在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上,构建了Btc001菌株质粒DNA Hind Ⅲ片段的文库,并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCR-RFLP)方法筛选出含有cry1Cb全长基因的13.5kb大片段,...在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上,构建了Btc001菌株质粒DNA Hind Ⅲ片段的文库,并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCR-RFLP)方法筛选出含有cry1Cb全长基因的13.5kb大片段,酶切分析得到该片段的物理图谱,BamHI和EcoRI酶切完成了6.5kb含全长基因的亚克隆,并对这条6.5kb片段亚克隆、测序,序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686),并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S5B1CB和S3B1CB,扩增产物插入表达载体pET-21b中,诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性,LC_(50)达到7.97μg/ml。展开更多
文摘在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上,构建了Btc001菌株质粒DNA Hind Ⅲ片段的文库,并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCR-RFLP)方法筛选出含有cry1Cb全长基因的13.5kb大片段,酶切分析得到该片段的物理图谱,BamHI和EcoRI酶切完成了6.5kb含全长基因的亚克隆,并对这条6.5kb片段亚克隆、测序,序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686),并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S5B1CB和S3B1CB,扩增产物插入表达载体pET-21b中,诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性,LC_(50)达到7.97μg/ml。
