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重叠延伸PCR技术及其在基因工程上的应用 被引量：45
1
作者 徐芳 姚泉洪 +3 位作者 熊爱生 彭日荷 侯喜林 曹兵 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期747-750,共4页
重叠延伸PCR技术(genesplicingbyoverlapextensionPCR,简称SOEPCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有... 重叠延伸PCR技术(genesplicingbyoverlapextensionPCR,简称SOEPCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物。重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计。重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。本文综述了重叠延伸PCR的原理和目前的应用情况,并指出了此技术中的注意事项,展望了其应用前景。 展开更多
关键词 重叠延伸PCR 互补引物 基因工程 扩增反应
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果梅随机扩增多态DNA技术的研究 被引量：10
2
作者 高志红 章镇 +1 位作者 盛炳成 姚泉洪 《植物生理学通讯》 CSCD 1999年第3期214-218,共5页
关键词 果梅 随机扩增多态 DNA技术 种质资源
全文增补中
含绿色荧光蛋白及trp3^(iar)基因的草菇表达载体的构建 被引量：7
3
作者 孙晓红 姚泉洪 +1 位作者 陈明杰 潘迎捷 《上海水产大学学报》 CSCD 北大核心 2006年第1期12-16,共5页
分别用限制性内切酶EcoR I和HindIII酶切质粒pBGgHg,将切下的含双孢蘑菇gpd启动子、EGFP基因和35S终止子的碱基序列连接到含Ap抗性的pBSK II上,再将这一段序列切下连接到含kan抗性的pCAMBIA1300载体上,形成中间质粒载体YH2873。用限制... 分别用限制性内切酶EcoR I和HindIII酶切质粒pBGgHg,将切下的含双孢蘑菇gpd启动子、EGFP基因和35S终止子的碱基序列连接到含Ap抗性的pBSK II上,再将这一段序列切下连接到含kan抗性的pCAMBIA1300载体上,形成中间质粒载体YH2873。用限制性内切酶HindIII分别酶切质粒YH2873和质粒pDB06,将从pDB06切下的trp3iar基因连接到中间质粒载体YH2873上,得到表达载体pSAGF。中间载体pYH2873经限制性内切酶EcoR I和HindIII酶切,电泳后显示1.3 kb的目的片断和9 kb的载体片断,表达载体pSAGF经限制性内切酶HindIII酶切,电泳后显示4 kb的trp3iar基因的目的片断和10 kb的载体片断,进一步测序证明重组质粒连接正确,成功构建了草菇的表达载体pSAGF。 展开更多
关键词 草菇 EGFP基因 trp3^iar基因 表达载体
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农杆菌介导法转GMCSF基因玉米研究初报 被引量：1
4
作者 王云翠 邓德祥 +4 位作者 姚泉洪 蒋守华 张勇 王益军 范惠琴 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第5期677-681,共5页
利用农杆菌介导法将GM CSF转化玉米自交系B73、J7- 3及杂交种B73×A188幼胚 ,获得了B73、B73×A188的潮霉素抗性植株 ,经PCR、PCR Southernblotting检测 ,外源基因均已转入玉米基因组中。
关键词 GM-CSF基因 玉米 转基因 农杆菌介导 潮霉素 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 细胞因子多肽药物 基因工程药物
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基因工程产生植物条件型雄性不育的研究进展 被引量：3
5
作者 徐芳 熊爱生 +2 位作者 彭日荷 侯喜林 姚泉洪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期507-510,共4页
条件型雄性不育是指植株在特定的条件下育性相互转换,可以作为两用系,用于两系法杂交制种。文章综述了基因工程产生条件型雄性不育及其相应的恢复策略,并对其存在的问题做了评价,展望了其应用的前景。
关键词 条件型雄性不育 基因工程 植物
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日本脑炎病毒(JEV)prME的克隆及其植物表达载体构建
6
作者 丁淑燕 黄亚红 +4 位作者 钱炳俊 SITI 沈纯良 周根余 张大兵 《上海师范大学学报（自然科学版）》 2005年第3期66-70,共5页
为研究乙脑亚单位口服疫苗,根据Genbank已发表的日本脑炎病毒(JEV)prME基因序列,设计引物,PCR扩增出5,端含有Koza kbox,3,端含有SEKDEL编码区的prME,克隆入pMD18-T载体中,经过序列测定后,用SnaBI和BamHI酶切消化将prME克隆入用EcoICRI和... 为研究乙脑亚单位口服疫苗,根据Genbank已发表的日本脑炎病毒(JEV)prME基因序列,设计引物,PCR扩增出5,端含有Koza kbox,3,端含有SEKDEL编码区的prME,克隆入pMD18-T载体中,经过序列测定后,用SnaBI和BamHI酶切消化将prME克隆入用EcoICRI和BamHI酶切消化的质粒pBI121CaMV35S启动子和NOS终止子之间形成一个表达盒,再用HindⅢ,EcoRI酶切消化将该表达盒克隆入相同酶切的质粒pCAMBIA1301中,获得含有prME的植物双元表达载体. 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 prME基因 植物表达载体
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利用DNA改组技术改造aac C1基因启动子活性的研究 被引量：5
7
作者 沈国妙 姚泉洪 +2 位作者 张铭 彭日荷 熊爱生 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期58-61,共4页
从表达质粒pYPX2 5 1 (GenBank登陆号 :AY1 780 4 6 )中获得aacC1基因启动子 ,采用DNA改组 (DNAshuffling)技术在体外获得突变体。以lacZ作为报告基因 ,筛选获得活性明显改变的启动子。经过验证 ,对其中活性变化明显的 7个启动子用邻硝... 从表达质粒pYPX2 5 1 (GenBank登陆号 :AY1 780 4 6 )中获得aacC1基因启动子 ,采用DNA改组 (DNAshuffling)技术在体外获得突变体。以lacZ作为报告基因 ,筛选获得活性明显改变的启动子。经过验证 ,对其中活性变化明显的 7个启动子用邻硝基苯基 β半乳糖苷 (ONPG)作为底物进行表达活性测定。结果表明 ,获得的强启动子比原来的提高了 3～ 8倍 ,而弱启动子则活性下降明显 ,其中 3个几乎无活性。进一步对这 展开更多
关键词 DNA改组技术 aacC1基因 启动子 突变 活性
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5-氨基乙酰丙酸的生物合成和生理活性及其在农业中的潜在应用 被引量：162
8
作者 汪良驹 姜卫兵 +3 位作者 章镇 姚泉洪 松井弘之 小原均 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2003年第3期185-192,共8页
文章从一种可能作为新的植物生长调节物质的角度 ,阐述了具有多种生理活性的 5 氨基乙酰丙酸 (ALA)的生物合成C5途径与影响因子 ,提出ALA生物合成最重要的是依赖于谷氨酰 tRNA还原酶 (GluTR)编码基因的表达 ,其次依赖于谷氨酸 1 半... 文章从一种可能作为新的植物生长调节物质的角度 ,阐述了具有多种生理活性的 5 氨基乙酰丙酸 (ALA)的生物合成C5途径与影响因子 ,提出ALA生物合成最重要的是依赖于谷氨酰 tRNA还原酶 (GluTR)编码基因的表达 ,其次依赖于谷氨酸 1 半醛转氨酶 (GSA AM )编码基因的表达。在农业生产中 ,它在低浓度时能促进作物增产 ,提高抗逆性 ,在高浓度时作为无毒、无污染的农田除草剂 ,有潜在的应用前景 。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸 生物合成 生理活性 除草剂 抗逆性
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利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数 被引量：41
9
作者 杨立桃 赵志辉 +3 位作者 丁嘉羽 张承妹 贾军伟 张大兵 《中国食品卫生杂志》 2005年第2期140-144,共5页
为分析转基因水稻外源基因拷贝数 ,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因 (GUS和HPT基因 )和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分... 为分析转基因水稻外源基因拷贝数 ,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因 (GUS和HPT基因 )和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了 14株T0 代的转基因水稻植株 ,得到了外源基因插入分别为 1、2、3和 4的转基因植株 ,同时利用SouthernBlot方法进行验证分析。随机选择 18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株 ,用SouthernBlot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数 ,SouthernBlot分析结果显示有 15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的 ,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于SouthernBlot的分析结果 ,主要原因是SouthernBlot方法在同一个插入位点有多拷贝的T -DNA片段插入时 ,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段 ,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生 ,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。 展开更多
关键词 拷贝数 实时荧光定量PCR HPT 方法分析 外源基因 分析结果 DNA片段 转基因水稻 转基因植株 利用
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转基因水稻胚乳中表达铁结合蛋白提高稻米铁含量 被引量：39
10
作者 刘巧泉 姚泉洪 +1 位作者 王红梅 顾铭洪 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期518-524,共7页
为提高我国稻米的铁含量 ,通过农杆菌介导将自行克隆的菜豆 (Phaseoluslimensis)铁结合蛋白 (Ferritin)基因导入了一个高产粳稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)品种中 ,获得 17个独立的转基因水稻株系。分子检测证明 ,外源基因在多数转... 为提高我国稻米的铁含量 ,通过农杆菌介导将自行克隆的菜豆 (Phaseoluslimensis)铁结合蛋白 (Ferritin)基因导入了一个高产粳稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)品种中 ,获得 17个独立的转基因水稻株系。分子检测证明 ,外源基因在多数转基因水稻植株基因组中有 1～ 3个整合位点 ,并可稳定遗传。在水稻种子贮存蛋白谷蛋白基因GluB 1启动子的控制下 ,铁结合蛋白基因可在转基因水稻的种子中高效特异地表达 ,不同转化子中的表达量有明显不同。在转基因水稻种子中表达铁结合蛋白后对提高精米中的铁含量有明显的效果 ,相对于未转化对照最多可提高 6 4 % ,而锌的含量并无明显变化。 展开更多
关键词 铁 转基因水稻 铁结合蛋白 胚乳 营养品质
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植物叶片衰老的分子机制 被引量：33
11
作者 袁政 张大兵 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2002年第4期417-422,共6页
文章就叶片衰老过程中基因表达调控机制的研究进展作了介绍
关键词 衰老相关基因 调节机制 植物 叶片衰老 分子机制
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绿色荧光蛋白及其在植物分子生物学研究中的应用 被引量：24
12
作者 赵华 梁婉琪 +1 位作者 杨永华 张大兵 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2003年第2期171-178,共8页
绿色荧光蛋白 (GFP)是海洋生物水母 (Aequoriavictoria)体内的一种发光蛋白 ,近十年来成为在生物化学和细胞生物学研究和应用中用得最广泛的蛋白质之一。文章就绿色荧光蛋白的特性及其在植物分子生物学中应用的研究进展作了概述。
关键词 绿色荧光蛋白 植物分子生物学 水母 发光特性 生色团 应用 海洋无脊椎动物
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苹果与八棱海棠的试管苗外植体植株再生 被引量：23
13
作者 孙爱君 章镇 +3 位作者 姚泉洪 盛炳成 黄晓敏 范惠琴 《上海农业学报》 CSCD 2000年第2期23-30,共8页
苹果品种 (新乔纳金、嘎拉 )及八棱海棠的试管苗外植体 (叶片、叶柄、节间茎段 ) ,在附加 BA与 NAA的 MS培养基上 ,均能分化不定芽。其中在 BA4 mg/ L+NAA0 .2 mg/ L浓度组合的 MS培养基上 ,嘎拉与八棱海棠叶片的再生频率达到 10 0 %。... 苹果品种 (新乔纳金、嘎拉 )及八棱海棠的试管苗外植体 (叶片、叶柄、节间茎段 ) ,在附加 BA与 NAA的 MS培养基上 ,均能分化不定芽。其中在 BA4 mg/ L+NAA0 .2 mg/ L浓度组合的 MS培养基上 ,嘎拉与八棱海棠叶片的再生频率达到 10 0 %。八棱海棠叶片再生苗在附加 IBA0 .5mg/ L的 1/ 2 展开更多
关键词 苹果 八棱海棠 外植体 植株再生 试管苗
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转拟南芥AtKup1基因高含钾量烟草获得 被引量：22
14
作者 郭兆奎 杨谦 +2 位作者 姚泉洪 万秀清 颜培强 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期24-28,共5页
提取拟南芥幼根总RNA,进行RTPCR逆转录,产物测序,将其构建到含Km(带内含子)筛选标记的植物双元表达载体上,根癌农杆菌介导法将AtKup1基因导入烟草,对转化子进行PCR扩增、GUS染色、Southern杂交和AtKup1基因mRNA荧光定量PCR分析,并进行... 提取拟南芥幼根总RNA,进行RTPCR逆转录,产物测序,将其构建到含Km(带内含子)筛选标记的植物双元表达载体上,根癌农杆菌介导法将AtKup1基因导入烟草,对转化子进行PCR扩增、GUS染色、Southern杂交和AtKup1基因mRNA荧光定量PCR分析,并进行烟叶内在成分化验分析。PCR获得2100bp左右扩增产物,测序结果证实扩增产物序列与拟南芥AtKup1基因(GenbankNo:AF029876)一致;得到GUS染色阳性的AtKup1基因转化烟草材料29株。经PCR扩增、分子杂交检测证实AtKup1基因已整合到转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析可以在幼根中检测到AtKup1基因的mRNA转录。烟叶含钾量化验结果表明导入的AtKup1基因在转化材料中成功表达,使烟叶含钾量提高约45%。 展开更多
关键词 AtKup1基因 转基因烟草 K^+含量
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植物遗传转化的新方法:Floral Dip 被引量：16
15
作者 徐芳 熊爱生 +2 位作者 彭日荷 侯喜林 姚泉洪 《中国蔬菜》 北大核心 2005年第3期29-31,共3页
目前,遗传转化效率低一直制约着许多作物的分子育种和基因功能研究。Floraldip技术已成为模式植物拟南芥遗传转化的主要手段,该方法在十字花科植物中有广阔的应用前景。本文介绍了此种方法的发展过程和技术原理,并对进一步的研究工作提... 目前,遗传转化效率低一直制约着许多作物的分子育种和基因功能研究。Floraldip技术已成为模式植物拟南芥遗传转化的主要手段,该方法在十字花科植物中有广阔的应用前景。本文介绍了此种方法的发展过程和技术原理,并对进一步的研究工作提出了建议。 展开更多
关键词 植物 遗传转化 FLORAL Dip技术 技术原理 农杆菌介导 蘸花法 拟南芥
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应用小孢子和花药培养技术筛选油菜抗菌核病材料 被引量：13
16
作者 黄剑华 陆瑞菊 +3 位作者 周志疆 王亦菲 孙月芳 周润梅 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2001年第3期226-227,共2页
关键词 油菜 抗菌核病材料 小孢子 花药培养
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杂种甜椒的离体快速繁殖(简报) 被引量：14
17
作者 孙月芳 陆瑞菊 黄剑华 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2001年第3期215-216,共2页
甜椒F1子叶柄的不定芽诱导率比子叶尖的高 ;暗培养 5d后转入光照下培养 ,促进不定芽的形成和缩短培养周期 ;6 BA 5 .0mg·L-1与IAA 0 .5mg·L-1组合的不定芽诱导率较高 ;培养基中添加水解酪蛋白和AgNO3 后 ,不定芽诱导率降低 ... 甜椒F1子叶柄的不定芽诱导率比子叶尖的高 ;暗培养 5d后转入光照下培养 ,促进不定芽的形成和缩短培养周期 ;6 BA 5 .0mg·L-1与IAA 0 .5mg·L-1组合的不定芽诱导率较高 ;培养基中添加水解酪蛋白和AgNO3 后 ,不定芽诱导率降低 ;增殖培养基中添加 15 展开更多
关键词 杂种甜椒 快速繁殖 不定芽 椰汁 培养基
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应用等密度梯度离心法提纯传染性支气管炎病毒 被引量：10
18
作者 陈丽君 王英 +4 位作者 胡建华 王建荣 康尧 王阿凤 赵建华 《上海农业学报》 CSCD 1998年第3期93-95,共3页
采用分段取样，测OD260，及电镜观察等方法，对用等密度梯度离心法提纯的传染性支气管炎病毒粒子在蔗糖溶液中的病毒富集带和纤突丢失程度进行了分析和总结。提出梯度离心后30％～50％区带蔗糖溶液为较理想的取样位置。
关键词 传染性 支气管炎病毒 等密度梯度离心 电镜观察
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通过农杆菌介导将番茄铁转运蛋白基因导入八棱海棠(英文) 被引量：11
19
作者 渠慎春 黄晓得 +4 位作者 章镇 姚泉洪 陶建敏 乔玉山 张君毅 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期235-240,共6页
用农杆菌介导法,成功地将番茄铁转运蛋白基因导入了苹果砧木八棱海棠。获得了19个卡那霉素抗性株系,其中有11个株系经PCR鉴定为阳性。Southern杂交结果显示:有9个转基因株系基因组中整合了完整的目的基因。选择其中含有单拷贝和3个拷贝... 用农杆菌介导法,成功地将番茄铁转运蛋白基因导入了苹果砧木八棱海棠。获得了19个卡那霉素抗性株系,其中有11个株系经PCR鉴定为阳性。Southern杂交结果显示:有9个转基因株系基因组中整合了完整的目的基因。选择其中含有单拷贝和3个拷贝目的基因的各一个株系进行水培试验,结果表明整合了单拷贝目的基因的转基因株系表现出较强的抗缺铁胁迫能力,5周后其植株的鲜重比对照高21%￣34%。 展开更多
关键词 八棱海棠 农杆菌 番茄铁转运基因 遗传转化
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超低温保存植物种质资源的新途径——小滴玻璃化法 被引量：14
20
作者 吴昀 张琳 +1 位作者 林田 夏宜平 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期511-517,共7页
超低温保存是一种安全、有效的种质资源保存途径,可长期保存种质资源。小滴玻璃化法是在滴冻法和玻璃化法上基础上发展起来的用于植物种质资源保存的新技术。本文综述了该方法的技术概念、主要优点、基本程序、应用前景及国内外研究现状。
关键词 小滴玻璃化法 超低温保存 种质资源
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