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TTV1与TTV2 SYBR-Green I实时荧光PCR检测方法的建立和应用 被引量:9
1
作者 陈欣 符芳 +4 位作者 王伟 李雪松 李海忠 宋淑萍 李曦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期948-951,共4页
为建立输血性传播病毒(TTV)基因1型(TTV1)和TTV基因2型(TTV2)的检测方法,本研究根据TTV1与TTV2基因的非编码区域序列差异,设计了2对特异引物,建立了鉴别TTV1和TTV2的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验... 为建立输血性传播病毒(TTV)基因1型(TTV1)和TTV基因2型(TTV2)的检测方法,本研究根据TTV1与TTV2基因的非编码区域序列差异,设计了2对特异引物,建立了鉴别TTV1和TTV2的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明:重组质粒建立的标准曲线相关系数为99%;可以同时鉴别检测TTV1和TTV2,检测PCV2和PRRSV阳性样品均呈阴性,表明该方法具有良好的特异性;最低检出量为10 copies/μL;重复试验结果显示,TTV1组内和组间变异系数分别为0.14%和0.74%;TTV2组内和组间变异系数均为0.13%;检测现地采集的189份样品,TTV1阳性率32.3%,TTV2阳性率6.3%,TTV1和TTV2混合感染的阳性率28.6%。TTV检测方法的建立为猪群TTV病的流行病学调查提供了有效的手段。 展开更多
关键词 SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR TTV1 TTV2
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猪布鲁氏菌病的诊断 被引量:5
2
作者 崔尚金 《猪业科学》 2008年第11期28-31,共4页
布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌引起人、畜共患的传染病,该病在世界各国均存在和流行,严重危害了人类健康和畜牧业的发展。布病在我N29个省、市、自治区都有不同程度的发生和流行,猪布鲁氏菌病(brucella suis disease,简称布病),从191... 布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌引起人、畜共患的传染病,该病在世界各国均存在和流行,严重危害了人类健康和畜牧业的发展。布病在我N29个省、市、自治区都有不同程度的发生和流行,猪布鲁氏菌病(brucella suis disease,简称布病),从1914年发现以来,一直被认为是一种特殊存在的传染病。该病是由猪种布鲁氏杆菌(B.suis)引起的急性或慢性的人兽共患病。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 猪种 布鲁氏杆菌 诊断 人兽共患病 人类健康 传染病 畜牧业
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猪细小病毒病流行的新特点、流行趋势与防控对策 被引量:5
3
作者 崔尚金 苗岚飞 《养猪》 2008年第6期65-68,共4页
猪细小病毒病是危害严重的繁殖障碍疾病,其流行的新特点和防控对策如何?请看哈兽研崔尚金博士怎么说。
关键词 猪细小病毒病 防控对策 流行趋势 发生流行 弱毒疫苗 仔猪死亡 繁殖障碍 致病机理
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猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型和猪瘟病毒混合感染的诊断与防制分析 被引量:2
4
作者 夏伟 李鹏 +3 位作者 危艳武 张宇辉 罗玉均 冯春复 《养猪》 2012年第2期81-83,共3页
2011年12月,上海某大型猪场暴发以母猪流产、产死胎和弱仔,哺乳仔猪体温升高、皮肤发绀、呼吸衰竭、顽固性腹泻,保育猪发烧、扎堆、皮肤红、昏睡、腹股沟淋巴结肿大为主要症状的疾病,死淘率高。剖杀3头发病哺乳仔猪、3头死亡保育猪,取... 2011年12月,上海某大型猪场暴发以母猪流产、产死胎和弱仔,哺乳仔猪体温升高、皮肤发绀、呼吸衰竭、顽固性腹泻,保育猪发烧、扎堆、皮肤红、昏睡、腹股沟淋巴结肿大为主要症状的疾病,死淘率高。剖杀3头发病哺乳仔猪、3头死亡保育猪,取淋巴结、脾、肺脏病变组织,用PCR、RT-PCR方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、猪瘟野毒为阳性,结合本病的临床症状和病理剖检,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、猪瘟病毒混合感染。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 圆环病毒2型 猪瘟病毒 混合感染 诊断
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猪场复养需要大量细致缜密的准备工作 被引量:1
5
作者 仇华吉 《猪业观察》 2019年第4期14-15,共2页
猪场复养是一项系统工程,需要考虑的因素很多。从目前反馈的信息来看,有好多猪场在尝试复养,有些不幸失败了,有些成功了,有的还尚待继续观察。复养成功的案例无疑是令人鼓舞的,但也要认识到不同猪场所处的地区、模式和环境的差异。复养... 猪场复养是一项系统工程,需要考虑的因素很多。从目前反馈的信息来看,有好多猪场在尝试复养,有些不幸失败了,有些成功了,有的还尚待继续观察。复养成功的案例无疑是令人鼓舞的,但也要认识到不同猪场所处的地区、模式和环境的差异。复养成功分狭义和广义复养成功分狭义的和广义的。狭义的复养成功是自猪只引进饲养后,在60天(即非洲猪瘟病毒感染的最长潜伏期的两倍,一般非洲猪瘟自然感染病例的潜伏期为3-19天,最长可达30天)内未发生新的疫情,经临床症状观察及病原学. 展开更多
关键词 非洲猪瘟 生物安全 准备工作
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一例规模猪场母猪正常分娩而死胎增加的病原诊断报告
6
作者 夏伟 张宇辉 +2 位作者 马迪杨 危艳武 刘长明 《养猪》 2012年第6期89-91,共3页
吉林省某规模猪场母猪存栏500多头,2012年8月份向笔者反映猪场最近3个月以来经常出现正常分娩的母猪产仔死胎比例增加的现象,母猪未见任何异常症状,而且死亡的胎儿新鲜、体重较大,未见木乃伊化以及畸形;剖检时发现死亡胎儿肺脏充... 吉林省某规模猪场母猪存栏500多头,2012年8月份向笔者反映猪场最近3个月以来经常出现正常分娩的母猪产仔死胎比例增加的现象,母猪未见任何异常症状,而且死亡的胎儿新鲜、体重较大,未见木乃伊化以及畸形;剖检时发现死亡胎儿肺脏充血、出血、水肿、间质增宽,肾脏肿大、充血,脐带出血等病理变化。 展开更多
关键词 规模猪场 母猪 诊断报告 死胎 分娩 病原 脐带出血 异常症状
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猪圆环病毒2型感染引起相关疾病的诊断技术
7
作者 黄立平 刘长明 《兽医导刊》 2010年第7期24-27,共4页
1991年,加拿大首次报道了一种新的称为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病症,该病可发生于健康状况良好的猪场,以5~12周龄的猪发病率较高,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等。急性暴发猪群的死亡... 1991年,加拿大首次报道了一种新的称为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病症,该病可发生于健康状况良好的猪场,以5~12周龄的猪发病率较高,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等。急性暴发猪群的死亡率可达10%,个别情况可高达50%,经病原学证明由PCV2感染所致。PCV2不但是PMWS的主要病原,而且还与其他几种病症有关系, 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 诊断技术 相关疾病 断奶仔猪多系统衰竭综合征 感染 PCV2 健康状况 生长迟缓
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猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定 被引量:14
8
作者 郭龙军 陆月华 +2 位作者 黄立平 危艳武 刘长明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1480-1486,共7页
【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免... 【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体,通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达,先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位,然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。【结果】5株单抗中有4株针对同一抗原表位,坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区,经多肽扫描证实,核心序列为26RPWLVHPRHRY36;另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应,对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应,鉴于该单抗具有中和病毒活性,针对的可能是构象表位。【结论】本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位,为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 抗原表位 多肽扫描 核定位信号
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禽网状内皮组织增生病病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:11
9
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 高立 祁小乐 高玉龙 徐延伟 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1137-1141,共5页
根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101~1×... 根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101~1×108copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10copies/μL,是常规PCR方法的100倍,该方法与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。用REV HLJR0901株人工感染1日龄SPF雏鸡,定期剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在肝、脾、法氏囊、胸腺和腺胃中均可检测到病毒,其病毒载量并无明显差异。本研究结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于REV的定量检测,为该病毒的诊断及致病性的研究提供了技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 荧光定量聚合酶链反应 TAQMAN探针
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网状内皮组织增生病病毒HLJR0901株全基因组的克隆及序列分析 被引量:9
10
作者 邓小芸 祁小乐 +5 位作者 高宏雷 高玉龙 秦立廷 高立 王永强 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期667-672,共6页
以网状内皮组织增生病病毒(REV)东北分离株HLJR0901基因组为模板,分别用6对引物扩增其全基因组,最终通过拼接和比对确定HLJR0901株的全基因组长8284bp,其基因组结构为LTR-PBS-gag-pol-env-PPT-LTR,GenBank登录号为GQ415646。运用软件将... 以网状内皮组织增生病病毒(REV)东北分离株HLJR0901基因组为模板,分别用6对引物扩增其全基因组,最终通过拼接和比对确定HLJR0901株的全基因组长8284bp,其基因组结构为LTR-PBS-gag-pol-env-PPT-LTR,GenBank登录号为GQ415646。运用软件将其序列与已知的其他REV全基因组进行比较。结果显示,HLJR0901株不仅与中国台湾和美国的REV毒株有较高的同源性,而且与鹅、野鸟及插入到鸡痘病毒中的REV前病毒有较近的亲缘关系,而与我国南方毒株HA9901的亲缘关系较远,表明我国流行的REV存在多样性。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生病病毒 HLJR0901 基因组 序列分析
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禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定 被引量:9
11
作者 孙美玉 秦立廷 +4 位作者 高玉龙 祁小乐 高宏雷 王永强 王笑梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期353-357,共5页
本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞... 本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC。通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC。通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σC基因 SF9细胞 杆状病毒
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TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数 被引量:6
12
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 高立 祁小乐 高玉龙 徐延伟 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期742-746,共5页
以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同... 以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在重组酵母菌株基因组中的拷贝数。结果表明,2条标准曲线在101~108拷贝.μL-1具有良好的线性关系,以及良好的敏感性和重复性。利用该方法对60株重组酵母菌株进行荧光定量PCR检测,结果筛选到38株单拷贝插入菌株和22株多拷贝插入菌株。本研究所建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法方便、高效,可用于重组毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的检测。 展开更多
关键词 TaqMan荧光定量PCR 毕赤酵母 基因拷贝数 GAP基因
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猪轮状病毒OSU强毒株vp7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析 被引量:4
13
作者 时洪艳 冯力 +2 位作者 陈建飞 孙东波 吴波平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期136-140,共5页
参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-vp7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切... 参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-vp7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示蛋白表达融合量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP7基因 克隆 原核表达
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禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析 被引量:3
14
作者 高立 祁小乐 +5 位作者 高宏雷 高玉龙 秦立廷 孙芬芬 张云 王笑梅 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1380-1384,共5页
【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体... 【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,将构建的原核表达质粒pET28-gp90,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行gp90蛋白表达并鉴定。用纯化的gp90蛋白免疫6-8周龄Balb/c小鼠,制备抗gp90的多克隆血清。用间接免疫荧光试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。【结果】REV gp90基因在重组大肠杆菌中正确表达,免疫小鼠后获得的抗血清可与重组杆状病毒表达的gp90蛋白特异性反应,ELISA效价达到1∶12800,该研究为开展REV诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 gp90蛋白 原核表达 纯化 多克隆抗体
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J亚群禽白血病病毒gp85基因在重组杆状病毒中的表达及鉴定 被引量:1
15
作者 倪伟 秦立廷 +4 位作者 孙美玉 高玉龙 潘伟 王笑梅 刘思当 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第8期4-7,共4页
为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至pFastBac-HTA供体质粒,将其转入DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组穿梭载体Bacmid-gp85。通过脂质体介导,将重组穿梭载体Bacmi... 为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至pFastBac-HTA供体质粒,将其转入DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组穿梭载体Bacmid-gp85。通过脂质体介导,将重组穿梭载体Bacmid-gp85转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp85。Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果表明ALV-J gp85蛋白在Sf9昆虫细胞中得到正确表达,表达的重组gp85蛋白分子量约为38 ku。ALV-J gp85重组蛋白在Sf9细胞中的正确表达为其功能研究和应用提供了良好的基础。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 GP85基因 杆状病毒
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禽白血病的防治 被引量:1
16
作者 高玉龙 王笑梅 《畜牧兽医科技信息》 2010年第1期94-96,共3页
禽免疫抑制病研究组,主要从事免疫抑制病(鸡传染性法氏囊病、禽白血病、鸡传染性贫血病等)的流行病学、致病机理、诊断方法及疫苗开发等研究。欢迎广大基层养鸡场及临床兽医技术人员来电、来函进行技术咨询。
关键词 禽白血病 鸡传染性法氏囊病 鸡传染性贫血病 免疫抑制病 防治 流行病学 致病机理 疫苗开发
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鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测 被引量:1
17
作者 李冰 李慧昕 +4 位作者 王钰 韩宗玺 邵昱昊 刘小丽 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期19-23,共5页
为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp~711 bp)和全长的gL(1 bp~711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原... 为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp~711 bp)和全长的gL(1 bp~711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 gL糖蛋白 原核表达 真核表达
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:1
18
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 祁小乐 高玉龙 高立 邓小芸 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞... 为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 ENV基因 原核表达 纯化 多克隆抗体
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J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达
19
作者 徐延伟 高宏雷 +6 位作者 高玉龙 李凯 高立 秦立廷 祁小乐 王永强 王笑梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期42-46,共5页
为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得... 为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病 GP85基因 毕赤酵母 分泌表达
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gga-miR-140-3p抑制马立克病病毒转化细胞MSB1增殖、迁移和侵袭
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作者 赵春芳 李新 +5 位作者 韩博 曲鲁江 刘长军 Jiuzhou Song 连玲 杨宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1005-1011,共7页
以马立克病病毒(MDV)感染SPF白来航鸡,收集脾和肝来源的淋巴瘤,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)进行检测,结果显示gga-miR-140-3p在感染MDV的肿瘤化脾和肝淋巴瘤中低表达。为揭示该miRNA在马立克病(MD)肿瘤转化过程中的作用,以该miRNA为研... 以马立克病病毒(MDV)感染SPF白来航鸡,收集脾和肝来源的淋巴瘤,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)进行检测,结果显示gga-miR-140-3p在感染MDV的肿瘤化脾和肝淋巴瘤中低表达。为揭示该miRNA在马立克病(MD)肿瘤转化过程中的作用,以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞增殖和迁移,并检测与细胞侵袭密切相关的基因MMP2和MMP9mRNA表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,转染gga-miR-140-3p激动剂后,细胞增殖在24、36和48h后发生显著(P<0.05)抑制,在60和72h后发生极显著(P<0.01)抑制。转染激动剂后,细胞迁移数也显著(P<0.05)减少。转染激动剂后,MMP2在转染后24h转录显著下调(P<0.05),转染后48和72h转录极显著(P<0.01)下调,MMP9基因在转染后48h转录显著(P<0.05)下调。gga-miR-140-3p作为在MDV感染组织中异常表达的miRNA,能够影响MD肿瘤淋巴细胞的特征——增殖、迁移和侵袭,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。 展开更多
关键词 马立克病病毒 增殖 迁移 MMP2基因 MMP9基因
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