猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR鉴别方法的建立与应用 被引量：22

1

作者 刘俊 王琴 +8 位作者 范学政 徐璐 赵启祖 黄伟 汤波 沙莎 周远成 陈蕾 邹兴启 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期4366-4371,共6页

【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探... 【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验。【结果】该方法在100～10-7范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10-2pg病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nPCR方法的符合率为94.3%(115/122),阳性和阴性符合率分别为86.4%(38/44)和98.7%(77/78),Kappa值为0.87>0.75【。结论】建立的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法能鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒,且特异性好、灵敏度高、与笔者先前建立的RT-nPCR方法对临床样本的检测结果具有高度的一致性。 展开更多

关键词 猪瘟 荧光定量PCR TaqMan-MGB 兔化弱毒疫苗

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细胞外囊泡在病毒生命周期中的作用

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作者 李芳韬 孙洪磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期93-96,共4页

细胞外囊泡(EVs)具有一种源自细胞质膜或多囊体(MVB)的脂质双分子层球状膜性结构,其外部结构和释放过程与部分病毒类似。本文介绍了EVs的结构、分类及其对病毒入侵宿主和病毒组装的重要影响。分析表明,EVs作为细胞内容物的运输工具,是... 细胞外囊泡(EVs)具有一种源自细胞质膜或多囊体(MVB)的脂质双分子层球状膜性结构,其外部结构和释放过程与部分病毒类似。本文介绍了EVs的结构、分类及其对病毒入侵宿主和病毒组装的重要影响。分析表明,EVs作为细胞内容物的运输工具,是调节局部细胞微环境和远距离信号传导的关键介质,并且对病毒入侵宿主和病毒组装过程具有重要调控作用,而病毒感染使EVs在细胞之间以及细胞内发挥的作用更加复杂。本文旨在通过对EVs在病毒生命周期中的作用进行归纳总结,对病毒感染过程中EVs的功能有更深入的了解。 展开更多

关键词 细胞外囊泡 病毒 病毒生命周期

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RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布 被引量：3

3

作者 张玉杰 赵燕 +8 位作者 徐璐 张乾义 陈锴 孙永芳 邹兴启 朱元源 赵启祖 宁宜宝 王琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2397-2407,共11页

【目的】为研究CSFV RNA在体外感染细胞中的分布及定位,建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对Gen Bank中公布的CSFV、BVDV和BDV全序列,避开BVDV和BDV的同源区,设计了CSFV RNA及内参基因β-actin的特异... 【目的】为研究CSFV RNA在体外感染细胞中的分布及定位,建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对Gen Bank中公布的CSFV、BVDV和BDV全序列,避开BVDV和BDV的同源区,设计了CSFV RNA及内参基因β-actin的特异探针。以CSFV中等致病力毒株(He BHH1/95)为参考毒株,在PK15细胞中培养病毒,加入RNA可视化原位杂交的特异探针和相应试剂,采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素,采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶K浓度和甲醛固定时间,建立了CSFV RNA可视化原位杂交技术,并与FAT方法比较该技术灵敏度;用我国目前流行的CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3基因亚型及BVDV、PPV、PRV和PCV-2病毒进行特异性试验。最终,以CSFV强致病力毒株(SM)接种PK15细胞,病毒感染后0.5、1、3、6、8、10、14、18、24、36、48、72、96h(hours post inoculation,hpi)取样,每个时间点2个重复,采用CSFV RNA可视化原位杂交技术进行检测。为佐证病毒蛋白在细胞中的定位及分布,同时采用FAT方法对SM株E2蛋白在PK15细胞中的表达情况进行动态研究。【结果】采用该技术在荧光共聚焦显微镜下可观察到CSFV RNA在细胞中的定位;当蛋白酶K浓度为1:1 000、甲醛固定时间为30min时为最优反应条件;灵敏度试验表明该技术对病毒的检测极限为10-8/200μL,比FAT高3.5个数量级;特异性试验结果显示该探针能与CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3亚型结合,与BVDV、PPV、PCV-2、PRV无交叉反应。采用该技术对CSFV RNA感染后在靶细胞中的定位与分布研究结果显示:0.5hpi在胞核和胞浆均能检测到RNA,0.5—6hpi RNA主要分布于胞核内并在核内富集;10hpi胞浆内RNA逐渐增多,胞核内RNA逐渐减少,24hpi RNA主要集中在胞浆内细胞核周围;36hpi核外RNA大量聚集增多,72hpi达到峰值;96hpi RNA总量有所下降。而FA 展开更多

关键词 猪瘟病毒 定位 分布 RNA可视化原位杂交 荧光抗体试验(FAT)

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猪瘟DIVA疫苗研究现状 被引量：1

4

作者 赵启祖 《兽医导刊》 2017年第21期27-29,共3页

一、养猪业是中国畜牧业的脊柱产业 2012-2016年国家统计局公布,肉类总产量,猪肉占63.76%,是主要消费肉类产品;全国年均生猪出栏量达到46020.6万头;年均生猪出栏量达到70804.4万头;年均生猪总产量达到11.6825亿头,按照数据来看,中国的... 一、养猪业是中国畜牧业的脊柱产业 2012-2016年国家统计局公布,肉类总产量,猪肉占63.76%,是主要消费肉类产品;全国年均生猪出栏量达到46020.6万头;年均生猪出栏量达到70804.4万头;年均生猪总产量达到11.6825亿头,按照数据来看,中国的养猪量占据了世界养猪总量的一半以上。养猪业的发展直接影响了国家经济和民众生活水平的提高。 展开更多

关键词 DIVA 疫苗 猪瘟 肉类产品 国家统计局 养猪业 国家经济 总产量

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诊断试剂的研发

5

作者 徐璐 《兽医导刊》 2017年第21期34-35,共2页

诊断试剂的研发过程,就是对所有可能影响检测结果的因素进行不断完善的方法确认过程。 一、方法的可行性 1.操作方法的确定。根据已有的材料和技术确定操作方法,并在现有的方法上进行改进。

关键词 诊断试剂 研发 操作方法 检测结果 可能影响

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猪瘟免疫失败主要原因的解析 被引量：59

6

作者 王琴 宁宜宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期61-63,共3页

关键词 猪瘟 免疫失败 原因分析 疫苗 母源抗体 免疫程序

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猪瘟病毒流行病学、病原致病特性及猪瘟综合防制研究 被引量：42

7

作者 王琴 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2006年第5期13-18,共6页

猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的高度致死性、接触性传染病,严重危害全球养猪业的重要传染病,也是我国计划要消灭的重大动物疫病之一。近年流行态势十分复杂,本文就CSF的流行情况、病原致病特征及综合防治技术研究等方面进行全面概述,并为猪... 猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的高度致死性、接触性传染病,严重危害全球养猪业的重要传染病,也是我国计划要消灭的重大动物疫病之一。近年流行态势十分复杂,本文就CSF的流行情况、病原致病特征及综合防治技术研究等方面进行全面概述,并为猪瘟的防制提出具体实施方案。 展开更多

关键词 猪瘟 猪瘟病毒 流行情况 防制

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猪瘟的持续性感染的根源在于带毒母猪 被引量：32

8

作者 丘惠深 《养猪》 2004年第3期29-30,共2页

关键词 猪瘟 感染 母猪 传染病 死亡率 病毒

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用RT-PCR方法检测猪瘟细胞苗中污染牛病毒性腹泻病毒 被引量：33

9

作者 范学政 宁宜宝 +2 位作者 王琴 徐璐 沈青春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第1期8-10,共3页

参考GenBank中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和猪瘟兔化弱毒病毒（HCLV）序列，设计和建立了一种PCR检测方法，通过试验证明，所建方法能够对HCLV和BVDV进行鉴别诊断；用此方法对23个批次的猪瘟细胞苗进行检测，发现有5批疫苗污染BVDV，均为... 参考GenBank中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和猪瘟兔化弱毒病毒（HCLV）序列，设计和建立了一种PCR检测方法，通过试验证明，所建方法能够对HCLV和BVDV进行鉴别诊断；用此方法对23个批次的猪瘟细胞苗进行检测，发现有5批疫苗污染BVDV，均为BVDVI型，污染率为21．74％。测定序列与BVDVOregonC24V株（AF091605）的核苷酸相似性为83．2％～83．5％，与NADL株（M31182）的核苷酸相似性为86．4％～86．7％。 展开更多

关键词 BVDV CSFV RT-PCR方法 鉴别

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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用 被引量：22

10

作者 赵耘 秦玉明 +4 位作者 张广川 赵启祖 宁宜宝 戴志红 谢磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期3-6,共4页

猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其... 猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其敏感性可达到CSFV 10 TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50 CSFV 10TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50。同时具有较好的特异性,对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株及PRRSV B13株6个毒株均能扩增出相应的片段,而BVDV、BDV均未扩增出相应的片段。本方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒 多重PCR

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国外猪瘟病毒实验室诊断、流行病学以及标记疫苗研究进展 被引量：13

11

作者 赵耘 秦玉明 张广川 《中国兽药杂志》 2004年第7期16-20,24,共6页

常用于检测猪瘟病毒的实验室诊断方法是免疫组化和病毒分离培养。随着分子生物学的发展 ,先后建立了一系列检测病毒蛋白的ELISA方法以及病毒基因组的RT PCR方法。标记疫苗是目前猪瘟疫苗发展的趋势。目前已经完成E2亚单位标记疫苗及重... 常用于检测猪瘟病毒的实验室诊断方法是免疫组化和病毒分离培养。随着分子生物学的发展 ,先后建立了一系列检测病毒蛋白的ELISA方法以及病毒基因组的RT PCR方法。标记疫苗是目前猪瘟疫苗发展的趋势。目前已经完成E2亚单位标记疫苗及重组活疫苗效率的测定 ,均能显著减少疫苗免疫猪群中猪瘟病毒的水平及垂直传播 ,同时通过血清学方法能区分疫苗免疫猪与自然感染猪。 展开更多

关键词 外国 猪瘟病毒 实验室诊断 流行病学 标记疫苗

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猪瘟病毒E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立 被引量：9

12

作者 陈振海 王琴 +4 位作者 范学政 宁宜宝 王在时 沈青春 夏春 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期135-139,共5页

表达猪瘟病毒保护性抗原E0蛋白用以建立猪瘟抗体诊断方法,在标记疫苗(Marker vaccine)的研制和应用上具有重要的血清学鉴别功能,对于监测猪瘟病毒的流行情况和疫苗免疫情况及制定免疫程序具有重要作用。将猪瘟兔化弱毒株(HCLV)E0 基因... 表达猪瘟病毒保护性抗原E0蛋白用以建立猪瘟抗体诊断方法,在标记疫苗(Marker vaccine)的研制和应用上具有重要的血清学鉴别功能,对于监测猪瘟病毒的流行情况和疫苗免疫情况及制定免疫程序具有重要作用。将猪瘟兔化弱毒株(HCLV)E0 基因分别插入原核表达质粒pGEX4T, pET30, pMAL p2X 中,并分别以BL21 和BL21 codonplus(DE3) RP, BL21(DE3)和BL21 codonplus(DE3) RP,TB1 和BL21 codonplus(DE3) RP为表达菌株。通过摸索IPTG诱导浓度,诱导温度,菌体收获时间,确定E0 基因能在pGEX4T/ BL21 codonplus(DE3) RP和pMAL p2X/ BL21 codonplus(DE3) RP中获得高效表达,表达产量分别占菌体总蛋白的15%和30%,表达的重组蛋白主要为包涵体形式。分别采用B per试剂和超声波裂解配以曲通尿素对包涵体进行洗涤两种方法在pGEX表达系中取得了较好的效果。使用分步透析法对变性的包涵体进行复性,将复性蛋白过GST亲和层析柱得到纯化的GST E0融合蛋白。以GST E0融合蛋白为诊断抗原,通过摸索抗原包被浓度,抗体血清稀释倍数初步建立了用间接ELISA检测猪瘟血清E0抗体的方法,为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 EO基因 原核表达 包涵体 间接ELISA

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9株猪瘟分离毒株的致病特性 被引量：7

13

作者 王琴 宁宜宝 +11 位作者 赵耘 王在时 张广川 范学政 宋立 秦玉明 沈青春 丘惠深 余兴龙 吕宗吉 徐兴然 涂长春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期145-149,共5页

采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试... 采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试验猪进行同居感染.如此进行,GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传至3代.结果显示:上述分离株传至3～5代过程中均表现出毒力增强的趋势,从3～5代传代到8(7)代的过程中毒力进一步增强并保持稳定,且均超过了标准石门强毒株的发病特点.所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,解剖后均表现出不同程度的病理变化,死后或解剖后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象进一步证实了猪是猪瘟病毒的敏感动物,各毒株之间毒力没有明显差异.对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1～F8代中的F6代有2个核苷酸的差异,引起1个相应氨基酸的变异,其余毒株的不同代次没有碱基发生变异,初步说明猪瘟病毒基因型表现相对的稳定性. 展开更多

关键词 猪瘟病毒 毒力 致病特性

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猪瘟病毒石门株E2基因4个抗原结构域的原核表达 被引量：8

14

作者 徐璐 范学政 +3 位作者 王琴 蒋春燕 宁宜宝 王泰健 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期814-818,共5页

目的对猪瘟病毒石门株E2基因进行原核表达,以期获得可溶性表达产物,为检测猪瘟抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。方法用PCR技术扩增了重组S21质粒载体上的猪瘟病毒石门株E2基因的4个主要抗原结构域ABCD,A1A2,B和C。分别将4个片段克隆于... 目的对猪瘟病毒石门株E2基因进行原核表达,以期获得可溶性表达产物,为检测猪瘟抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。方法用PCR技术扩增了重组S21质粒载体上的猪瘟病毒石门株E2基因的4个主要抗原结构域ABCD,A1A2,B和C。分别将4个片段克隆于pMAL-p2X载体中,经PCR、双酶切和测序鉴定,E2基因的4个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确。将4个片段分别转化到表达菌TB1、BL21、BL21-CodonPlus(DE3)-RP和BL21(DE3)中,共得到16株重组表达菌,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析。结果E2基因的4个主要抗原结构域均可在这4种表达菌中表达,但以BL21-CodonPlus(DE3)-RP的表达效果最好,可表达出可溶性并且产量较高的目的蛋白。免疫印迹结果表明,表达的目的蛋白可以被猪瘟阳性血清和针对E2蛋白的单克隆抗体所识别。结论只表达目的基因的抗原结构域,可以缩短表达片段的长度,有利于获得可溶性目的蛋白,并且具有良好的血清学反应的特异性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 抗原结构域原核表达

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中国猪瘟风险评估框架的构建 被引量：7

15

作者 姚文生 范学政 +1 位作者 王琴 宁宜宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期794-799,共6页

为量化评估我国发生猪瘟的风险,本研究通过分析影响猪瘟发生的风险因素,确定7个风险因素12个子风险因素。遵循指标选择原则,将风险因素按照传染源、传播途径、易感动物3个风险来源归纳为9个风险评估指标,并采取层次分析法、模糊综合评... 为量化评估我国发生猪瘟的风险,本研究通过分析影响猪瘟发生的风险因素,确定7个风险因素12个子风险因素。遵循指标选择原则,将风险因素按照传染源、传播途径、易感动物3个风险来源归纳为9个风险评估指标,并采取层次分析法、模糊综合评价法和多指标综合评价法,探索构建由评估指标体系、指标权重、评价标准、综合评价函数组成的猪瘟风险评估框架。以西南某地区和华中某地区为例对该框架进行初步验证,风险评估结果为2008年西南某地区和华中某地区均为猪瘟发生高风险地区,风险概率分别为0.91996和0.69332。经与两地区2008年发生猪瘟疫情情况进行比较,表明该框架具有一定的可操作性,评估结果与疫情发生情况具有一定的相关性。 展开更多

关键词 猪瘟 风险因素 指标体系 定量风险评估 风险评估框架

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我国猪瘟流行现状及净化之路 被引量：1

16

作者 邹兴启 李芳韬 刘业兵 《中国猪业》 2024年第1期47-52,共6页

猪瘟(Classical swine fever,CSF)在全球多个地区仍在流行,对养猪业带来巨大打击和经济损失。当前我国猪瘟防控程度较好,疫情态势平稳,偶有散发,但猪瘟的存在不利于健康养殖,影响猪肉市场及品质,因此有必要开展猪瘟净化工作。随着养猪... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)在全球多个地区仍在流行,对养猪业带来巨大打击和经济损失。当前我国猪瘟防控程度较好,疫情态势平稳,偶有散发,但猪瘟的存在不利于健康养殖,影响猪肉市场及品质,因此有必要开展猪瘟净化工作。随着养猪产业不断升级,小散户逐渐退出市场,猪瘟监测技术成熟完善以及政府大力推动动物疫病净化,开展猪瘟净化时机日趋成熟,但猪瘟净化面临着非典型猪瘟、混合感染、免疫失败、动物移动等问题和挑战。本文将从我国猪瘟流行态势与防控现状,猪瘟净化的必要性与策略、面临的问题与挑战以及借鉴欧美猪瘟净化经验,采取猪瘟净化措施手段等方面进行阐述,以期为我国猪瘟净化提供理论帮助。 展开更多

关键词 猪瘟 流行现状 防控 净化

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猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救

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作者 刘元杰 徐璐 +9 位作者 朱元源 徐嫄 张乾义 李翠 李明 夏应菊 王琴 刘业兵 赵启祖 邹兴启 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期698-705,共8页

本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细... 本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 C株 WH303位点 突变 感染性克隆

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mRNA技术及其在动物疫病研究中的应用进展 被引量：1

18

作者 王明伟 夏应菊 +2 位作者 陈紫昱 李佳昕 刘业兵 《中国兽药杂志》 2023年第11期62-71,共10页

mRNA技术是一种将人工合成的mRNA分子引入细胞内,并利用细胞自身的翻译机制将其翻译成蛋白质的技术。作为一种新兴的生物技术,mRNA技术已经在疫苗研究、基因治疗等多个领域取得了重要进展,并在新冠预防和传染病防治方面进行了临床应用,... mRNA技术是一种将人工合成的mRNA分子引入细胞内,并利用细胞自身的翻译机制将其翻译成蛋白质的技术。作为一种新兴的生物技术,mRNA技术已经在疫苗研究、基因治疗等多个领域取得了重要进展,并在新冠预防和传染病防治方面进行了临床应用,展现出了广阔的应用前景。通过对mRNA技术的发展历程,mRNA疫苗的设计、递送及特点,以及其在动物疫病研究的进展予以综述,分析其存在的问题,展望今后的发展方向,为相关研究提供参考。 展开更多

关键词 mRNA技术 疫苗研究 动物疫病

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猪瘟病毒FJFQ-39株的毒力鉴定 被引量：4

19

作者 戴志红 赵耘 +5 位作者 宁宜宝 秦玉明 谢磊 张广川 王在时 张仲秋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期694-698,726,共6页

为探索一种相对客观、稳定的方法鉴定猪瘟病毒(CSFV)FJFQ-39株的毒力。本研究采用2×103TCID50的FJFQ-39株分别肌肉接种6头敏感猪,通过RT-nPCR检测扁桃体和血液监测动物感染情况,对动物临床症状和病理变化进行系统评分,结合体温分析... 为探索一种相对客观、稳定的方法鉴定猪瘟病毒(CSFV)FJFQ-39株的毒力。本研究采用2×103TCID50的FJFQ-39株分别肌肉接种6头敏感猪,通过RT-nPCR检测扁桃体和血液监测动物感染情况,对动物临床症状和病理变化进行系统评分,结合体温分析,判定病毒毒力。同时用相同剂量的石门株接种4头敏感猪作对照。FJFQ-39和石门接种猪的扁桃体和血液均检测到CSFV核酸;FJFQ-39接种猪的最大临床症状评分(CS)平均值为3.53.5±1.0、病理评分(PS)平均值为3.3±0.9(低于5),平均最高体温为39.3±0.2℃(低于40℃);石门接种猪的最大CS平均值为25.5±2.1、PS平均值为29.5±2.4(大于15),平均最高体温为41.8±0.2℃(高于41.0℃)。实验结果表明:猪瘟病毒FJFQ-39株和石门株均成功感染了动物;评分系统结合体温测定评价CSFV毒力是可行的;FJFQ-39属于低毒力株,而石门属于强毒株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 毒力 临床症状评分 病理评分 体温

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ASFV、PRV和PCV2多重荧光定量PCR检测方法的建立和应用

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作者 李玲 邹宏 +7 位作者 徐璐 宋新宇 朱明哲 王程 王震 刘业兵 马小军 夏应菊 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期807-813,共7页

非洲猪瘟病毒(ASFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)是危害养猪业的3种重要病毒,但目前国内外尚无可同时检测这3种病原的方法。为建立一种可同时检测上述3种病原的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的gE基因及PCV2的rep基因为... 非洲猪瘟病毒(ASFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)是危害养猪业的3种重要病毒,但目前国内外尚无可同时检测这3种病原的方法。为建立一种可同时检测上述3种病原的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的gE基因及PCV2的rep基因为靶基因,采用Prime 3 web软件分别设计特异性引物和探针。采用相应引物分别构建上述3种靶基因的重组质粒,经测序鉴定后分别作为质粒标准品,并均稀释到1×105拷贝/μL后按照体积比1∶1∶1混匀后作为模板,采用方阵法对引物、探针、酶和各反应条件等的优化,初步建立ASFV、PRV和PCV2多重荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法标准曲线Ct值与相应质粒标准品浓度均存在良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.99。利用该方法同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病原,结果显示,本实验建立的该方法仅特异性扩增ASFV、PRV和PCV2,与其他病原均无交叉反应,特异性强;分别利用该方法与已公布的中华人民共和国农业农村部公告第172号中ASFV荧光定量PCR检测方法、PCV2荧光定量PCR方法(GB/T 35901-2018)、PRV荧光定量PCR检测方法(GB/T 35911-2018)对10倍倍比稀释(1.0×10^(4)拷贝/μL~1.0×10_(0)拷贝/μL)后的pUC57-ASFV-B646L、pUC57-PRV-gE、pGEMT-PCV2-rep质粒标准品1∶1∶1的混合物检测,结果显示该方法对3种质粒标准品的最低检测限均为10拷贝/μL,相同或略高于上述各病原的单一qPCR检测结果,表明本实验建立的该方法敏感性较高;选取3个稀释度的质粒标准品分别按1∶1∶1比例混合后进行组内和组间重复性试验,结果显示组内组间变异系数均小于3%,重复性好。利用本实验建立的方法和上述3种病原标准检测方法对114份临床样品检测,结果显示,本实验建立的方法对ASFV、PRV� 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 伪狂犬病毒 多重荧光定量PCR

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