人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用 被引量：6

1

作者 王雪亮 刘芬 +3 位作者 蒋玲丽 鲍芸 肖艳群 王华梁 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第1期56-59,共4页

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均... 目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 核酸检测 质控品 室间质量评价

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制备流感疫苗的细胞基质研究进展 被引量：4

2

作者 周琳婷 李贝贝 +1 位作者 吴金妍 陈则 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第5期227-231,共5页

考虑到鸡胚生产流感疫苗的局限性,研究者们开始关注细胞培养疫苗生产技术.此文主要介绍了几种常用的细胞基质（如Vero、PER.C6、Madin-Darby狗肾细胞和其他动物细胞）,阐述了利用细胞培养技术制备流感疫苗的方法及研究进展.相关研究显... 考虑到鸡胚生产流感疫苗的局限性,研究者们开始关注细胞培养疫苗生产技术.此文主要介绍了几种常用的细胞基质（如Vero、PER.C6、Madin-Darby狗肾细胞和其他动物细胞）,阐述了利用细胞培养技术制备流感疫苗的方法及研究进展.相关研究显示细胞基质生产的流感疫苗与鸡胚生产的流感疫苗相比,效果相似或者更好. 展开更多

关键词 流感疫苗 细胞培养技术 VERO细胞 PER.C6细胞 MDCK细胞

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环介导等温扩增技术快速检测沙眼衣原体 被引量：4

3

作者 王雪亮 刘芬 +4 位作者 蒋玲丽 鲍芸 杨依绡 肖艳群 王华梁 《检验医学》 CAS 2017年第9期809-812,共4页

目的建立一种新的简单、快速检测沙眼衣原体(CT)的环介导等温扩增(LAMP)技术。方法采用Primer Explorer V4软件,针对CT隐蔽性质粒基因保守区域设计4重引物(2重内游引物,2重外游引物),并对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价其敏感性... 目的建立一种新的简单、快速检测沙眼衣原体(CT)的环介导等温扩增(LAMP)技术。方法采用Primer Explorer V4软件,针对CT隐蔽性质粒基因保守区域设计4重引物(2重内游引物,2重外游引物),并对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价其敏感性和特异性,将其与实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对临床样本的检测结果进行比较。结果建立的LAMP技术特异性高,与其他常见菌株检测无交叉反应;敏感性高(100拷贝/μL)。用建立的LAMP技术与实时荧光定量PCR对90例临床样本进行检测,检测结果为阳性40例、阴性50例,二者符合率为100%。结论成功建立了检测CT隐蔽性质粒基因的LAMP技术,为CT的快速检测提供了新的手段。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 核酸检测 沙眼衣原体

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铝佐剂及其在流感疫苗中的应用 被引量：1

4

作者 刘玉斌 毛树宝 +4 位作者 周锋 吴金妍 许文婷 王石磊 陈则 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第4期187-190,共4页

佐剂是许多人用疫苗的重要组成部分。疫苗中加入佐剂不仅能增强抗原的免疫原性，节省疫苗用量，还能扩大疫苗诱导免疫应答的范围，诱导交叉保护。铝佐剂是经典的人用流感疫苗佐剂，能提高抗原特异性抗体滴度，诱导强的体液免疫应答。此... 佐剂是许多人用疫苗的重要组成部分。疫苗中加入佐剂不仅能增强抗原的免疫原性，节省疫苗用量，还能扩大疫苗诱导免疫应答的范围，诱导交叉保护。铝佐剂是经典的人用流感疫苗佐剂，能提高抗原特异性抗体滴度，诱导强的体液免疫应答。此文就流感疫苗中应用的铝佐剂的性质、作用机制、在流感疫苗中的应用研究进行总结和分析，并对佐剂研究的进一步发展提出见解。 展开更多

关键词 流感疫苗 铝化合物 佐剂 免疫

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肠道病毒71型全病毒灭活疫苗临床研究进展 被引量：2

5

作者 林惠娟 王一平 +2 位作者 毛群颖 周旭 梁争论 《国际生物制品学杂志》 CAS 2015年第1期22-26,共5页

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起严重手足口病的主要病原体,研发安全有效的疫苗是控制手足口病的关键措施.目前我国（香港、澳门和台湾地区除外）已有3家公司完成了EV71全病毒灭活疫苗的Ⅲ期临床试验,结果显示疫苗在婴幼儿... 肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起严重手足口病的主要病原体,研发安全有效的疫苗是控制手足口病的关键措施.目前我国（香港、澳门和台湾地区除外）已有3家公司完成了EV71全病毒灭活疫苗的Ⅲ期临床试验,结果显示疫苗在婴幼儿中安全性良好,预防EV71引起手足口病的保护率达到90％以上,预防EV71其他相关疾病的保护率达到80％以上.此文对这些EV71疫苗临床试验情况做一综述. 展开更多

关键词 肠道病毒属 手足口病 疫苗 灭活 临床试验

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乙型脑炎减毒活疫苗安全性和免疫原性观察

6

作者 吴金妍 徐闻青 +3 位作者 程鹏飞 王琰 储艳 柴文清 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第6期265-268,共4页

目的 观察乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗的接种反应和免疫原性.方法 分别选择52名（8月龄～50岁）和607名（8月龄～12岁）健康志愿者进行Ⅰ和Ⅲ期临床试验.试验组每人接种1次由上海生物制品研究所有限责任公司研制的乙脑减毒活疫苗（0.5 m... 目的 观察乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗的接种反应和免疫原性.方法 分别选择52名（8月龄～50岁）和607名（8月龄～12岁）健康志愿者进行Ⅰ和Ⅲ期临床试验.试验组每人接种1次由上海生物制品研究所有限责任公司研制的乙脑减毒活疫苗（0.5 ml）,对照组接种同样剂量的已上市乙脑减毒活疫苗.两组接种后的不良反应率和中和抗体阳转率用x2检验进行比较,中和抗体几何平均滴度用t检验进行比较.结果 试验组接种后有5.91％的人体温升高,对照组为7.96％,两组的体温反应发生率差异无统计学意义（x^2 =0.917,P=0.338）.试验组Ⅰ期试验局部反应率为1.92％,Ⅲ期试验为0.25％,对照组Ⅲ期试验局部反应率为0.50％,两组的局部反应率差异无统计学意义（确切概率法,P=0.553）.Ⅲ期免疫原性试验中,试验组的血清中和抗体阳转率为89.00％,抗体几何平均滴度为29.69;而对照组分别为74.59％和19.25,差异均有统计学意义（x^2=11.708,P=0.001;t=4.281,P=0.001）.结论 本研究的试验性乙脑减毒活疫苗接种反应轻微,并具有良好的免疫原性. 展开更多

关键词 日本脑炎疫苗 安全性 免疫原性

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孕妇及其他特殊人群戊型肝炎病毒感染的流行现状 被引量：1

7

作者 林惠娟 陈盼 +2 位作者 吴星 周旭 梁争论 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第4期191-194,共4页

戊型肝炎（hepatitisE，HE）是许多发展中国家重要的公共卫生问题，在孕妇及其他特殊人群中HE负担尤为严重。目前唯一上市的HE疫苗是HEV239（Hecolin），仅推荐用于16-65岁的健康人群。流行病调查显示，孕妇、16岁以下儿童及65岁以上老... 戊型肝炎（hepatitisE，HE）是许多发展中国家重要的公共卫生问题，在孕妇及其他特殊人群中HE负担尤为严重。目前唯一上市的HE疫苗是HEV239（Hecolin），仅推荐用于16-65岁的健康人群。流行病调查显示，孕妇、16岁以下儿童及65岁以上老人的HE负担日益加重。戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus，HEV）感染孕妇的高病死率进一步凸显了在HE暴发时保护孕妇人群的必要性。此文综述了HEV在孕妇及其他特殊人群中的流行特征，并讨论了这些高危人群接种HE疫苗的必要性。 展开更多

关键词 肝炎 戊型 孕妇 死亡率 流行病学

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乙型脑炎减毒活疫苗主种子批猴体神经毒力试验

8

作者 吴金妍 徐闻青 程鹏飞 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第5期217-219,共3页

目的 为了解乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗主种子批弱毒株的神经毒力减弱程度,对其进行猴体神经毒力试验,以观察其安全性.方法 对恒河猴脑内和脊髓内同时注射乙脑病毒强毒株SA14或减毒活疫苗主种子批弱毒株SA14-14-2,然后进行为期21 d的... 目的 为了解乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗主种子批弱毒株的神经毒力减弱程度,对其进行猴体神经毒力试验,以观察其安全性.方法 对恒河猴脑内和脊髓内同时注射乙脑病毒强毒株SA14或减毒活疫苗主种子批弱毒株SA14-14-2,然后进行为期21 d的临床体征观察,并进行组织病理学检查.结果 强毒株组动物接种后的临床体征为典型的神经毒性反应,动物发病并死亡.组织病理学检查显示,中枢神经系统严重受损,并有神经细胞坏死.弱毒株组动物仅出现短时发热,组织病理学检查可见轻微炎症反应,未见神经细胞坏死现象.结论 乙脑减毒活疫苗主种子批的神经毒力高度减弱,对恒河猴是安全的. 展开更多

关键词 日本脑炎疫苗 脑炎病毒 日本 毒力 恒河猴

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鼠源戊型肝炎病毒IgG抗体定量检测方法的建立 被引量：1

9

作者 林惠娟 吴星 +4 位作者 高帆 陈盼 郝晓甜 周旭 梁争论 《微生物学免疫学进展》 2016年第4期17-20,共4页

目的制备鼠源戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）抗体定量参考品,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法制备鼠源抗-HEV IgG参考血清MS1,以世界卫生组织人源抗-HEV Ig标准品（NIBSC code：95/584）对其... 目的制备鼠源戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）抗体定量参考品,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法制备鼠源抗-HEV IgG参考血清MS1,以世界卫生组织人源抗-HEV Ig标准品（NIBSC code：95/584）对其进行标定并检测其稳定性;以标定的参考品为标准,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,对线性、范围、重复性、准确度等进行验证,并对戊肝疫苗免疫后小鼠血清进行HEV IgG抗体定量检测。结果制备的MS1血清含量为30.9U/m L（95%CI：±1.1）,CV为4.8%;加速稳定性试验和冻融稳定性试验中,MS1含量CV均〈15%。建立的小鼠抗-HEV IgG抗体定量检测方法在0.01~0.15 U/m L范围内具有良好的线性（r〉0.99）;灵敏度为0.007 U/m L;对高、中、低3份不同含量抗-HEV阳性小鼠血清重复检测3次,CV均〈10%;加样回收率为83.8%~107.7%。戊肝疫苗免疫1 w,3 w,5 w时,小鼠血清HEV IgG抗体均值分别为0.3 U/m L、39.4 U/m L、345.4 U/m L。戊肝疫苗初次免疫小鼠1 w后抗体阳转率为100%,但抗体均处于较低水平;血清抗体水平随着免疫针次的增加而升高（P〈0.05）。结论制备的鼠源HEV IgG抗体定量参考稳定性良好的,建立的小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,具有良好的灵敏度、重复性及准确度,可用于小鼠实验中戊肝疫苗免疫原性的评价。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 抗体 定量 参考品 检测方法

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实时定量PCR技术检测麻疹病毒的感染与增殖

10

作者 徐然 张林亚 +1 位作者 杨文震 朱为 《上海预防医学》 CAS 2021年第2期132-135,共4页

【目的】建立SYBR-Green RT-qPCR实验体系,通过实时定量PCR技术检测麻疹病毒的感染与增殖情况,为实现实时定量PCR检测病毒滴度奠定基础。【方法】以麻疹病毒N基因氨基端的405 bp片段为靶标,构建质粒标准品用于绘制绝对定量标准曲线。应... 【目的】建立SYBR-Green RT-qPCR实验体系,通过实时定量PCR技术检测麻疹病毒的感染与增殖情况,为实现实时定量PCR检测病毒滴度奠定基础。【方法】以麻疹病毒N基因氨基端的405 bp片段为靶标,构建质粒标准品用于绘制绝对定量标准曲线。应用该法进行麻疹病毒增殖曲线的绘制和不同感染复数(MOI)接毒的情况下病毒的增殖情况检测。【结果】使用该体系检测出的已知滴度的麻疹病毒毒种参考品的拷贝数与滴度在6 lgCCID50/mL至2 lgCCID50/mL稀释范围内呈线性关系,两者相关系数r=0.991(P<0.01),呈显著性相关。根据检测出的麻疹病毒增殖曲线分析,麻疹病毒进入细胞后,48 h内主要在胞内进行增殖:在24 h内病毒在细胞内处于静默期,检测不到病毒RNA水平的增殖;24 h后病毒大量复制,进入指数增长阶段;于96 h达到顶点后,胞内病毒的RNA总量进入平台期。分泌到胞外的病毒从48 h开始进入指数增长阶段,于144 h病毒量到达顶点,进入平台期。【结论】已初步建立SYBR-Green RT-qPCR验体系并进行病毒增殖情况的监测,对病毒在细胞内增殖及分泌的情况有了初步的了解,为进一步检测减毒活疫苗病毒滴度提供了实验基础。 展开更多

关键词 实时定量PCR SYBR-Green 麻疹病毒N基因

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以一步离子交换层析法制备人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子混合物的研究

11

作者 是翡 吴晓文 +4 位作者 金晶 李冬梅 吴玮 郭慧 吴腾捷 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第3期134-137,共4页

目的研究一步离子交换层析法制备人凝血因子Ⅷ(factor Ⅷ,FⅧ)/血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)混合物的最适层析条件。方法以含不同浓度氯化钠的缓冲液进行线性梯度洗脱来确定层析缓冲液的最适离子强度和pH值,同时研究上... 目的研究一步离子交换层析法制备人凝血因子Ⅷ(factor Ⅷ,FⅧ)/血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)混合物的最适层析条件。方法以含不同浓度氯化钠的缓冲液进行线性梯度洗脱来确定层析缓冲液的最适离子强度和pH值,同时研究上样体积对该法的影响。结果使用pH7.0的含250 mmol/L氯化钠的洗涤缓冲液和含400 mmol/L氯化钠的洗脱缓冲液进行离子交换层析,所得产物的FⅧ与vWF效价比约为1∶1,FⅧ回收率为76.51%。结论采用一步离子交换层析法制备FⅧ/vWF混合物,可使FⅧ与vWF效价比达到约1∶1。 展开更多

关键词 因子Ⅷ 色谱法 离子交换 血管性血友病因子

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疫苗用氢氧化铝佐剂的研究现状 被引量：8

12

作者 张林焱(综述) 周旭(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第2期213-215,221,共4页

氢氧化铝佐剂是使用最为广泛的疫苗佐剂,在其使用过程中,疫苗抗原表位、缓冲体系及添加剂,在一定程度上会对氢氧化铝吸附疫苗的免疫效果造成影响。对氢氧化铝佐剂实行严格的质量控制,对确保佐剂效果及疫苗质量均具有非常重要的意义。本... 氢氧化铝佐剂是使用最为广泛的疫苗佐剂,在其使用过程中,疫苗抗原表位、缓冲体系及添加剂,在一定程度上会对氢氧化铝吸附疫苗的免疫效果造成影响。对氢氧化铝佐剂实行严格的质量控制,对确保佐剂效果及疫苗质量均具有非常重要的意义。本文主要对氢氧化铝佐剂在疫苗中的应用及研究现状作一综述。 展开更多

关键词 氢氧化铝佐剂 疫苗

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一种国产人凝血因子Ⅷ制剂上市后的安全性观察 被引量：2

13

作者 吴腾捷 孙忠良 +2 位作者 郑炎 何毅明 孙振宇 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第1期24-26,共3页

目的 对上海生物制品研究所有限责任公司（上海公司）采用二次病毒灭活工艺生产的人凝血因子Ⅷ（human coagulation factorⅧ,FⅧ）进行上市后安全性观察和分析.方法 采用双中心、开放、单组设计进行FⅧ上市后安全性观察：符合入选条件... 目的 对上海生物制品研究所有限责任公司（上海公司）采用二次病毒灭活工艺生产的人凝血因子Ⅷ（human coagulation factorⅧ,FⅧ）进行上市后安全性观察和分析.方法 采用双中心、开放、单组设计进行FⅧ上市后安全性观察：符合入选条件的247例血友病A患者接受1次FⅧ输注,以问卷调查的方式收集FⅧ输注后30 min和1个月的不良反应,包括体温变化、过敏反应、输液反应等临床安全性指标.结果 FⅧ输注后30 min,无一患者报告发生过敏和输液反应,仅4例患者（2.26％）报告出现短时37.1～37.5℃的轻度发热.FⅧ输注后1个月,所有患者均未报告有新出现的相关不良反应.结论 上海公司采用二次病毒灭活工艺生产的FⅧ上市产品具有良好的安全性. 展开更多

关键词 因子Ⅷ 血友病A 安全性

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鸡胚细胞的传代培养和麻疹病毒的增殖 被引量：1

14

作者 张林亚 徐然 +2 位作者 周旭 杨文震 朱为 《微生物与感染》 CAS 2022年第2期81-87,共7页

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测... 为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测和基因序列测定。结果显示,原代鸡胚细胞可稳定传代培养至第10代,各代次细胞生长趋势相似;第5代鸡胚细胞染色体检查为正常染色体核型;第8代鸡胚细胞成瘤性检查未见成瘤;采用第3、5代鸡胚细胞制备的麻疹病毒滴度水平高于原代鸡胚细胞,但无显著性差异(n=3,P>0.05),编码病毒核蛋白(nucleoprotein,N)和血凝素蛋白(hemagglutinin,H)的基因序列与S-191株完全一致,未发生变异。本研究证实,原代鸡胚细胞可进行传代培养,各代次鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性不变,产毒水平无显著差异,可用于培养麻疹病毒。 展开更多

关键词 原代鸡胚细胞 传代培养 麻疹减毒

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微孔板酶底物检测尿酸酶活性方法的建立及验证

15

作者 张慧颖 江筠 +5 位作者 张林焱 刘敏 秦荣浦 田石华 林惠娟 何成 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第1期30-34,共5页

目的建立石英微孔板法酶底物检测尿酸酶活性的方法,并对方法进行验证。方法摸索尿酸浓度与吸光度之间的线性关系,找到合适的范围,并验证方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性。尿酸酶加入固定浓度尿酸溶液,酶促反应5... 目的建立石英微孔板法酶底物检测尿酸酶活性的方法,并对方法进行验证。方法摸索尿酸浓度与吸光度之间的线性关系,找到合适的范围,并验证方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性。尿酸酶加入固定浓度尿酸溶液,酶促反应5 min后,通过酶标仪检测A_(292 nm)值变化计算尿酸的含量,根据单位时间内尿酸减少量计算出尿酸酶的活性。结果专属性验证结果显示,空白对照尿酸浓度未检出,25μg/mL尿酸样品的回收率为102.0%,50μg/mL尿酸用等体积的硼酸缓冲液稀释后的样品回收率为103.2%,表明专属性较好。尿酸质量浓度在0~50μg/mL范围内线性关系良好,R^(2)>0.99。该方法重复性验证的RSD为0.6%;中间精密度验证的RSD为1.4%;准确性验证的3个样品回收率分别为101.3%、101.3%、101%,RSD分别为1.1%、1.2%、0.7%;不同温度条件下,耐用性验证的RSD为4.8%。结论本实验建立了微孔板酶底物检测尿酸酶活性的方法,该方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性良好,可用于尿酸酶活性的定量检测。 展开更多

关键词 尿酸酶 尿酸 酶活性检测 石英微孔板 酶标仪

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