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EEA1慢病毒表达载体的构建及其对查菲埃立克体感染细胞的影响
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作者 程琰 毛旭虎 +5 位作者 宋阳 贺政新 陈晶 曾倩 高杰英 王缚鲲 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第15期1793-1797,1801,共6页
目的 利用分子生物学方法构建早期内吞体相关蛋白1(EEA1)慢病毒载体,并感染犬的巨噬细胞DH82,建立稳定表达EEA1的DH82细胞系。方法 将聚合酶链反应(PCR)扩增得到的EEA1和慢病毒载体GV287双酶切后连接,构建慢病毒表达载体GV287-EEA1,经... 目的 利用分子生物学方法构建早期内吞体相关蛋白1(EEA1)慢病毒载体,并感染犬的巨噬细胞DH82,建立稳定表达EEA1的DH82细胞系。方法 将聚合酶链反应(PCR)扩增得到的EEA1和慢病毒载体GV287双酶切后连接,构建慢病毒表达载体GV287-EEA1,经酶切、测序鉴定重组质粒。将重组载体与包装系统pHelper1.0、pHelper2.0质粒共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。将构建好的慢病毒表达载体感染DH82细胞,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Westernblot检测DH82细胞中EEA1的过表达情况。进一步利用查菲埃立克体感染稳定表达EEA1的DH82细胞。结果 GV287-EEA1经双酶切分析和测序,证实插入序列正确,成功构建慢病毒表达质粒,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为1×10^9TU/mL;病毒液有效感染DH82细胞,依据GFP绿色荧光可检测感染率达80%以上;qPCR和Westernblot的结果证实EEA1在mRNA和蛋白水平都成功过表达。用查菲埃立克体感染稳定表达EEA1的DH82细胞36h后,细胞感染率降低,查菲埃立克体在细胞内的增殖被抑制。结论 成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带EEA1基因的慢病毒载体GV287-EEA1,建立稳定高表达EEA1的犬巨噬细胞系DH82-EEA1,EEA1过表达后,查菲埃立克体的繁殖受到抑制。 展开更多
关键词 查菲埃立克体 早期内吞体相关蛋白1 慢病毒载体
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RDW、MPV与NLR在评价系统性红斑狼疮活动度中的价值 被引量：6
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作者 张立娜 安黎云 +3 位作者 郭奕阳 王缚鲲 李芳 贺政新 《中国实验诊断学》 2022年第5期633-637,共5页
目的 探讨红细胞分布宽度(RDW),血小板平均体积(MPV)和中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法 回顾性分析66例SLE患者与75名健康体检者的相关临床数据,依据SLEDAL-2000准则评判SLE患者的疾病活动情况将患... 目的 探讨红细胞分布宽度(RDW),血小板平均体积(MPV)和中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法 回顾性分析66例SLE患者与75名健康体检者的相关临床数据,依据SLEDAL-2000准则评判SLE患者的疾病活动情况将患者分为活动组和缓解组。比较活动组、缓解组、健康组的白细胞(WBC)、血小板(PLT)、中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、血红蛋白(HBG)、RDW、MPV、NLR、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、补体(C)的差异。Spearman相关性分析SLE患者RDW、MPV、NLR与其他指标的相关性,用ROC曲线比较各指标的诊断性能。结果 SLE组患者N、RDW和NLR均显著高于正常对照组,PLT、L和HGB显著低于正常对照组。与缓解期组相比,活动期SLE患者RDW和CRP显著升高;与对照组相比,SLE活动期组和缓解期组患者RDW和NLR显著升高,而MPV在各组间无明显差异。相关性分析显示,RDW与SLEDAI评分呈正相关,NLR与CRP呈正相关,MPV与C4呈负相关。ROC曲线分析显示RDW是评估SLE活动度有价值的指标,AUC为0.79,当cutoff值为47.5时,敏感度为78.95%,特异性为70.21%。结论 RDW与NLR在SLE患者中均有明显变化,RDW是可用于评价SLE疾病活动度的有用指标。 展开更多
关键词 红细胞分布宽度 血小板平均体积 中性粒细胞淋巴细胞比值 系统性红斑狼疮 活动度
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