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定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
1
作者
邱枫
曾杰
+3 位作者
李坤
陈爱君
徐万祥
倪崖
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2015年第2期154-157,共4页
目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性。方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用...
目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性。方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等。结果:CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体最适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,最佳封闭液为1%BSA-PBST,抗原与包被抗体最佳反应时间60 min,底物显色最佳时间15 min。批内、批间变异系数分别为2.16%~9.23%和2.29%~11.71%,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,最低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962。结论:成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。
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关键词
CFTR蛋白
CFTR多克隆抗体
生物素-亲和素ELISA
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职称材料
题名
定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
1
作者
邱枫
曾杰
李坤
陈爱君
徐万祥
倪崖
机构
温州医科大学检验医学院生命科学学院
浙江省医学科学院生殖医学
研究
中心
上海
计划生育
研究所
国家
人口
和
计划生育
避孕药物
重点
实验室
出处
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2015年第2期154-157,共4页
基金
浙江省重点科技创新团队项目(2012R10048-07)
浙江省科技计划项目(2011C23046
+1 种基金
2013C31066
2012F10004)
文摘
目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性。方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等。结果:CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体最适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,最佳封闭液为1%BSA-PBST,抗原与包被抗体最佳反应时间60 min,底物显色最佳时间15 min。批内、批间变异系数分别为2.16%~9.23%和2.29%~11.71%,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,最低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962。结论:成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。
关键词
CFTR蛋白
CFTR多克隆抗体
生物素-亲和素ELISA
Keywords
CFTR protein
anti-CFTR polyelonal serum
biotin-avidin ELISA
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
邱枫
曾杰
李坤
陈爱君
徐万祥
倪崖
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2015
0
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