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反转录─套式PCR方法检测鸡传染性法氏囊病病毒 被引量：9
1
作者 陈红英 胡子信 张曼夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第5期370-372,共3页
采用蛋白酶 Ｋ 消化，酚、氯仿抽提的方法提取法氏囊匀浆和细胞培养液中的鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）基因组 Ｒ Ｎ Ａ，用特异的寡核苷酸引物对其 Ｖ Ｐ２ 高变区进行反转录套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增。应用该方法从一个法氏... 采用蛋白酶 Ｋ 消化，酚、氯仿抽提的方法提取法氏囊匀浆和细胞培养液中的鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）基因组 Ｒ Ｎ Ａ，用特异的寡核苷酸引物对其 Ｖ Ｐ２ 高变区进行反转录套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增。应用该方法从一个法氏囊匀浆中即可特异地检出 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ，得到的扩增产物可用于分子流行病学的进一步分析，而从感染材料的处理到扩增结果的电泳检测，在两个工作日之内可轻松完成。本实验为法氏囊病病毒的诊断和分子流行病学的分析提供了一种快速、简便、可靠的手段。 展开更多
关键词 鸡 IBDV PCR 病毒检测
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激光光钳法细胞膜弹性测量技术的建立和白细胞膜弹性的测量 被引量：6
2
作者 郭红莲 曹勤红 +5 位作者 任东涛 刘国琴 段建发 李兆霖 张道中 韩学海 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期246-251,共6页
在激光光钳装置上,利用会聚的740 nm激光束捕获住凝集素包被的1 μm小球,靠近细胞质膜,待形成稳定结合后,通过微动样品台来牵拉细胞膜,牵拉过程中形成细丝,即“膜丝”.膜丝上的张力用光钳装置上的力测定单元测得.用该法测量了白细胞的... 在激光光钳装置上,利用会聚的740 nm激光束捕获住凝集素包被的1 μm小球,靠近细胞质膜,待形成稳定结合后,通过微动样品台来牵拉细胞膜,牵拉过程中形成细丝,即“膜丝”.膜丝上的张力用光钳装置上的力测定单元测得.用该法测量了白细胞的膜表面张力,外力作用下的膜变形呈多种形态.在接触面积较小的情况下形成的膜丝较细,直径小于1 μm,张力大小为7.4 pN.在接触面积较大的情况下会形成大尺寸的膜突出,张力大小约为14.0 pN,推测后者与膜骨架的变形有关. 展开更多
关键词 激光光钳法 弹性测量 白细胞 细胞膜弹性 膜张力 细胞骨架 力学特征 接触面积
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鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌和体的制备 被引量：4
3
作者 李赞东 刘春海 +4 位作者 黄劲松 沙金 危华 赵晨 孙明军 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第6期1-4,共4页
探索了鸡胚 12～ 17期血液中的原始生殖细胞 (PGCs)迁移数量变化规律 ,将其在液氮中冷冻保存。并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离 ,结果发现 12～ 17期血液中均有PGCs存在 ,13期达到高峰约 4 7 1&#... 探索了鸡胚 12～ 17期血液中的原始生殖细胞 (PGCs)迁移数量变化规律 ,将其在液氮中冷冻保存。并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离 ,结果发现 12～ 17期血液中均有PGCs存在 ,13期达到高峰约 4 7 1± 10 5个 /μl,在血液中比例为 0 0 12 6 %。冷冻保存 3个月后解冻成活率达 80 %以上。三种分离方法所得的分离效果分别为 95 7%、39 2 %、6 3 0 % ,纯度为2 7 5 %、8 4 %、3 1%。将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至 14～ 15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌和体 ,获得 8只雏鸭 (8/110 )。以鸡W染色体探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞 ,嵌和率达 84 2 % (16 /19)。表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中 ,并有可能增殖分化成有功能的配子。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 种间嵌和体 分离 鸡 鸭 早期胚胎 禽类
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局部应用辛伐他汀和机械预处理方法预防静脉移植物再狭窄的研究
4
作者 赵晨宇 潘予韦 +4 位作者 贾六军 张岩 段亚冰 丁力 孙寒松 《中国胸心血管外科临床杂志》 CSCD 北大核心 2023年第2期291-298,共8页
目的探究局部应用辛伐他汀和机械预处理方法对静脉移植物内膜增生的影响及机制。方法在体实验选用新西兰兔12只,随机分为4组:空白对照组、辛伐他汀局部处理组、机械预处理组、药物机械联合预处理组,每组3只。超声评价移植物管壁改变和... 目的探究局部应用辛伐他汀和机械预处理方法对静脉移植物内膜增生的影响及机制。方法在体实验选用新西兰兔12只,随机分为4组:空白对照组、辛伐他汀局部处理组、机械预处理组、药物机械联合预处理组,每组3只。超声评价移植物管壁改变和移植物内血流速度,病理切片评价血管内膜增生情况。体外实验培养人脐血管内皮细胞,设辛伐他汀组和溶剂对照组,检测YAP磷酸化、下游靶基因表达量和细胞增殖情况。结果血管超声显示除辛伐他汀局部处理组外,其它3组术后21 d静脉移植物内流速均较术后7 d明显升高(P<0.01)。病理切片显示辛伐他汀局部处理组、机械预处理组、药物机械联合预处理组、空白对照组的新生内膜厚度分别为:(45.56±4.11)μm、(201.28±16.71)μm、(143.57±7.82)μm、(249.45±13.33)μm,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验结果显示,与溶剂对照组相比,高浓度辛伐他汀(5 mmol/L)组细胞死亡,低浓度辛伐他汀(2.5 mmol/L)组细胞增殖受抑制(P<0.05),辛伐他汀组YAP蛋白表达量不变,磷酸化YAP蛋白表达量明显增加(P<0.05),下游靶基因ccn1表达下调(P<0.001)。结论血管内局部应用辛伐他汀和机械预处理方法单用或联用均能抑制静脉移植物内膜增生;高浓度的辛伐他汀有细胞毒性,低浓度的辛伐他汀有抑制细胞增殖的作用;辛伐他汀通过抑制YAP入核、降低细胞增殖相关靶基因ccn1的转录发挥抑制新生内膜形成的作用。 展开更多
关键词 局部用药 辛伐他汀 机械预处理 静脉移植物再狭窄 冠状动脉旁路移植术
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微卫星DNA多态性及其在马匹品种登记中的应用 被引量：1
5
作者 王振山 张玉国 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2001年第4期43-44,共2页
关键词 马 品种登记 微卫星DNA多态性 应用
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病毒诱导的基因沉默及其在植物功能基因组学研究中的应用 被引量：17
6
作者 王宏芝 李瑞芬 +2 位作者 王国英 马荣才 魏建华 《自然科学进展》 北大核心 2005年第1期8-14,共7页
病毒诱导的基因沉默(VIGS)是植物体中天然存在的一种抵御外源核酸入侵的防御系统,正常情况下保护植物免受病毒的侵染.植物的这种防御机制可被病毒RNA激活,属于转录后基因沉默现象.如果在病毒载体中插入目标基因片段,侵染寄主植物后,植... 病毒诱导的基因沉默(VIGS)是植物体中天然存在的一种抵御外源核酸入侵的防御系统,正常情况下保护植物免受病毒的侵染.植物的这种防御机制可被病毒RNA激活,属于转录后基因沉默现象.如果在病毒载体中插入目标基因片段,侵染寄主植物后,植物会表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型.利用这种机制,可以确定基因功能.目前,这种技术有望发展成为一种简单、快速、高通量的分析已知序列基因功能的方法.文中综述了VIGS技术的原理与发展,并讨论该技术在植物功能基因组学研究中的应用前景. 展开更多
关键词 植物功能基因组学 转录后基因沉默 病毒诱导 基因功能 保护植物 植物体 高通量 目标基因 正常 病毒载体
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传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析 被引量：8
7
作者 胡子信 张曼夫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期330-338,共9页
以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株，Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板，用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段，分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ... 以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株，Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板，用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段，分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上，测定了其核苷酸顺序，在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ，分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５，ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较，结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间，在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异；在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示，Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ，Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ，在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中，该区就占５ 个，代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 展开更多
关键词 PT-PCR 序列分析 IBDV 疫苗 基因克隆
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传染性法氏囊病病毒A节段编码序列cDNA基因的克隆和序列分析 被引量：3
8
作者 胡子信 张曼夫 +2 位作者 陈红英 袁克湖 门昌平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期178-181,共4页
对反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）扩增克隆的传染性法氏囊病病毒超强毒Ｈａｒｂｉｎ毒株的Ａ节段编码序列ｃＤＮＡ基因进行了核苷酸序列分析。结果，克隆的Ａ节段基因共３１０１ｂｐ，包括两个完整的阅读框架ＯＲＦＡ１和ＯＲ... 对反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）扩增克隆的传染性法氏囊病病毒超强毒Ｈａｒｂｉｎ毒株的Ａ节段编码序列ｃＤＮＡ基因进行了核苷酸序列分析。结果，克隆的Ａ节段基因共３１０１ｂｐ，包括两个完整的阅读框架ＯＲＦＡ１和ＯＲＦＡ２分别编码１０１２氨基酸的前体蛋白ＶＰ２４３和１４５氨基酸的ＶＰ５，两者有部分重叠。Ａ节段编码序列基因的克隆成功为分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 IBDV CDNA 节段编码序列 克隆
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