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从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究 被引量:919
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作者 郭宝清 陈章水 +1 位作者 刘文兴 崔益洙 《中国畜禽传染病》 CSCD 1996年第2期1-5,共5页
采用猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞培养对国内暴发流行PRRS的某地猪场进行了病毒分离,从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子。用PRRSV SDOW-17单克隆抗体进行间接免疫荧光染色,证明从4头流产胎儿分离出4株PRRSV(CH-la,CH-lb,CH-lc,CH-ld... 采用猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞培养对国内暴发流行PRRS的某地猪场进行了病毒分离,从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子。用PRRSV SDOW-17单克隆抗体进行间接免疫荧光染色,证明从4头流产胎儿分离出4株PRRSV(CH-la,CH-lb,CH-lc,CH-ld)。这4株毒均可在猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞上生长,并产生特征性CPE变化。用PRRSV美国分离毒株VR-2332和NVSL抗血清分别对4株CH-1、VR-2332和NVSL毒株感染细胞进行间接免疫荧光试验,结果表明4个CH-l毒株近似于美洲型PRRSV。间接免疫荧光试验证明,4个CH-l分离株与HCV、PrV、PPV、TGEV、PEDV和HEV无交叉抗原。本文首次报道在国内暴发生殖和呼吸道综合征猪群分离到PRRS病毒。 展开更多
关键词 猪病 生殖呼吸综合征 PRRS 病毒
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析 被引量:387
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作者 童光志 周艳君 +4 位作者 郝晓芳 田志军 仇华吉 彭金美 安同庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期323-327,共5页
为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的... 为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分离鉴定和分子流行病学分析。结果显示从48个猪场样品中均检测出了PRRSV,通过完整的ORF5和部分Nsp2基因序列比较分析发现来自12个省市不同猪场的PRRSV高度同源,而且在Nsp2基因上都有两个相同位点的缺失;从分离的15株PRRSV中选择湖南分离株HuN4人工感染5头60日龄的健康猪,结果5头猪分别在7 d~21 d内全部死亡,感染猪的临床症状和现地所见十分相似。本次试验结果表明新出现的以Nsp2基因部分缺失为特征的PRRSV对猪是高致病性的,可能是2006年大部分猪场暴发"高热综合症"的主要病因。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高热综合症 分子流行病学
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国内首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到牛支原体 被引量:204
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作者 辛九庆 李媛 +5 位作者 郭丹 宋念华 胡守萍 陈超 裴洁 曹培丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期661-664,共4页
牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化。通过生化实验、特异... 牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化。通过生化实验、特异性PCR鉴定和序列比较证明为牛支原体。其16SrRNA核酸序列与牛支原体国际标准株PG45同源性为99.3%。以该培养物作为包被抗原的ELISA检测方法对13份发病犊牛血清进行了检测,其中11份血清抗体OD值为阴性血清对照值的2倍以上。该结果首次证实,国内部分地区存在牛支原体的流行。 展开更多
关键词 牛支原体 分离 鉴定
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猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析 被引量:193
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作者 彭金美 安同庆 +7 位作者 赵鸿远 刘益民 陈家锃 冷超粮 孙艳 常丹 田志军 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页
2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鉴定 抗原差异
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中国禽流感流行株的分离鉴定 被引量:130
5
作者 唐秀英 田国斌 +2 位作者 赵传删 周金法 于康震 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第1期1-5,共5页
分别从广东、四川、新疆等地禽流感(AI)血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集186份病料,先后分离到6株A型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代,可凝集鸡红细胞,血凝价达160~1280倍。不被新城疫、减蛋综合症... 分别从广东、四川、新疆等地禽流感(AI)血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集186份病料,先后分离到6株A型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代,可凝集鸡红细胞,血凝价达160~1280倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散(AGP)抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与AI标准分型血清H1~H14、N1~N9进行HI、NI试验,结果川和川农株均为H4N6,西昌1和2株及Sh株均为H9N2,新疆石河子(石)株为H14N5。分离株分别做脑内接种致病指数(ICPI)、静脉接种致病指数(IVPI)测定,结果所有分离株ICPI介于024~148之间,IVPI介于015~056之间.通过电镜观察,可见直径为80~120nm球状或杆状典型的禽流感病毒.经联机检索,从新疆石河子AI阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的H14N5株为国内外首次从鸡中分离出的H14亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株(G1株和G2株)做了血清型和毒力测定,试验结果认定,G1和G2株均为A型禽流感病毒H5N1亚型,G1、G2株对鸡均达到高致病力毒株标准。 展开更多
关键词 禽流感 病毒分离 亚型鉴定
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我国部分地区NDV的分子流行病学研究 被引量:101
6
作者 曹殿军 郭鑫 +4 位作者 梁荣 闫丽辉 刘培欣 闵平 陈杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期29-32,共4页
本研究根据新城疫病毒 (NDV)F基因编码区 1_374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树 ,将 6 8株NDV分为 9个基因型 (30株为国内分离株 ) ,其中Ⅰ~Ⅵ是早已存在的老基因型 ,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型 ,特别是Ⅸ为... 本研究根据新城疫病毒 (NDV)F基因编码区 1_374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树 ,将 6 8株NDV分为 9个基因型 (30株为国内分离株 ) ,其中Ⅰ~Ⅵ是早已存在的老基因型 ,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型 ,特别是Ⅸ为我国特有的基因型 (F48E9、M3、HLJ_3、HeB_1P和NM_5 )。 1997~ 1999年在我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的YN_1P、GX_3、H1、H2、P1、GX_1、GX_2、GS_2、GS_3、SHX_2、SHX_3、SHX_6、SHX_7、XJ_2和 1991年分离的HuB_1均属于Ⅶ基因型 ,该基因型的病毒是 90年代以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为 5个基因亚型 ,分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外HuN_1/ 98、HLJ_4/ 95和HeH_1P属一个老的基因Ⅵ ,1979~ 1985年分离自青海的QH_1、QH_2、QH_4属于一个新的基因型—Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的 ,既有老基因型的危险 (Ⅰ~Ⅵ ) ,又有新基因型 (Ⅶ )的流行 ,更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因型潜伏。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 系统发育进化树 分子流行病学 中国
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禽流感与养禽业发展和人类健康 被引量:102
7
作者 于康震 崔尚金 +1 位作者 付朝阳 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期312-315,共4页
关键词 禽流感 养禽业 人类健康 防制策略 流行特点
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中国猪源H5N1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定 被引量:106
8
作者 李海燕 于康震 +5 位作者 杨焕良 辛晓光 陈君彦 赵朴 毕英佐 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-6,共6页
猪是禽流感病毒"禽_猪_人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。1999~2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海... 猪是禽流感病毒"禽_猪_人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。1999~2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002)。2002~2003年,我们进一步对来自全国14个省市的1936份血清进行了H9亚型猪流感的检测,同时在广东、福建等省进行了H5亚型猪流感的检测。2002年辽宁、广东、山东及重庆猪血清中出现H9亚型流感抗体,阳性率分别为7.3%、6.8%、5.1%和1.6%。2003年采集的猪血清H9亚型流感抗体均为阴性,同时发现广东、福建两省2003年出现H5亚型流感阳性猪群,阳性率分别为4.7%和8.2%。从2001~2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒,部分序列分析发现H9和H5亚型猪流感病毒均与我国分离的禽流感病毒高度同源。本研究进一步确证了我国猪群中存在H9N2亚型流感病毒,并且首次发现我国猪群已出现H5N1亚型流感病毒,为人类流感及动物流感的防制敲响了警钟。对这两个亚型流感病毒所具有的公共卫生和兽医公共卫生危害性应予以高度重视。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H5亚型 H9亚型 病毒分离 病毒鉴定 血清学 病毒学
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猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 被引量:90
9
作者 刘光清 蔡雪晖 +2 位作者 仇华吉 郭宝清 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期72-76,共5页
关键词 猪繁殖呼吸综合征 PRRS 病毒 流行病学 防制
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部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定 被引量:118
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作者 李海燕 于康震 +5 位作者 辛晓光 李雁冰 蔡雪辉 杨焕良 毕英佐 王自振 《动物医学进展》 CSCD 2003年第3期67-72,共6页
对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪... 对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪流感病毒 ,12株 H1亚型猪流感病毒及其它亚型猪流感病毒 ,病毒粒子在透射电镜下呈现典型的正粘病毒特征 ,有囊膜和纤突 ,多为椭圆形、圆形、或杆形 ,直径约 80~ 12 0 nm。对 1997- 2 0 0 1年 3895份猪血清的血清学调查结果表明 ,近年中国多个地区猪群存在抗SWTN77(H1)、SWCO77(H3)、DKAT6 9(H1)、TKUK6 3(H3)流感病毒抗体 ;1998年来自河北的猪血清中抗 SWTN77阳性率高达 33.3% ;1999年来自内蒙的猪血清中抗 TKUK6 3和SWCO77阳性率分别为 13.3%和 2 6 .7% ;2 0 0 0- 2 0 0 1年调查的所有省市的猪群中均存在抗SWCO77抗体 ,阳性率从 3.2 %~ 10 0 %。说明近年我国猪群中 展开更多
关键词 猪群 猪流感 血清学调查 流感病毒 分离鉴定
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我国禽流感防制研究进展 被引量:109
11
作者 于康震 付朝阳 +2 位作者 崔尚金 步志高 唐秀英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期103-106,共4页
关键词 禽流行性感冒 流行病学 诊断技术 疫苗 防制 中国
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鸡传染性贫血病病毒的鉴定 被引量:111
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作者 崔现兰 幸桂香 +3 位作者 吴东来 冯菊艳 李锋 曲立新 《中国畜禽传染病》 CSCD 1992年第6期3-5,共3页
从现地肉鸡群分离出的鸡传染性贫血病病毒(CIAV)分离物接种SPF鸡制备的组织乳剂上清中的CIAV可在MDCC-MSB1细胞上增殖。接毒细胞培养物能耐氯仿和70℃15分钟处理;用以接种11周龄无CIAV抗体的SPF鸡,可诱导产生抗MSB1-TK5803株CIAV抗体;... 从现地肉鸡群分离出的鸡传染性贫血病病毒(CIAV)分离物接种SPF鸡制备的组织乳剂上清中的CIAV可在MDCC-MSB1细胞上增殖。接毒细胞培养物能耐氯仿和70℃15分钟处理;用以接种11周龄无CIAV抗体的SPF鸡,可诱导产生抗MSB1-TK5803株CIAV抗体;用以接种1日龄SPF鸡可产生CIA的临床症状和病理变化,证明该病毒分离物为CIAV。 展开更多
关键词 传染性 贫血 病毒 鉴定
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伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施 被引量:90
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作者 童光志 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期1-2,共2页
1伪狂犬病的流行现状伪狂犬病(Pseudorabies,Aujeszky′sdisea-se)在自然条件下能感染猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊、狐等动物。除猪以外,其他动物感染伪狂犬病病毒后,具有发热、奇痒... 1伪狂犬病的流行现状伪狂犬病(Pseudorabies,Aujeszky′sdisea-se)在自然条件下能感染猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊、狐等动物。除猪以外,其他动物感染伪狂犬病病毒后,具有发热、奇痒和急性脑脊髓炎等典型症状,均为致死... 展开更多
关键词 伪狂犬病 病毒病 流行现状 防制措施
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非洲猪瘟防控及疫苗研发:挑战与对策 被引量:100
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作者 王涛 孙元 +1 位作者 罗玉子 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1931-1942,共12页
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种接触传染性、广泛出血性猪烈性传染病,最急性和急性感染死亡率高达100%。自2018年8月我国发生首起非洲猪瘟疫情后,3个多月内,已有18个省份累计暴发69起,给我国养猪业造成了沉重打击。从目前非洲猪瘟... 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种接触传染性、广泛出血性猪烈性传染病,最急性和急性感染死亡率高达100%。自2018年8月我国发生首起非洲猪瘟疫情后,3个多月内,已有18个省份累计暴发69起,给我国养猪业造成了沉重打击。从目前非洲猪瘟全球流行态势及世界各国防控经验来看,我国非洲猪瘟防控和根除面临的形势不容乐观,亟需安全有效的疫苗用于该病的防控。文中结合当前非洲猪瘟病原学最新研究成果,系统总结了非洲猪瘟防控策略、疫苗研究进展及其面临的挑战,重点分析了疫苗研发历程、存在的问题、未来发展方向以及商业化应用所面临的关键科学问题,以期为我国非洲猪瘟防控及病原和疫苗研究提供借鉴。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 防控技术 疫苗
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应用间接免疫荧光法从国内生殖障碍综合征猪群中检测生殖和呼吸综… 被引量:78
15
作者 郭宝清 陈章水 《中国兽医科技》 CSCD 1996年第3期3-5,共3页
建立了间接免疫荧光抗体技术,并用此技术对国内生殖障碍综合征猪群和疑似生殖和呼吸综合征猪群进行了血清学调查,共检测了10个地区的10个猪场,计151份血清,在其中4个地区的4个猪场99份血清样品检查出PRRS抗体阳性血... 建立了间接免疫荧光抗体技术,并用此技术对国内生殖障碍综合征猪群和疑似生殖和呼吸综合征猪群进行了血清学调查,共检测了10个地区的10个猪场,计151份血清,在其中4个地区的4个猪场99份血清样品检查出PRRS抗体阳性血清58份,阳性率为58.6%。 展开更多
关键词 猪病 生殖呼吸综合症 免疫荧光洁 抗体 检测
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2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析 被引量:94
16
作者 刘孝珍 陈建飞 +4 位作者 时洪艳 张鑫 石达 刘胜旺 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期180-183,共4页
为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病... 为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病毒株S1基因核苷酸序列同源性为90.54%~99.96%,与经典病毒株CV777相比,其中有6个S1基因在453 bp~454 bp处存在3个核苷酸的缺失;一个在453 bp~454 bp处缺失6个核苷酸;其它10个S1基因在173 bp~186 bp之间存在12个核苷酸的插入,413 bp~417 bp之间有3个核苷酸的插入,467 bp~468 bp处缺失6个核苷酸,插入和缺失位点与韩国病毒株KNU-0901、KNU-0905、KNU-0801相似。S1基因系统进化树分析表明,PEDV S1基因分为3群,其中7个S1基因属于PEDVⅠ群,另外10个属于PEDVⅢ群。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 遗传变异 S1基因
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鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量:53
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作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页
利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。
关键词 新城疫 F基因 鸡IL-2 重组DNA疫苗
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猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾 被引量:83
18
作者 仇华吉 童光志 沈荣显 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1675-1685,共11页
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的... 猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并构建了不同的反向遗传操作标记疫苗,赋予了C株疫苗新的生命和内涵。C株疫苗可以用于猪瘟的控制和根除,借助于C株疫苗密集接种和综合控制措施,有关国家有效地控制了猪瘟,甚至消灭了猪瘟。尽管如此,要在全球范围内根除猪瘟,今后依然有漫长的路要走,这可能有赖于对C株进行进一步改造和利用。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗 20世纪50年代 综合控制措施 细胞免疫应答 被动免疫保护 反向遗传操作 回顾 免疫效力
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禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 被引量:56
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作者 李海燕 于康震 +1 位作者 辛晓光 邓国华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期182-185,共4页
用表达禽流感病毒 (AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞 ,以其表达产物制备抗原 ,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术 (rNP_ELISA)。其抗原最适包被量为 0 .6 μg/孔 ,待检血清最适... 用表达禽流感病毒 (AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞 ,以其表达产物制备抗原 ,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术 (rNP_ELISA)。其抗原最适包被量为 0 .6 μg/孔 ,待检血清最适稀释度为 1:2 0 0 ,酶标抗体使用浓度为 1:10 0 0。根据对 140份SPF鸡血清检测结果的统计分析 ,确定其判定标准为OD值大于 0 .15的血清样品为阳性。用rNP_ELISA检测 15 0份SPF鸡血清、194份非免疫鸡血清及 30份其它 15种鸡疫病阳性血清均为阴性 ;检测A型AIV15个不同亚型 (H1~H15 )毒株的特异性血清均为阳性 ;对人工接种AIV的SPF鸡第 3天即能检出抗体 ,到第 16 2天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在 2 .9%~ 7.2 %和 3 .4%~ 9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测 ,rNP_ELISA与全病毒间接ELISA(AIV_ELISA)、琼脂扩散试验 (AGP)及血凝抑制试验 (HI)的符合率分别为 99.9%、97.1%、98.8% ;并能 10 0 %检出AGP阳性及疑似、HI阳性的血清样品。试验证明 ,rNP_ELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快速。 展开更多
关键词 禽流感 重组核蛋白 ELISA 抗体检测 诊断 AIV
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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征 被引量:88
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作者 赵鸿远 彭金美 +9 位作者 安同庆 李琳 冷超粮 陈家锃 王倩 常丹 张秋月 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期506-509,共4页
2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异 鉴定 gE 分子特征
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