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牛白血病病毒P24蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定
1
作者 于长清 周玉龙 +1 位作者 徐青元 先元华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1080-1085,共6页
为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r... 为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r P24-GST)。将rP24-His作为免疫原免疫小鼠,制备针对P24蛋白的MAb,利用rP24-GST作为包被抗原,经ELISA方法筛选,结果显示获得并筛选到两株针对P24蛋白效价较高的MAb44-10和115-5。间接免疫荧光试验检测结果显示,两株MAb仅和P24蛋白反应,均不能与牛病毒性腹泻病毒反应,初步表明其特异性良好。将P24蛋白截短表达后进行抗原表位鉴定,结果显示,两株MAb 44-10和115-5分别识别P24蛋白氨基酸序列197GQKLQACAHW^(206)和108GDLRSQYQN^(116)。本研究获得的两株P24 MAb具有建立BLV血清学检测方法的潜力,为进一步研发针对P24蛋白的BLV检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 牛白血病病毒 单克隆抗体 P24蛋白
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表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪瘟兔化弱毒疫苗的构建及其免疫原性评价
2
作者 李树稳 杨晓柯 +4 位作者 管翔雨 张广柱 黄淑坚 李永锋 仇华吉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2094-2100,2122,共8页
通过同源重组构建pHCLV-p54感染性克隆,将其转染至SK6细胞盲传拯救出重组病毒rHCLV-p54,并测定其在体外的遗传稳定性、生长曲线,同时免疫家兔评价其免疫效果。结果显示,E183L基因能够在重组病毒中稳定遗传,但是插入的外源基因影响C株的... 通过同源重组构建pHCLV-p54感染性克隆,将其转染至SK6细胞盲传拯救出重组病毒rHCLV-p54,并测定其在体外的遗传稳定性、生长曲线,同时免疫家兔评价其免疫效果。结果显示,E183L基因能够在重组病毒中稳定遗传,但是插入的外源基因影响C株的复制;家兔免疫试验结果显示,重组病毒rHCLV-p54能够诱导家兔产生抗ASFV的特异性抗体。结果表明,表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p54蛋白的重组病毒rHCLV-p54具有良好的免疫原性,有望作为候选疫苗进一步评价。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 猪瘟 猪瘟兔化弱毒疫苗 活载体疫苗
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用 被引量：4
3
作者 刘大凯 韩郁茹 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 曾苗苗 时洪艳 秦毅斌 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期499-504,共6页
为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白 原核表达 多克隆抗体 初步应用
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