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破伤风毒素C片段基因克隆、重组表达及免疫原性研究 被引量：1
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作者 吴文鹃 黄诚 +4 位作者 王家彩 周海涛 饶惠 宋红 李忠明 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期9-11,共3页
应用PCR技术从破伤风梭状芽孢杆菌DNA中扩增出1．4kbDNA基因，将其克隆到pUC18质粒中，经测序证明该DNA片段为破伤风片段C的基因，并将此基因片段亚克隆到pGEX-4T-2,构建成表达质粒pGEX－TC在E．coli中进行表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳... 应用PCR技术从破伤风梭状芽孢杆菌DNA中扩增出1．4kbDNA基因，将其克隆到pUC18质粒中，经测序证明该DNA片段为破伤风片段C的基因，并将此基因片段亚克隆到pGEX-4T-2,构建成表达质粒pGEX－TC在E．coli中进行表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹鉴定，表达产物为76KD的特异性重组蛋白。动物实验显示：1μg重组蛋白免疫动物，可使动物产生1IU／ml的破伤风抗毒素单位，动物血清的抗体滴度可达1：800。 展开更多
关键词 破伤风毒素 片段C 重组表达 免疫原性
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重组干扰素γ的中间试制 被引量：4
2
作者 童葵塘 宋一鸣 +5 位作者 应国光 王光娟 王韦 庄晨杰 侯云德 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期134-139,共6页
用带有表达质粒ｐＢＶ２２０（含有γ干扰素基因）的大肠杆菌ＤＨ５α株进行发酵培养，３批中试的菌产量平均为１４．１克／Ｌ，γ干扰素的表达量平均为１．０２×１０９ＩＵ／Ｌ，收集的菌体经高压匀质破菌后收集包涵体，用７ｍｏ... 用带有表达质粒ｐＢＶ２２０（含有γ干扰素基因）的大肠杆菌ＤＨ５α株进行发酵培养，３批中试的菌产量平均为１４．１克／Ｌ，γ干扰素的表达量平均为１．０２×１０９ＩＵ／Ｌ，收集的菌体经高压匀质破菌后收集包涵体，用７ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍提取干扰素，此过程可去除７８．４％菌体蛋白，而干扰素活性仅损失１０．４１％，粗制干扰素经复性可使干扰素活性提高４０５％，比活也有明显提高，３批平均为１．７６×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白，复性γ干扰素用三步柱层析法进行纯化，其其得率平均为２８．１３％，其比活分别为３．２２、２．７８和３．０１×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白。３批中试的纯化γ干扰素纯度在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定均＞９９％，高效液相层析（ＨＰＬＣ）测定＞９８％，其它检定项目也均合乎规程要求。 展开更多
关键词 重组γ干扰素 中间试制 基因工程
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