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表达马传染性贫血病毒受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立 被引量：1
1
作者 王登峰 张淑琴 +4 位作者 马学恩 简子建 周建华 郭巍 全滟平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1070-1075,共6页
为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒（EIAV）的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性，克隆了马慢病毒受体1（ELR1）cDNA并插入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建了表达载体pELR1。该载体瞬时转染293细胞后，经Western blot... 为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒（EIAV）的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性，克隆了马慢病毒受体1（ELR1）cDNA并插入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建了表达载体pELR1。该载体瞬时转染293细胞后，经Western blot和间接免疫荧光（IFA）检测，确认了ELR1的表达。在pELR1质粒的基础上，插入EIAV疫苗株前病毒基因组转录调控区LTR以及萤火虫荧光素酶报告基因（Luc）构建了表达载体pELR1-LTR-Luc，并转染293细胞，建立了ELR1-LTR-Luc（293-E）细胞系。该细胞系能稳定表达ELR1基因，并且能在LTR的调控下表达萤火虫荧光素酶基因。用1000TCID50的EIAV驴胎皮肤细胞疫苗株D18V13接种该细胞，24h后检测其荧光素酶活性是未接毒对照的3．15倍。同时用IFA检测证明了病毒在细胞内的增殖。EIAV强毒株L21的接毒试验显示，ELR1．LTR（293-E）细胞的萤火虫荧光素酶活性与该毒株的接毒量在10^-2～10^-7稀释范围内呈正相关。该细胞系传35代后，外源基因的表达特征未发生改变。该细胞系的建立为进一步开展EIAV与细胞受体相互作用以及中和抗体评价等研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 EIAV 受体 LTR 荧光素酶 细胞系
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