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题名穿孔素适配体的筛选及电化学传感器的制备
被引量：2
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作者
孟凡飞
刘畅
蒋栋能
张立群
蒲晓允
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机构
中国人民解放军陆军军医大学新桥医院检验科
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出处
《检验医学与临床》
CAS
2017年第22期3341-3343,共3页
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文摘
目的研发能特异性结合穿孔素的DNA适配体并构建适配体电化学传感器,为发展穿孔素的新型检测技术提供基础。方法体外合成全长为81个碱基并含有35个随机寡核苷酸的单链DNA文库,库容量大约为1×1010,以穿孔素蛋白为靶标,利用指数富集配体系统进化技术(SELEX),从单链DNA文库中筛选能够结合穿孔素蛋白的DNA适配体;采用M-fold程序(version 3.2)预测二级结构;设计并构建适配体电化学传感器,进行穿孔素电化学特异性检测,绘制标准曲线。结果经多轮筛选,获得6条穿孔素蛋白的DNA适配体,分别为序列SEQ1~SEQ6,适配体SEQ6能够特异性结合穿孔素,并可通过电化学方法用于检测穿孔素,而其与牛血清清蛋白、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α结合较弱。该电化学传感器检测穿孔素的线性水平范围为1~20nmol,检出限为0.7nmol。结论成功利用SELEX筛选获得特异结合穿孔素的DNA适配体,其在研发针对穿孔素的新型检测技术方面具有应用潜能。
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关键词
穿孔素
适配体
指数富集配体系统进化技术
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Keywords
perforin
aptamers
SELEX
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分类号
R123.1
[医药卫生—环境卫生学]
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