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丹参酮ⅡA对大鼠血管平滑肌细胞的增殖作用 被引量：13
1
作者 李新荣 李艳平 +1 位作者 邓湘蕾 王兰 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第31期55-57,F0003,共4页
目的:观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,分析该作用与丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系。方法:实验于2004-01/2005-06在东南大学医学院发育与疾病相关基因实验室完成。①取大鼠胸主动脉,用组织贴壁法原代培... 目的:观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,分析该作用与丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系。方法:实验于2004-01/2005-06在东南大学医学院发育与疾病相关基因实验室完成。①取大鼠胸主动脉,用组织贴壁法原代培养大鼠血管平滑肌细胞并传代,实验使用第4～8代细胞。②按实验分组干预细胞,正常对照组,培养液含5mmol/L葡萄糖;高糖组,培养液含30mmol/L葡萄糖;高糖对照组,培养液含30mmol/L葡萄糖+10g/L二甲亚砜;丹参酮ⅡA组,培养液含30mmol/L葡萄糖+0.5mg/L丹参酮ⅡA;U0126组,培养液含30mmol/L葡萄糖+25μmol/LU0126。③用二步法测定0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mg/L丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞的毒性。④BrdU掺入DNA的ELISA法测定细胞内DNA合成水平。⑤同位素示踪法测定丝裂原活化蛋白激酶活性。结果:①高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞呈现快速增殖状态。②当丹参酮ⅡA剂量大于1.0mg/L时,有一定的细胞毒性。四甲基噻唑蓝法测定结果表明1.0,2.0,5.0,10.0mg/L丹参酮ⅡA组血管平滑肌细胞线粒体脱氢酶活性明显低于正常对照组(分别为0.654±0.023,0.580±0.032,0.465±0.041,0.376±0.053,0.840±0.085,P<0.01),表明此浓度可造成细胞功能障碍,有明显的细胞毒性。③随着丹参酮ⅡA作用浓度的增加,细胞内BrdU掺入DNA的量逐渐下降,0.03125mg/L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有显著性意义(分别为0.958±0.086,1.059±0.047,P<0.05),0.0625,0.125,0.25,0.5mg/L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有非常显著性意义(分别为0.865±0.058,0.781±0.099,0.738±0.071,0.616±0.028,1.059±0.047,P<0.01)。④高糖组血管平滑肌细胞内丝裂原活化蛋白激酶的活性相对于正常对照组显著升高[分别为(1048.59±94.78),(395.82±43.53)μkat/g,P<0.01],丹参酮ⅡA组和U0126组丝裂原活化蛋白激酶活性低于高糖组[分别为(450.55±50.47),(417.30±62.96),(1048.59±94.78)μkat 展开更多
关键词 丹参酮 血管平滑肌细胞 丝裂原激活蛋白激酶类
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叶酸代谢相关基因多态性及血浆同型半胱氨酸与唐氏综合征关系研究 被引量：8
2
作者 王文 谢维 王秀英 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期533-537,共5页
目的研究叶酸代谢相关的亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTH-FR）基因多态性与唐氏综合征（Downsyndrome，DS）发生的关系。方法选择100例生育过DS患儿的汉族母亲及100名相匹配的正常对照组母亲，PCR-限... 目的研究叶酸代谢相关的亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTH-FR）基因多态性与唐氏综合征（Downsyndrome，DS）发生的关系。方法选择100例生育过DS患儿的汉族母亲及100名相匹配的正常对照组母亲，PCR-限制性片段长度多态性方法检测MTHFR 677C／T的基因型，化学发光法检测血浆中同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）的水平。结果病例组MTHFR 677 T等位基因的频率较对照组增高，差异有统计学意义（P=0．002）；杂合基因型CT的比值比为2．12（95％CI：1．14—3．94）；而纯合基因型TT的比值比为3．43（95％CI：1．41—8．36）。平均血浆HCY浓度在病例组[（9．04±3．85）pmol／L]较对照组[（6．53±2．06）pmol／L]增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。MTHFR 677位点一个和（或）两个等位基因C→T的变异，不论在病例组还是对照组均可引起HCY水平的显著增加（P〈0．01）。同为MTHFR6T／CC基因型，病例组中的血浆HCY浓度仍较对照组增高（P〈0．01），这种增加不依赖于MTHFR的基因型。结论血浆HCY和叶酸代谢相关基因的遗传多态性是汉族妇女生育DS患儿的危险因素。 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶基因 唐氏综合征 同型半胱氨酸 遗传多态性
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抗果蝇Dnop5蛋白抗体的制备及其特性鉴定 被引量：1
3
作者 袁榴娣 张燕 +1 位作者 万永奇 丁洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期654-656,共3页
目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定。方法:以RTPCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5His融合蛋白。用纯化的Dnop5His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化。采... 目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定。方法:以RTPCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5His融合蛋白。用纯化的Dnop5His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化。采用Westernblot法和免疫组化染色法鉴定该抗体的特异性及生物学活性。结果:表达的Dnop5His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Dnop5His融合蛋白,以纯化的Dnop5His免疫家兔制备的兔抗Dnop5的抗体,经Westernblot分析显示:该抗体可与果蝇的胚胎、幼虫、蛹及成虫组织中表达的Dnop5特异性结合。结论:获得具有良好特异性的兔抗dnop5抗体,为进一步研究Dnop5的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 果蝇 Nop/Sik家族 Dnop5基因 原核表达 抗体制备
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