基于Hsp70基因的马梨形虫分类学定位分析 被引量：7

1

作者 罗金 刘光远 +4 位作者 田占成 谢俊仁 张萍 沈辉 党根生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期3694-3700,共7页

【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列(AB248743.1),设计引物TeHsp70F,TeHsp70R,以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增,获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBan... 【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列(AB248743.1),设计引物TeHsp70F,TeHsp70R,以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增,获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBank中23种已知虫种的相应序列进行分析比较。【结果】该片段编码639个氨基酸,其疏水性氨基酸达到208个,极性氨基酸167个。同一性分析显示,该基因片段与报道的马巴贝斯虫Hsp70基因(B.equi BAF02625.1)亲缘关系最近,其次是小泰勒虫(T.parva XP764717.1)和环形泰勒虫(T.annulata AAA30130.1),而与感染马属动物的另一个虫种驽巴贝斯虫(B.caballi BAF02619.1)亲缘关系较远。【结论】马泰勒虫Hsp70基因的克隆及系统发育分析显示,之前被定名为马巴贝斯虫(B.equi)的虫种隶属于泰勒虫虫种。本试验为马巴贝斯虫正确更名为马泰勒虫(T.equi)的分类地位提供了又一佐证。 展开更多

关键词 马泰勒虫 努巴贝斯虫 热休克蛋白(Hsp70) 分类学定位

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兰州市宠物猫隐孢子虫流行情况调查及分子生物学鉴定

2

作者 李雅琪 王玉桂 +5 位作者 邹扬 张月玥 马平平 叶得河 王帅 马永华 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第10期76-81,共6页

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子... 为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子虫(Cryptosporidium felis)。统计学分析结果显示,兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率与品种、季节及样品来源显著相关(P<0.05)。结果表明,兰州市宠物猫携带隐孢子虫且存在传播给人的风险,研究结果为预防兰州地区人、猫感染隐孢子虫提供一定的依据。 展开更多

关键词 隐孢子虫 宠物猫 兰州 流行病学调查

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马泰勒虫EMA1基因的克隆与生物学特性分析 被引量：11

3

作者 罗金 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 沈辉 田美媛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期352-356,共5页

根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达... 根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达载体pET-30a后进行表达,并纯化表达的重组蛋白,进行Western-blotting试验,以鉴定其生物学活性。结果,EMA1基因长819bp,编码272个氨基酸,将该基因编码蛋白的氨基酸序列与GenBank中登录的11种已知梨形虫的相应氨基酸序列进行比较分析,马泰勒虫肇源分离株与已报道的马泰勒虫(马巴贝斯虫)亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫和斑羚泰勒虫,而与东方泰勒虫、瑟氏泰勒虫的亲缘关系较远。表达的重组蛋白是分子质量约为38ku的融合蛋白,且表达产物能被马泰勒虫标准阳性血清识别。结果表明,马泰勒虫EMA1作为一种良好的抗原分子,在虫株的分类学研究、流行病学调查以及候选疫苗的研制中有着重要的意义。 展开更多

关键词 马泰勒虫 EMA1基因 克隆 系统发育

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基于18S rRNA基因序列的我国马梨形虫分类学地位分析 被引量：16

4

作者 罗金 刘光远 +2 位作者 田占成 谢俊仁 张萍 《动物分类学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期99-103,共5页

为从分子水平上阐明我国马梨形虫的种属分类特征。根据GenBank中登录的马梨形虫18SrRNA基因序列,在其高变区设计引物。PCR扩增获得大小分别为913bp、451bp的目的片段。将该片段克隆至pMD-18T载体后进行序列测定,并和GenBank上登录的其... 为从分子水平上阐明我国马梨形虫的种属分类特征。根据GenBank中登录的马梨形虫18SrRNA基因序列,在其高变区设计引物。PCR扩增获得大小分别为913bp、451bp的目的片段。将该片段克隆至pMD-18T载体后进行序列测定,并和GenBank上登录的其他地方株梨形虫18SrRNA基因序列进行同一性分析并构建系统发生树。分析显示,之前被称作马巴贝斯虫的虫种和泰勒虫虫种有着更密切的亲缘关系,在进化发育过程中处于同一种系,而与巴贝斯虫为明显的2个分支。我国驽巴贝斯虫肇源株与西班牙分离株(AY534883.1)仅有较小差异,其同源性高达91.8%。马泰勒虫肇源株与西班牙分离株(DQ287951.1,AY150064.2)同源性均高于91.4%。以上分析显示我国马梨形虫地方株和西班牙地方株亲缘关系最近,而与其他地方株差异相对较大。因此我国肇源株马梨形虫和西班牙地方株同属于Atbara8。 展开更多

关键词 马梨形虫 马泰勒虫 驽巴贝斯虫 18S RRNA 系统发育 分类学

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驽巴贝斯虫病PCR检测方法的建立和应用 被引量：15

5

作者 罗金 刘光远 +6 位作者 谢俊仁 田占成 沈辉 王芳芳 孙晓林 陈荣贵 王海军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期193-195,共3页

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6... 根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6个巴贝斯虫株中,仅驽巴贝斯虫株能扩增出特异性片段,马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫的扩增结果均为阴性。对45份马属动物血样进行检测,本研究建立的PCR方法测得驽巴贝斯虫病的阳性率为26.67%(12/45),与显微镜检测方法进行了比较,结果显示PCR检测方法可显著提高驽巴贝斯虫的检出率。 展开更多

关键词 驽巴贝斯虫 PCR诊断方法 应用

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甘肃省庆阳地区泰勒虫病流行趋势及分子特征分析 被引量：6

6

作者 罗金 谭阳春 +14 位作者 仇晓飞 马雨楠 黄学智 禹晓宁 梁会锋 李军岗 李利娟 程保伟 吴泽功 倪军 许肖枫 殷宏 罗建勋 李祥瑞 刘光远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期946-951,共6页

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一... 泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一步进行了蜱所携带的泰勒虫进行了分子鉴定。结果显示,庆阳地区蜱虫优势种以长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)为主,兼有小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicum anatolicum),青海血蜱(H.qinghaiensis)的分布。其传播的泰勒虫主要是瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),东方泰勒虫(T. orientalis),环形泰勒虫(T. annulata)以及感染羊的吕氏泰勒虫(T. luwenshuni),尤氏泰勒虫(T. uilenbergi)等,此外还有泰勒虫未定种(Theileria sp.)的寄生。统计显示在收集的300头份牛血液中瑟氏泰勒虫感染率高达74.58%,东方泰勒虫感染率72.36%,环形泰勒虫感染率12.54%。收集的200头份羊血液中吕氏泰勒虫感染率63.58%,尤氏泰勒虫感染率53.62%。而长角血蜱感染泰勒虫的感染率高达87.76%,小亚璃眼蜱感染率为47.62%,青海血蜱感染率46.43%。由此可见,庆阳地区蜱虫分布虽然较为单一,但其传播的泰勒虫病原具有多样性,值得注意的是不论家畜还是蜱虫对于泰勒虫的感染均较高。这为当地的该疾病的防控带来了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题;其次杀蜱也是防控泰勒虫病极其有效的方法。 展开更多

关键词 蜱 梨形虫 泰勒虫 庆阳

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一致性检验比较两种弓形虫抗体检测试剂盒 被引量：3

7

作者 李知新 刘光远 +4 位作者 赵燕 田进梅 张学军 张和平 吴润 《甘肃畜牧兽医》 2016年第1期81-82,84,共3页

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异... 比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异性。两种试剂盒联合检出79份阳性,阳性符合率为67.52%,阴性符合率为95.17%,总符合率为88.82%。x^2检验差异显著(x^2=228.23,p=0.00);u检验值为15.89,两种产品的一致性为中度一致(Kappa值=0.66)。所以弓形虫病IHA检测试剂盒可作为现场收益流行病学调查,而弓形虫Ig G抗体ELISA检测试剂盒适合辅助临床检测和诊断。x^2检验比较两种试剂盒具有局限性。u检验排除偶然性造成的一致程度,与Kappa检验结合可比较一致性。弓形虫抗体检测要根据实况选择不同的试剂盒。 展开更多

关键词 弓形虫 Kappa检验 x2检验 U检验 IHA ELISA

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用 被引量：3

8

作者 罗金 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 沈辉 田美媛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第10期6-9,共4页

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序... 为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。 展开更多

关键词 泰勒虫 巴贝斯虫 分类学 18S RRNA

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长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达 被引量：3

9

作者 罗金 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 沈辉 田美媛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期551-556,共6页

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达... 根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。 展开更多

关键词 长角血蜱 4D8基因 克隆 原核表达

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长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建与分析 被引量：2

10

作者 刘建刚 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 龚真莉 张丽艳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期659-664,共6页

为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱... 为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱血雄蜱cDNA第一链为模板,用RT-PCR方法对从文库中挑选的5个表达序列标签(EST)进行鉴定。初步获得18个EST,BlastX分析显示,所得cDNA编码的功能性蛋白主要包括信号传导、组织形态形成、转录调节和糖类代谢等相关蛋白。RT-PCR鉴定结果显示,随机挑选的5个新EST中有3个在半饱血状态下差异表达。结果表明,成功地构建了长角血蜱雄性全蜱抑制消减杂交文库,获得了有潜在生物学功能的EST。 展开更多

关键词 长角血蜱 抑制消减杂交(SSH) CDNA文库

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双芽巴贝斯虫Hsp20一新基因型的发现及生物学特性分析 被引量：1

11

作者 曲志强 张亮 +10 位作者 罗金 陈泽 任巧云 刘文阁 倪军 许肖枫 吴泽功 罗建勋 殷宏 孙晓林 刘光远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期567-573,共7页

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的1... 为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系最近。对其氨基酸序列进行比对分析,发现在第31～85位点存在冗余,与公布的Hsp20氨基酸序列存在明显的差异。通过同源建模分析,发现该冗余致使Hsp20蛋白在第7号位形成1个环形结构,从而引起了第3号位的拉伸。通过生物信息学分析得出,获得的双芽巴贝斯虫甘肃株的Hsp20基因是一新基因型。该基因型的存在为更加准确诊断双芽巴贝斯虫病提供了依据。 展开更多

关键词 双芽巴贝斯虫 Hsp20 基因型 生物学特征

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miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化 被引量：1

12

作者 王芳芳 罗金 +5 位作者 袁小松 谢俊仁 田占成 王素艳 郭锦霞 刘光远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1014-1021,共8页

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用Graph... 根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。 展开更多

关键词 长角血蜱 MICRORNA 荧光定量PCR 标准曲线

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microRNA碱基编辑特性的研究进展 被引量：1

13

作者 罗金 刘光远 +4 位作者 袁小松 王芳芳 田占成 谢俊仁 王辉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期650-654,共5页

为了更好地了解microRNA分子中碱基编辑的产生机理,论述了microRNA序列碱基编辑特征,以及碱基编辑在生物组织、物种进化、神经发育等方面的特征,并就碱基编辑在microRNA中的研究方法进行了阐述。展望了碱基编辑在microRNA分子中的研究前... 为了更好地了解microRNA分子中碱基编辑的产生机理,论述了microRNA序列碱基编辑特征,以及碱基编辑在生物组织、物种进化、神经发育等方面的特征,并就碱基编辑在microRNA中的研究方法进行了阐述。展望了碱基编辑在microRNA分子中的研究前景,以期为碱基编辑的生物学机制研究提供参考。 展开更多

关键词 MICRORNA 碱基编辑 研究进展

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒宁夏株ORF5基因遗传进化分析

14

作者 李知新 刘光远 +5 位作者 张学军 周海宁 闫小芹 田进梅 赵燕 张和平 《甘肃畜牧兽医》 2016年第3期97-98,共2页

为了解宁夏地区感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的基因型和遗传变异情况，收集2008~2014年宁夏4个地区临床疑似发病猪的血清和组织，病毒核酸提取后用特异性引物进行RT-PCR扩增、凝胶电泳和测序，鉴定9份阳性样品。并与国内外猪繁殖与... 为了解宁夏地区感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的基因型和遗传变异情况，收集2008~2014年宁夏4个地区临床疑似发病猪的血清和组织，病毒核酸提取后用特异性引物进行RT-PCR扩增、凝胶电泳和测序，鉴定9份阳性样品。并与国内外猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒代表毒株进行序列比和遗传进化分析。结果表明，9个毒株的ORF5基因中7株属于美洲Ⅳ型，2株属于美洲Ⅰ型。说明宁夏流行的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒均属于美洲型，但病毒亚型之间已发生变异，为PRRSV遗传进化分析和疫病防控提供了新的参考。 展开更多

关键词 猪 猪繁殖障碍综合征病毒 ORF5 遗传进化

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长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析

15

作者 赵波 刘光远 +6 位作者 罗金 张萍 田占成 谢俊仁 田美媛 王芳芳 袁小松 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期806-811,共6页

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了... 为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。 展开更多

关键词 长角血蜱 MESK基因 生物信息学 克隆 真核表达

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长角血蜱新基因HL05全长序列的克隆与原核表达

16

作者 张丽艳 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 龚真莉 刘建刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期380-386,共7页

以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子... 以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子质量为20.01ku。序列同源性分析表明,该基因为长角血蜱新基因。对推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,表明HL05蛋白为分泌型蛋白,无跨膜区,具有较高的抗原指数。将该基因亚克隆后连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,转入BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导后得到大小为46ku左右的重组蛋白,与预期大小一致。Western-blot结果显示兔抗长角血蜱成蜱全虫抗体能够识别该重组蛋白。 展开更多

关键词 长角血蜱 HL05新基因 全长 序列分析 原核表达

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