高危型HPV在宫颈癌发生中的作用 被引量：5

1

作者 刘水平 蒋海鹰 +2 位作者 郑晖 颜亚晖 冯德云 《实用预防医学》 CAS 2005年第5期1023-1024,共2页

本文利用PCR技术检测了44例宫颈癌患者和15例慢性宫颈炎患者病变组织中高危型HPV(16,18,31,33)的感染率,发现44例宫颈癌患者高危型HPV的阳性率高达91%(40/44),其中HPV16型感染率54.55%(24/44),HPV18型感染率18.2%(8/44),HPV31型感染率13... 本文利用PCR技术检测了44例宫颈癌患者和15例慢性宫颈炎患者病变组织中高危型HPV(16,18,31,33)的感染率,发现44例宫颈癌患者高危型HPV的阳性率高达91%(40/44),其中HPV16型感染率54.55%(24/44),HPV18型感染率18.2%(8/44),HPV31型感染率13.6%(6/44),HPV33型感染率4.55%(2/44);15例慢性宫颈炎患者有2例感染HPV16型。结果提示HPV16型是宫颈癌发生最常见的基因型,其次为HPV18型和HPV31型,故对育龄妇女定期进行高危型HPV感染的普查,在早期预防宫颈癌的发生具有十分重要的意义;联合采用分子生物学和宫颈脱落细胞学技术进行即定期普查,既能提高阳性率,又能对感染高危型HPV的慢性宫颈炎患者进行早期的有效预防。 展开更多

关键词 宫颈癌 人类乳头状瘤病毒 多聚酶链式反应

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5′和3′末端快速扩增法克隆多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2 被引量：3

2

作者 石奕武 罗赛群 胡维新 《解剖学研究》 CAS 2006年第1期8-11,共4页

目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与N... 目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与NCBI核酸数据库进行比对。结果该序列全长cDNA长度为1913bp,登陆号为AY430097,与来源于人睾丸cDNA文库的序列DAZAP2同源性高达99%以上。该序列具有较短的5′非翻译区及长的3′非翻译区,开放阅读框序列从第84位碱基至590位碱基,具有poly(A)尾。结论利用RACE法,从骨髓单个核细胞中成功克隆了DAZAP2全长cDNA。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 末端快速扩增法 骨髓单个核细胞 无精征缺失基因

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大鼠脑组织中高质量RNA的提取 被引量：4

3

作者 刘水平 罗志勇 文斌 《实用预防医学》 CAS 2005年第3期511-512,共2页

目的为探讨Trizol试剂提取大鼠脑组织高质量RNA的最适取样量范围。方法在1mLTrizol试剂中分别加入100,50,25,12.5mg大鼠脑组织,提取其总RNA。结果每毫升Trizol中加入组织12.5mg时,提取的RNA完整性最好,纯度亦高。结论从大鼠脑组织中提... 目的为探讨Trizol试剂提取大鼠脑组织高质量RNA的最适取样量范围。方法在1mLTrizol试剂中分别加入100,50,25,12.5mg大鼠脑组织,提取其总RNA。结果每毫升Trizol中加入组织12.5mg时,提取的RNA完整性最好,纯度亦高。结论从大鼠脑组织中提取到高质量RNA,每毫升Trizol中加入脑组织最适取样量范围为10～20mg。 展开更多

关键词 人鼠脑组织 RNA 提取 TRIZOL 方法学

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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化 被引量：1

4

作者 石奕武 陈琼华 +1 位作者 罗赛群 胡维新 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2005年第5期376-378,共3页

目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大... 目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大肠杆菌,阳性菌株经1 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,再经过纯化和透析.结果IPTG诱导4 hr时,得到大量重组目的蛋白,占可溶蛋白的20%左右,经过Ni-NTA层析柱纯化,获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0.97 mg/ml.结论DAZAP2蛋白获得高效表达,并且建立快速简便的纯化方法,目的蛋白可以用于下一步的实验. 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 DAZAP2蛋白 高效表达 纯化

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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2的真核表达及定位

5

作者 石奕武 陈盛强 胡维新 《现代临床医学生物工程学杂志》 2006年第3期284-287,共4页

目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α... 目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实。脂质体法转染COS7细胞后,运用Western印迹及免疫定位技术检测表达产物。结果测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达。结论成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上。 展开更多

关键词 DAZAP2基因 真核表达 定位

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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2表达载体的构建

6

作者 石奕武 胡维新 《实用医学杂志》 CAS 2006年第23期2711-2712,共2页

目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体。方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析。结果:获得... 目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体。方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析。结果:获得阳性重组质粒,读框没有发生改变。结论:成功获得DAZAP2的原核表达重组质粒,可以用于下一步实验。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 原核表达载体 重组

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琼脂糖凝胶电泳实验技巧 被引量：19

7

作者 刘水平 罗志勇 《实用预防医学》 CAS 2006年第4期1068-1069,共2页

琼脂糖凝胶电泳是核酸分析常用的实验技术。虽然很多参考书上均有该方法的介绍[1,2],但实际操作中的一些技巧是无法从书本上获得的,本文介绍了琼脂糖凝胶电泳的实验技巧,这些经验源自多年的研究生教学实践,对初涉分子生物学实验者有一... 琼脂糖凝胶电泳是核酸分析常用的实验技术。虽然很多参考书上均有该方法的介绍[1,2],但实际操作中的一些技巧是无法从书本上获得的,本文介绍了琼脂糖凝胶电泳的实验技巧,这些经验源自多年的研究生教学实践,对初涉分子生物学实验者有一定的指导意义。 展开更多

关键词 琼脂糖凝胶 电泳 技巧

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RAPD条件优化及天麻基因组DNA多态性分析 被引量：10

8

作者 陶钧 罗志勇 +3 位作者 刘水平 文李 陶垚 胡维新 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第2期150-155,共6页

建立了RAPD扩增条件快速优化程序与方法,并应用于天麻基因组DNA扩增条件的优化及多态性的测定;获得了天麻基因组DNA的RAPD扩增优化条件和DNA指纹图谱;分析了模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等的浓度和退火温度对RAPD扩增的影响.结果... 建立了RAPD扩增条件快速优化程序与方法,并应用于天麻基因组DNA扩增条件的优化及多态性的测定;获得了天麻基因组DNA的RAPD扩增优化条件和DNA指纹图谱;分析了模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等的浓度和退火温度对RAPD扩增的影响.结果表明:天麻基因组DNA用引物S1扩增的片段具有更明显的多态性,这种指纹图谱更适合于天麻遗传分化研究;而用引物S12扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,这种指纹图谱更适合于天麻真伪鉴别.该方法使RAPD扩增条件优化过程实现了程序化和数量化,是获得RAPD优化条件的简便快速、经济实用方法.应用该方法进行RAPD扩增,可获得图谱清晰、稳定可靠的实验结果. 展开更多

关键词 RAPD 优化 天麻 DNA指纹图谱 DNA多态性

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人参皂苷生物合成相关新基因GBR6的cDNA克隆及序列分析 被引量：3

9

作者 刘水平 罗志勇 +4 位作者 陈湘晖 文斌 汪凌昊 魏来 胡维新 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第4期351-354,共4页

从人参根组织中分离总RNA,使用RT-PCR扩增出人参皂苷生物合成相关基因GBR6开放阅读框(ORF)cDNA片断,并将其定向克隆入原核高效表达载体pQE30,阳性克隆经BamHⅠ和PstⅠ双酶切鉴定、测序验证与已知的GBR6ORF序列完全一致.因而成功构建了pQ... 从人参根组织中分离总RNA,使用RT-PCR扩增出人参皂苷生物合成相关基因GBR6开放阅读框(ORF)cDNA片断,并将其定向克隆入原核高效表达载体pQE30,阳性克隆经BamHⅠ和PstⅠ双酶切鉴定、测序验证与已知的GBR6ORF序列完全一致.因而成功构建了pQE30-GBR6ORF融合原核表达载体,为下一步进行GBR6功能表达分析奠定了基础. 展开更多

关键词 人参皂苷生物合成 GBR6基因 CDNA克隆 序列分析

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皱边石杉基因组总DNA保存期间的质量检测分析 被引量：2

10

作者 禹利君 史云峰 +2 位作者 范铁芳 刘仲华 胡维新 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期635-637,共3页

目的:用CTAB法提取皱边石杉叶片的基因组总DNA,对DNA储存于4℃的TE缓冲溶液与65℃水浴促溶2种实验处理进行为期30d的稳定性对比实验。方法:对比分析保存于4℃的TE缓冲溶液中与65℃进行2～3次水浴促进DNA溶解释放处理的DNA的稳定性及完... 目的:用CTAB法提取皱边石杉叶片的基因组总DNA,对DNA储存于4℃的TE缓冲溶液与65℃水浴促溶2种实验处理进行为期30d的稳定性对比实验。方法:对比分析保存于4℃的TE缓冲溶液中与65℃进行2～3次水浴促进DNA溶解释放处理的DNA的稳定性及完整性变化。结果:保存于4℃TE缓冲溶液中的DNA样品非常稳定;65℃水浴促进了DNA从包裹的多糖中溶解释放,但2～3次水浴使大片段的DNA降解。结论:DNA保存在TE缓冲溶液中非常稳定;65℃水浴尽管可提高DNA的提取量,但会使DNA发生降解。因此,一般情况下对DNA不要进行水浴促溶。 展开更多

关键词 皱边石杉 改良CTAB法 基因组总DNA 稳定性

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多媒体教学与实验评估相结合的教学体系研究与实践 被引量：1

11

作者 曾赵军 胡维新 《实用预防医学》 CAS 2005年第6期1472-1473,共2页

通过在医学分子生物学教学中采用多媒体理论教学与实验评估相结合的教学实践,对比传统教学,多媒体教学与实验评估相结合的教学体系更有利于促进多媒体教学的成熟和完善,提高现代化教学手段的质量,使枯燥抽象的分子生物学知识变得形象生... 通过在医学分子生物学教学中采用多媒体理论教学与实验评估相结合的教学实践,对比传统教学,多媒体教学与实验评估相结合的教学体系更有利于促进多媒体教学的成熟和完善,提高现代化教学手段的质量,使枯燥抽象的分子生物学知识变得形象生动,提高医学生学习的效率和积极性。 展开更多

关键词 多媒体教学 医学教学 分子生物学

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Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究 被引量：1

12

作者 曾赵军 胡维新 +1 位作者 罗赛群 易伟峰 《实用肿瘤杂志》 CAS 2006年第4期330-333,共4页

目的探讨T et调控下的自杀基因H SV tk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pR evTRE/H SV tk,通过磷酸钙共沉淀法,分别将pR evTRE/H SV tk和pR evT et-O n导入乳腺癌细胞株M CF-7。以RT-PCR法检测不同D o... 目的探讨T et调控下的自杀基因H SV tk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pR evTRE/H SV tk,通过磷酸钙共沉淀法,分别将pR evTRE/H SV tk和pR evT et-O n导入乳腺癌细胞株M CF-7。以RT-PCR法检测不同D ox浓度下转染乳腺癌细胞中H SV tk基因的表达,M TT法检测细胞生长抑制率,通过检测混合细胞生长克隆来评价T et调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素(D oxcycline,D ox)诱导、表达H SV tk基因的乳腺癌细胞株M CF/TRE/tk/T et-O n。当G anc iclov ir(GCV)及D ox浓度增加时,细胞存活率下降。M CF/TRE/tk/T et-O n在总细胞中的比例>10%时,有明显的旁观者效应。结论在T et-O n调控下,导入乳腺癌细胞中的H SV tk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质,并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/治疗 基因治疗 基因表达调控 逆转录病毒科 旁观者效应 肿瘤细胞 培养的

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人乳腺癌裸鼠移植瘤的体外抗生素诱导基因治疗

13

作者 曾赵军 胡维新 +1 位作者 李子博 罗赛群 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期480-482,共3页

目的探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性。方法构建人乳腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,制备有感染活性的重组逆转录病毒RevTRE/HSVtk与RevTet-On。观察体外强力霉素(Dox)诱导,丙氧鸟苷(GCV)和逆转录病毒作用后... 目的探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性。方法构建人乳腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,制备有感染活性的重组逆转录病毒RevTRE/HSVtk与RevTet-On。观察体外强力霉素(Dox)诱导,丙氧鸟苷(GCV)和逆转录病毒作用后移植瘤生长的变化及组织病理改变,分析其对乳腺癌裸鼠移植瘤的调控性治疗作用。结果乳腺癌裸鼠治疗后,肿瘤体积明显减小,生长受抑,生存周期延长,组间比较有显著性差异(P<0.05)。瘤体HE染色显示治疗组肿瘤局部有炎性细胞浸润和强嗜酸性细胞。RT-PCR结果显示Dox诱导后瘤体组织HSVtk表达较明显。结论通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞。 展开更多

关键词 乳腺癌 基因治疗 裸鼠 逆转录病毒 基因调控

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