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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达
被引量：
11
1
作者
杨湘越
孙树汉
+2 位作者
陈蕊雯
郭瀛军
颜宏利
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第3期31-33,67,共4页
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克...
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。
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关键词
cC1cDNA
克隆表达
巴斯德毕赤酵母
囊虫病
猪囊尾蚴
下载PDF
职称材料
含三联密码AAA的Kozak类似序列特异性增强口蹄疫DNA疫苗的免疫效果
被引量：
1
2
作者
张秀伟
郭瀛军
+7 位作者
王开宇
黄力
杨勇军
张术
陈祖欢
王凯慧
杨康鹃
孙树汉
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第10期915-919,共5页
目的引入6种不同的Kozak类似序列制备口蹄疫DNA疫苗,比较分析Kozak类似序列中不同碱基组成对口蹄疫DNA疫苗表达水平及免疫效果的影响作用。方法在口蹄疫DNA疫苗抗原编码基因VP1起始位点引入Kozak通用序列及所设计的5种Kozak类似序列(KZ1...
目的引入6种不同的Kozak类似序列制备口蹄疫DNA疫苗,比较分析Kozak类似序列中不同碱基组成对口蹄疫DNA疫苗表达水平及免疫效果的影响作用。方法在口蹄疫DNA疫苗抗原编码基因VP1起始位点引入Kozak通用序列及所设计的5种Kozak类似序列(KZ1-KZ6),插入真核表达载体pVAX1,制备口蹄疫DNA疫苗,对6～8周龄BALB/c小鼠进行免疫,用间接ELISA分析实验动物外周血VP1的抗体滴度；同时插入带有绿色荧光蛋白的融合表达载体pEGFP-N1构建6种体外表达质粒,转染HeLa细胞,进行瞬时表达并分析体外表达水平。结果引入含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的疫苗质粒pKV6接种动物后产生的免疫抗体滴度高于其他组；相应的体外表达质粒pKG6转染HeLa细胞后体外表达水平亦高于其他组。结论含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的口蹄疫DNA疫苗,能特异性地增强口蹄疫DNA疫苗的表达水平及免疫效果。
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关键词
三联密码AAA
Kozak类似序列
口蹄疫
DNA疫苗
表达水平
免疫效果
原文传递
题名
猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达
被引量：
11
1
作者
杨湘越
孙树汉
陈蕊雯
郭瀛军
颜宏利
机构
上海第二军医大学
基础医学
部
医学
遗传学
教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第3期31-33,67,共4页
基金
国家 8 63计划资助项目 (10 1-0 6-0 5 0 4)
文摘
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。
关键词
cC1cDNA
克隆表达
巴斯德毕赤酵母
囊虫病
猪囊尾蚴
Keywords
cC1cDNA
Cloning and expression
Pichia pastoris
分类号
R383.34 [医药卫生—医学寄生虫学]
R532.330.3 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
含三联密码AAA的Kozak类似序列特异性增强口蹄疫DNA疫苗的免疫效果
被引量：
1
2
作者
张秀伟
郭瀛军
王开宇
黄力
杨勇军
张术
陈祖欢
王凯慧
杨康鹃
孙树汉
机构
上海第二军医大学
基础医学
部
医学
遗传学
教研室
吉林省延边
大学
医院
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第10期915-919,共5页
文摘
目的引入6种不同的Kozak类似序列制备口蹄疫DNA疫苗,比较分析Kozak类似序列中不同碱基组成对口蹄疫DNA疫苗表达水平及免疫效果的影响作用。方法在口蹄疫DNA疫苗抗原编码基因VP1起始位点引入Kozak通用序列及所设计的5种Kozak类似序列(KZ1-KZ6),插入真核表达载体pVAX1,制备口蹄疫DNA疫苗,对6～8周龄BALB/c小鼠进行免疫,用间接ELISA分析实验动物外周血VP1的抗体滴度；同时插入带有绿色荧光蛋白的融合表达载体pEGFP-N1构建6种体外表达质粒,转染HeLa细胞,进行瞬时表达并分析体外表达水平。结果引入含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的疫苗质粒pKV6接种动物后产生的免疫抗体滴度高于其他组；相应的体外表达质粒pKG6转染HeLa细胞后体外表达水平亦高于其他组。结论含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的口蹄疫DNA疫苗,能特异性地增强口蹄疫DNA疫苗的表达水平及免疫效果。
关键词
三联密码AAA
Kozak类似序列
口蹄疫
DNA疫苗
表达水平
免疫效果
Keywords
Triple codon AAA
Kozak similar sequences
Foot-and-Mouth disease
DNA vaccine
Expression quantity
Immunological effect
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达
杨湘越
孙树汉
陈蕊雯
郭瀛军
颜宏利
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002
11
下载PDF
职称材料
2
含三联密码AAA的Kozak类似序列特异性增强口蹄疫DNA疫苗的免疫效果
张秀伟
郭瀛军
王开宇
黄力
杨勇军
张术
陈祖欢
王凯慧
杨康鹃
孙树汉
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
原文传递
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