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卵巢癌浸润淋巴细胞的生物学特性研究 被引量:2
1
作者 童善庆 王建华 +6 位作者 李彪如 丁健青 胡宝瑜 朱佑明 陆德源 华祖德 陆静 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期131-134,共4页
目的 :研究卵巢癌浸润淋巴细胞 (TIL)在体外扩增后生物学特性 ,评估TIL用于晚期卵巢癌治疗的前景。方法 :利用流式细胞仪分析TIL的细胞表型 ,使用分子生物学和免疫学方法研究TIL分泌细胞因子的能力和杀伤肿瘤细胞的活性。结果 :TIL细胞... 目的 :研究卵巢癌浸润淋巴细胞 (TIL)在体外扩增后生物学特性 ,评估TIL用于晚期卵巢癌治疗的前景。方法 :利用流式细胞仪分析TIL的细胞表型 ,使用分子生物学和免疫学方法研究TIL分泌细胞因子的能力和杀伤肿瘤细胞的活性。结果 :TIL细胞表型的差异可能与肿瘤的种类、性质、取材部位有关 ,结缔组织、基质中来源的TIL以CD3+ CD4+ 为主 ,肿瘤组织和小血管周围以CD3+ CD8+ 为主 ,体外IL 2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响。经rIL 2扩增后 ,TIL分泌产生IL 2、TNF α、IFN γ等多种细胞因子能力及杀伤肿瘤细胞的活性均有明显提高。再加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度 ) ,TIL细胞因子表达可进一步增强。TIL联合磷酰胺或IL 2治疗晚期卵巢癌患者 ,可显著改善患者外周血细胞表型 ,具有一定的疗效。结论 :TIL在体外经rIL 2扩增后 ,免疫活性有明显提高。体内肿瘤细胞的消退可能主要并不是通过输入的TIL直接杀伤肿瘤细胞 ,而是在很大程度上依靠其分泌多种细胞因子增强了机体细胞免疫活性和免疫调节能力。TIL辅助其它疗法可成为晚期卵巢癌患者的一种有效治疗手段。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 淋巴细胞 肿瘤浸润 TIL
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肺炎衣原体呼吸道感染的临床探讨 被引量:1
2
作者 毛海英 曹兰芳 +4 位作者 于清 陆斌杰 夏敏 顾梯成 王利民 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期24-25,共2页
本文采用PCR方法对1995年6~9月的74例住院患儿进行肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae strain TWAR,简称TWAR)检测,结果显示TWAR阳性10例,阳性率13.51%,其中9例为肺炎患儿,1例为Still病合并上呼吸道感染。10例临床均有发热、咳嗽。9例... 本文采用PCR方法对1995年6~9月的74例住院患儿进行肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae strain TWAR,简称TWAR)检测,结果显示TWAR阳性10例,阳性率13.51%,其中9例为肺炎患儿,1例为Still病合并上呼吸道感染。10例临床均有发热、咳嗽。9例患儿均用红霉素治疗,1例安美汀治疗,预后佳,而同期对照组37例正常儿童TWAR检测均显示阴性。提示:TWAR是儿童呼吸道感染的重要病原体之一。 展开更多
关键词 呼吸道感染 肺炎衣原体 病原体 儿童
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用RT-PCR方法检测烧伤愈合时生长因子的表达 被引量:17
3
作者 赵涵芳 程枫 章有章 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1995年第S1期37-42,共6页
作者采用RT-PCR方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子TGF-α,TGF-β1及PDGF表达量的变化。实验特点有二:1.烧伤愈合时渗出液细胞总RNA用(AGPC)一步法提取;2.逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系... 作者采用RT-PCR方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子TGF-α,TGF-β1及PDGF表达量的变化。实验特点有二:1.烧伤愈合时渗出液细胞总RNA用(AGPC)一步法提取;2.逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系里进行PCR反应,有助于准确检测生长因子基因表达量变化。 展开更多
关键词 RNA提取 RT-PCR 生长因子基因表达 烧伤愈合
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用多聚酶链反应诊断弓形虫病 被引量:14
4
作者 夏爱娣 王克敏 +6 位作者 董泰忠 张惠民 吴兆平 陈诗书 杨惠珍 徐克继 钱宗立 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期171-175,共5页
根据本实验室筛选出的弓形虫(ZS_2株)特异DNA克隆片段的部分顺序分析的数据,设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立多聚酶链反应诊断弓形虫病的方法。不同来源的弓形虫株和7例畸形胎儿DNA经体外基因扩增,扩增产物经电泳检测,均出现特异... 根据本实验室筛选出的弓形虫(ZS_2株)特异DNA克隆片段的部分顺序分析的数据,设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立多聚酶链反应诊断弓形虫病的方法。不同来源的弓形虫株和7例畸形胎儿DNA经体外基因扩增,扩增产物经电泳检测,均出现特异的扩增条带。对42例肝炎综合症的婴儿和33例不良生育史的孕妇的外周血白细胞DNA检测,分别为6例和4例阳性。50例正常人外周血白细胞DNA检测均为阴性。对扩增产物进行Southern印迹分析,以^(32)P标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针,能与阳性病例特异的扩增条带杂交,而不与阴性样品的扩增产物杂交。本法并与其它检测方法的结果相比较,具高度特异、敏感且快速的优点。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 DNA诊断 弓形体病
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可溶性VEGF受体基因sflt-1与反义VEGF核苷酸对新生血管形成的影响 被引量:10
5
作者 糜军 王建华 陈诗书 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期464-468,共5页
背景与目的:肿瘤组织中新生血管提供的大量营养物质和生长因子是肿瘤快速生长的关键,因此如何抑制肿瘤组织中新生血管的形成、促使肿瘤组织坏死也是肿瘤治疗中的一条值得探讨的途径。本文拟研究和观察可溶性血管内皮细胞生长因子(vascul... 背景与目的:肿瘤组织中新生血管提供的大量营养物质和生长因子是肿瘤快速生长的关键,因此如何抑制肿瘤组织中新生血管的形成、促使肿瘤组织坏死也是肿瘤治疗中的一条值得探讨的途径。本文拟研究和观察可溶性血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)受体基因sflt-1与反义VEGF对新生血管形成的影响。方法:用Ad-反义VEGF感染肝癌细胞株MM45T.Li后,观察反义VEGF对MM45T.Li分泌VEGF的影响;将人工重组的3'ΔFlt-1蛋白(C末端缺失的Flt-1蛋白)加入条件培养液中,观察3'ΔFlt-1对VEGF刺激的脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheliumcell,HUVEC)增殖的影响;并将Ad-反义VEGF、Ad-sflt-1注射于鸡胚尿囊绒毛膜中,观察sflt-1、反义VEGF对鸡胚新生血管形成的影响。结果:反义VEGF重组腺病毒感染MM45T.Li细胞后,细胞培养上清中VEGF浓度仅为对照组中VEGF浓度的15%(P<0.01);在含有3'ΔFlt-1蛋白的调价培养液中,HUVEC的增殖明显减慢,在一定的范围内与剂量呈负相关;两者都能有效地抑制鸡胚新生血管的形成。结论:sflt-1与反义VEGF均能有效抑制新生血管的形成,两者联合能增强抑制效果,但其作用机制不同。 展开更多
关键词 可溶性血管内皮细胞生长因子受体 反义血管内皮细胞生长因子受体 抑血管生成 鸡胚分析模型 肿瘤组织坏死 肿瘤治疗 新生血管形成
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荧光差异显示PCR克隆参与胃腺癌转移的基因wcl1 被引量:6
6
作者 王建华 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期134-138,共5页
使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发... 使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发现在转移灶CRL 186 3细胞中有 38个基因被显著上调 ,7个基因被显著下调 ,包括未被发现的基因 3个 .利用生物信息学技术对其中 1个在RF 4 8中高度上调的wcl1进行克隆和鉴定 ,发现wcl1的cDNA全长为 6 6 4bp ,含有 1个 2 4 0bp的完整阅读框 .用RT PCR和Northern印迹证实 ,结果与克隆拼接的大小完全一致 (NCBI数据库收录号AF36 4 86 3) .wcl1编码肽位于胞浆内含 79个氨基酸 ,理论上的pI Mr:5 2 8 896 1 72 .氨基酸序列分析发现 ,其N端 4~ 5 5氨基酸处为未知功能区UPF0 0 16蛋白 ,5 7~ 78处有一段亮氨酸拉链结构域 ,未发现与已知的蛋白质有高度的同源性 .该基因定位于 11q14.组织分布表明 ,wcl1除在分化差的胃腺癌中的表达要高于相应的正常胃组织 ,在微血管内皮中表达也明显高于乳腺管癌、脑纤维状星形细胞瘤 ,未检测到在其它组织有分布 .研究提示 ,Wcl1可能为胃腺癌转移过程中参与核内基因转录的相关蛋白质 . 展开更多
关键词 荧光差异显示PCR 克隆 胃腺癌转移 wcl1 转移相关基因
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RNA聚合酶Ⅲ启动子的结构与功能 被引量:7
7
作者 糜军 汤宇澄 陈诗书 《生命的化学》 CAS CSCD 2000年第2期80-81,共2页
关键词 RNA聚合酶Ⅲ 启动子 结构 功能
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慢性荨麻疹患者的类胰蛋白酶测定 被引量:3
8
作者 沈志鸿 吴伊旋 +2 位作者 陆平 毛维翰 许以平 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第5期453-454,共2页
目的研究类胰蛋白酶与慢性荨麻疹发病的关系。 方法采用PharmaciaUnicap - 10 0系统酶免疫荧光检测仪 ,分别对 2 5例慢性荨麻疹患者和 2 9例正常人作类胰蛋白酶检测。 结果慢性荨麻疹患者组类胰蛋白酶阳性率为 72 .0 % ,正常对照组阳... 目的研究类胰蛋白酶与慢性荨麻疹发病的关系。 方法采用PharmaciaUnicap - 10 0系统酶免疫荧光检测仪 ,分别对 2 5例慢性荨麻疹患者和 2 9例正常人作类胰蛋白酶检测。 结果慢性荨麻疹患者组类胰蛋白酶阳性率为 72 .0 % ,正常对照组阳性率为 10 .3% ,两组比较有明显差异 (P <0 .0 1)。 结论类胰蛋白酶可作为慢性荨麻疹发病过程中肥大细胞激活的一个标示物 。 展开更多
关键词 类胰蛋白酶 慢性荨麻疹 肥大细胞 测定
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细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系 被引量:5
9
作者 王建华 于丽莉 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期137-143,共7页
从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印... 从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1~ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 展开更多
关键词 细胞周期 周期蛋白 E2基因 基因过表达 胃腺癌细胞 细胞迁徒 基因芯片 相关性
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腺病毒介导的反义VEGF与可溶性VEGF受体联合对实验性MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响 被引量:4
10
作者 糜军 陈诗书 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第8期794-800,共7页
目的:构建并观察含反义VEGF、sflt1、sflt1联合反义VEGF及lacZ的重组腺病毒对MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响。方法:通过RTPCR从胚胎小鼠中克隆可溶性VEGF受体基因sflt1,并比较sflt1与3′末端缺失可溶性VEGF受体基因3′Δflt1在COS7... 目的:构建并观察含反义VEGF、sflt1、sflt1联合反义VEGF及lacZ的重组腺病毒对MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响。方法:通过RTPCR从胚胎小鼠中克隆可溶性VEGF受体基因sflt1,并比较sflt1与3′末端缺失可溶性VEGF受体基因3′Δflt1在COS7细胞中的表达效率;将含反义VEGF的重组腺病毒和含lacZ报告基因的重组腺病毒分别感染MM45T.Li细胞株,观察反义VEGF体外抑制VEGF分泌的作用;采用CAM实验模型,观察含目的基因的重组腺病毒对鸡胚血管形成的影响;分别将含不同目的基因的重组腺病毒进行瘤内直接注射,每周体外测量肿块大小,7周后处死小鼠,观察有无转移,并对肿瘤组织冰冻切片后进行VEGF、可溶性VEGF受体(sflt1)表达及新生血管形成的免疫组织化学分析;余下的小鼠共观察13周,记录小鼠死亡时间,计算生存函数。结果:含反义VEGF的重组腺病毒感染MM45T.Li细胞后,能明显减少VEGF的分泌P<0.01;鸡胚注射Adsflt1、AdantisenseVEGF及Adsflt1/antisenseVEGF后,其血管的分布较注射AdlacZ组明显减少,甚至造成死胚;经sflt1、反义VEGF治疗的荷瘤小鼠肿瘤生长速度较对照组明显减慢(P<0.01),肿瘤体积明显变小(P<0.01),肿瘤转移率减少(P<0.05),13周生存率明显延长(P<0.01);而且反义VEGF与sflt1联合具有正叠加效应。 展开更多
关键词 反义VEGF 肿瘤转移 可溶性VEGF受体 腺病毒 基因治疗
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血管内皮细胞生长因子受体结构与功能分析 被引量:3
11
作者 糜军 钱书兵 陈诗书 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 2000年第4期193-197,共5页
血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)是VEGF特异性的受体,属于酪氨酸激酶亚家庭中的一个新成员,具有特征性的胞外区和酪氨酸激酶区,因其在刺激血管内皮细胞增殖、促进新生血管生成,特别是在促进肿瘤生长及转移中的作用,已越来越成为人们研... 血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)是VEGF特异性的受体,属于酪氨酸激酶亚家庭中的一个新成员,具有特征性的胞外区和酪氨酸激酶区,因其在刺激血管内皮细胞增殖、促进新生血管生成,特别是在促进肿瘤生长及转移中的作用,已越来越成为人们研究的热点。本文概括了3种VEGF受体在体内的不同分布,分析了不同VEGF受体在碱基序列及蛋白质功能结构域的异同,并介绍了可溶性VEGF受体功能差异,以及在肿瘤及与血管生成有关等疾病上的应用。 展开更多
关键词 受体 酪氨酸激酶 肿瘤 治疗 VEGF受体 结构 功能
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中国正常人及类风湿关节炎病人MHC-Ⅱ类DR_4亚型基因核苷酸序列初步分析 被引量:2
12
作者 朱乃硕 王亚新 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第2期92-97,共6页
对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.04... 对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.0406),中国人这三种亚型第二个外显子核苷酸序列与白种人一致。序列分析结果为进一步应用常规PCR-SSO法及PCR-RFLP法进行中国人DR_4基因定型提供了依据。此外,还将序列分析结果与PCR-SSO杂交分析结果进行了比较,具备较全面的覆盖各亚型多态性区域的探针可以减少等位基因同源性干扰。 展开更多
关键词 DR 基因 DNA 类风湿性 关节炎
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基因修饰肿瘤疫苗研究进展 被引量:1
13
作者 孙欲晓 陈诗书 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第1期60-62,共3页
近年来基因修饰肿瘤疫苗包括MHC分子、共刺激信号B7分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗,在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展,本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源MHC、B7分子,使宿主免疫系统能有... 近年来基因修饰肿瘤疫苗包括MHC分子、共刺激信号B7分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗,在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展,本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源MHC、B7分子,使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤;表达某些细胞因子(如IL-2、IL-4、GM-CSF、TNF-α等)能诱导产生CTL,而某些细胞因子则激发非T细胞的杀伤作用(如IL-4、G-CSF诱导中性粒细胞的炎症反应,IL-2诱导NK细胞的杀伤作用,IL-4、IL-7、IFN-γ等诱导肿瘤局部Mφ的浸润)。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 MHC 修饰 肿瘤疫苗
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T细胞受体与白血病 被引量:2
14
作者 仇一华 陈诗书 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1989年第3期172-176,共5页
T、B淋巴细胞是人体特异性免疫反应中,两类主要的效应细胞,B细胞通过其表面的免疫球蛋白(Ig)对抗原的识别,发挥体液免疫作用,而T细胞则通过T细胞受体(TCR)对呈现在细胞表面的外来抗原进行识别,介导细胞免疫反应。本文着重介绍和分析白... T、B淋巴细胞是人体特异性免疫反应中,两类主要的效应细胞,B细胞通过其表面的免疫球蛋白(Ig)对抗原的识别,发挥体液免疫作用,而T细胞则通过T细胞受体(TCR)对呈现在细胞表面的外来抗原进行识别,介导细胞免疫反应。本文着重介绍和分析白血病细胞中TCR基因的重排与表达的情况。 展开更多
关键词 T细胞受体 白血病 体液免疫
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凋亡蛋白:特异性触发肿瘤细胞死亡的蛋白质 被引量:1
15
作者 王建华 陈诗书 《生命的化学》 CAS CSCD 2000年第4期159-161,共3页
关键词 调亡蛋白 鸡贫血病毒 肿瘤基因治疗
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Prepro-neurturin基因的克隆及其在COS-7中的表达 被引量:1
16
作者 孙秀 糜军 +1 位作者 陈生弟 陈诗书 《中国神经科学杂志》 CSCD 2001年第4期358-361,共4页
Neurturin (NTN)是对多巴胺能神经元有营养、支持和保护作用的神经营养因子 ,是帕金森病治疗的潜在有效因子。本研究用RT PCR方法获取prepro neurturincDNA ,并克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中 ,经酶切及测序鉴定正确 ;再将prepro neurt... Neurturin (NTN)是对多巴胺能神经元有营养、支持和保护作用的神经营养因子 ,是帕金森病治疗的潜在有效因子。本研究用RT PCR方法获取prepro neurturincDNA ,并克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中 ,经酶切及测序鉴定正确 ;再将prepro neurturin基因克隆至 pcDNA3真核表达载体中 ,经Lipofectamine转染 ,在COS 7细胞中瞬间表达 ,经NorthernBlot和WesternBlot印迹分析 ,鉴定其mRNA和蛋白表达正确。用表达NTN的条件培养基处理原代培养胚胎中脑神经元 ,发现其有促进神经元存活和发育功能。 展开更多
关键词 Prepro-neurturin 多巴胺能神经元 帕金森病 COS-7 基因克隆
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人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定 被引量:1
17
作者 王建华 陈诗书 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期502-504,共3页
关键词 胃腺癌 基因表达 克隆 鉴定 FDD 胃肿瘤
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可溶性MHC四聚体分子的构建及应用 被引量:1
18
作者 钱丽 钱关祥 《生命的化学》 CAS CSCD 2001年第5期363-365,共3页
关键词 MHC 特异性T细胞 可溶性四聚体分子
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生长因子与医学的关系
19
作者 章有章 《福建医学院学报》 1996年第1期99-102,共4页
生长因子与医学的关系章有章生长因子(growthfactor)是近几十年来陆续发现的一类生物活性物质。早在50年代,意大利生物化学家RitaLevi-Montalcini在进行小鼠肉瘤植入鸡胚胎的实验时,发现了第一个... 生长因子与医学的关系章有章生长因子(growthfactor)是近几十年来陆续发现的一类生物活性物质。早在50年代,意大利生物化学家RitaLevi-Montalcini在进行小鼠肉瘤植入鸡胚胎的实验时,发现了第一个生长因子,即神经生长因子(nerv... 展开更多
关键词 生长因子 医学 疾病 治疗 临床应用
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直接基因分型HSV的PCR检测及其在眼科的初步应用
20
作者 徐文波 陈诗书 +4 位作者 王正祥 周志红 李春萍 郑一仁 陈彬福 《眼科学报》 1993年第4期163-166,共4页
本文应用直接基因分型单纯疤疹病毒(HSV)的聚合酶链反应(PCR)方法,分析了37例临床上可疑HSK病人角膜刮片和/或泪液标本测定.结果表明PCR检测HSV是快速、较简便的方法.用于眼科关键是取好标本.
关键词 聚合酶链反应 基因 分型 单纯疱疹病毒 眼病
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