ELISA方法分析其特异性和效价。结果:PIP5KL1融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,West-ernblot结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶100000。结论:获得了纯化的PIP5KL1融合蛋白和anti-PIP5KL1多抗血清,为今后对新基因PIP5KL1功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 PIP5KL1 融合表达 抗体制备
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