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GPR37L1对奶牛乳腺上皮细胞乳成分合成相关基因表达的影响
1
作者 邢鹏飞 王晓雪 +4 位作者 王智慧 谢雅琳 杨洋 侯晓明 林叶 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期22-31,共10页
运用分子生物学技术构建GPR37L1表达和干扰载体,以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,通过瞬时转染技术构建载体转染乳腺上皮细胞,探究GPR37L1对乳成分合成相关基因表达的影响。结果表明,GPR37L1表达和干扰载体构建成功,GPR37L1过表达或干扰... 运用分子生物学技术构建GPR37L1表达和干扰载体,以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,通过瞬时转染技术构建载体转染乳腺上皮细胞,探究GPR37L1对乳成分合成相关基因表达的影响。结果表明,GPR37L1表达和干扰载体构建成功,GPR37L1过表达或干扰可提高或降低乳脂合成相关基因及β-酪蛋白表达,揭示GPR37L1可正向调节乳成分合成。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 GPR37L1 乳脂 Β-酪蛋白 载体构建
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mTOR信号通路介导短链脂肪酸调控PLIN3表达促进乳脂合成 被引量：3
2
作者 侯晓明 江怡 +2 位作者 刘灿 杨洋 张金友 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期39-45,共7页
围脂滴蛋白3(Perilipin 3,PLIN3)是围脂滴蛋白家族成员之一,已被证实与脂滴初生相关,主要负责甘油三酯(Triglyceride,TAG)向脂滴的掺入。奶牛乳腺是乳脂合成旺盛器官,PLIN3在泌乳乳腺中表达,但其是否参与乳腺中乳脂合成尚不明确。采用... 围脂滴蛋白3(Perilipin 3,PLIN3)是围脂滴蛋白家族成员之一,已被证实与脂滴初生相关,主要负责甘油三酯(Triglyceride,TAG)向脂滴的掺入。奶牛乳腺是乳脂合成旺盛器官,PLIN3在泌乳乳腺中表达,但其是否参与乳腺中乳脂合成尚不明确。采用基因过表达及Western blot等方法检测PLIN3对奶牛乳腺上皮细胞中TAG含量的影响,通过添加乳脂合成前体物以及抑制剂方法研究mTOR信号通路对PLIN3表达的调节。结果表明,PLIN3过表达极显著提高奶牛乳腺上皮细胞中TAG含量(P<0.01)。短链脂肪酸乙酸和β-羟基丁酸激活mTOR信号通路,提高细胞中PLIN3表达;采用雷帕霉素抑制mTOR信号通路激活则显著抑制短链脂肪酸对PLIN3表达的诱导作用(P<0.05)。该结果提示PLIN3表达与奶牛乳腺上皮细胞中乳脂合成相关,乙酸和β-羟基丁酸通过激活mTOR信号通路调节PLIN3表达,促进乳脂合成。 展开更多
关键词 奶牛 乳脂 PLIN3 MTOR
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奶牛SP1基因结构及对乳脂合成功能的初步分析 被引量：2
3
作者 杨洋 周子薇 +5 位作者 张京一 杨硕 王博宇 葛楠 林叶 侯晓明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2970-2981,共12页
旨在探讨中国荷斯坦奶牛的特异性蛋白1(specificity protein, SP1)基因结构特征及其对奶牛乳脂合成的影响。根据NCBI已经公布的奶牛SP1基因序列(NM_001078027.1),利用生物信息学分析其序列保守性、理化性质、蛋白亲水性、蛋白质结构及... 旨在探讨中国荷斯坦奶牛的特异性蛋白1(specificity protein, SP1)基因结构特征及其对奶牛乳脂合成的影响。根据NCBI已经公布的奶牛SP1基因序列(NM_001078027.1),利用生物信息学分析其序列保守性、理化性质、蛋白亲水性、蛋白质结构及互作蛋白;采用PCR技术扩增并克隆SP1基因CDS序列。然后,选取6头健康的中国荷斯坦奶牛,分别取泌乳期和干奶期奶牛乳腺组织,运用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测SP1基因在不同时期奶牛乳腺组织中的表达情况。分离并纯化泌乳期奶牛乳腺上皮细胞,通过SP1过表达及干扰检测其对乳脂合成的影响,分别进行3次独立试验。结果显示,SP1基因序列在不同物种间高度保守,与山羊相似度最高(98.94%)。奶牛SP1基因CDS区序列长2 361 bp,编码786个氨基酸,蛋白分子质量为80 902.17 u,理论等电点为6.94。平均疏水指数为-0.438,为不稳定的亲水性蛋白。SP1序列包含3个锌指结构,SP1蛋白二级结构以无规则卷曲(52.29%)为主。STRING蛋白互作分析结果显示,SP1与转录因子AP-1(JUN)、雌激素受体α(ERα)、MYC原癌基因蛋白(MYC)、TATA盒结合蛋白(TBP)等蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,SP1的mRNA和蛋白在泌乳期的表达量显著高于干奶期(P<0.01)。在奶牛乳腺上皮细胞中过表达SP1显著增加细胞甘油三酯的合成(P<0.01),而干扰SP1的表达,甘油三酯合成显著降低(P<0.01)。以上结果提示,SP1正向调控乳脂合成,分析SP1基因结构和功能为深入研究SP1对泌乳奶牛乳脂合成调控机制提供理论依据。 展开更多
关键词 中国荷斯坦奶牛 SP1基因 基因克隆 生物信息学 表达模式
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高分子量透明质酸抑制横纹肌肉瘤细胞迁移的初步研究
4
作者 苏静艳 郑景贤 +1 位作者 赵亚浩 佟慧丽 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期57-64,共8页
横纹肌肉瘤是一种常见软组织肉瘤,具有恶性程度高,易转移,治疗困难等特点,严重威胁健康。采用细胞划痕试验证明高分子量透明质酸可抑制人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)迁移。进一步采用荧光定量RT-PCR检测不同透明质酸受体表达,结果表明... 横纹肌肉瘤是一种常见软组织肉瘤,具有恶性程度高,易转移,治疗困难等特点,严重威胁健康。采用细胞划痕试验证明高分子量透明质酸可抑制人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)迁移。进一步采用荧光定量RT-PCR检测不同透明质酸受体表达,结果表明,RD细胞中CD44具有较高表达水平,且高分子量透明质酸处理可下调CD44表达。Western blot检测结果显示高分子量透明质酸可下调CD44及细胞迁移相关蛋白Cdc42和Arp2/3表达。免疫荧光超高分辨显微镜观察结果显示,CD44表达显著下调同时,RD细胞中细胞质膜边缘丝状和分枝状微丝发生解聚,表明高分子量可能通过抑制伪足形成而抑制RD细胞迁移和运动,从而为横纹肌肉瘤疾病治疗提供新思路。 展开更多
关键词 高分子量透明质酸 横纹肌肉瘤 RD细胞 细胞迁移 CD44
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AGPAT6在奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成中的功能研究
5
作者 林叶 刘灿 +4 位作者 江怡 宫晓庆 刘川萍 杨洋 侯晓明 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期41-48,共8页
溶血磷脂酸酰基转移酶(Sn-1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 6,AGPAT6)是脂类物质合成代谢相关酶,但其在奶牛乳脂合成中调节作用尚不明确。研究采用荧光定量PCR、Western blot等方法检测奶牛泌乳循环过程中乳腺组织中AGPAT... 溶血磷脂酸酰基转移酶(Sn-1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 6,AGPAT6)是脂类物质合成代谢相关酶,但其在奶牛乳脂合成中调节作用尚不明确。研究采用荧光定量PCR、Western blot等方法检测奶牛泌乳循环过程中乳腺组织中AGPAT6表达变化、奶牛乳腺上皮细胞中AGPAT6对乳脂合成影响以及相关信号通路分子表达变化。结果表明,AGPAT6 mRNA和蛋白质表达在泌乳期奶牛乳腺组织中极显著高于青春期和干奶期(P<0.01)。在具有乳脂合成能力的奶牛乳腺上皮细胞中,AGPAT6基因过表达极显著提高细胞中TAG含量,AGPAT6基因干扰获得相反结果。AGPAT6过表达可激活PI3K-AKT-mTOR信号通路,添加PI3K抑制剂会抑制AGPAT6诱导PI3K-AKT-mTOR信号通路激活及细胞中TAG合成(P<0.01)。以上结果显示AGPAT6表达与泌乳奶牛乳脂合成呈正相关,AGPAT6通过激活PI3K-AKT-mTOR信号通路促进奶牛乳腺上皮细胞中乳脂合成。 展开更多
关键词 奶牛 乳脂 AGPAT6 PI3K-AKT-mTOR
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