细胞周期、限制点、关卡 被引量：7

1

作者 申宗候 付晓颖 曹世龙 《生命科学》 CSCD 1999年第A01期31-33,共3页

关键词 DNA损伤 细胞周期 限制点 关卡 肿瘤治疗

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外源性p16基因对wtp53型人肺腺癌细胞生长的影响 被引量：5

2

作者 付晓颖 张颂文 +3 位作者 冉瑞琼 申宗候 顾建新 曹世龙 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期102-104,共3页

目的探讨ｐ１６基因对人肺腺癌的作用及ｐ１６基因治疗肺腺癌的可能性。方法运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体，以电穿孔法将ｐ１６基因导入到该基因缺失的ｗｔｐ５３型的人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞中，得到稳定表达... 目的探讨ｐ１６基因对人肺腺癌的作用及ｐ１６基因治疗肺腺癌的可能性。方法运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体，以电穿孔法将ｐ１６基因导入到该基因缺失的ｗｔｐ５３型的人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞中，得到稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞。详细研究ｐ１６基因对ｗｔｐ５３型人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用。结果导入ｐ１６基因能使人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞生长速度较对照细胞明显减慢，细胞周期阻滞在Ｇ１期，克隆形成率下降，致瘤性减少。 展开更多

关键词 P16基因 基因治疗 肺腺癌 癌细胞生长

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p16基因重组质粒的构建及其对人肺癌细胞的抑制作用 被引量：5

3

作者 付晓颖 曹世龙 +4 位作者 冉瑞琼 邵东敏 张颂文 申宗候 顾建新 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第1期9-12,共4页

人p16基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因.p16蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子,在恶性肿瘤发生发展中起重要作用.为了进一步探讨p16基因的抗肿瘤特性,我们通过运用分子克隆技术构建重组人p16基因表达载体(pcDNA3-p16),并通过电穿孔方法... 人p16基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因.p16蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子,在恶性肿瘤发生发展中起重要作用.为了进一步探讨p16基因的抗肿瘤特性,我们通过运用分子克隆技术构建重组人p16基因表达载体(pcDNA3-p16),并通过电穿孔方法将p16基因导入到人肺腺癌NCI-H460细胞中,经G418筛选获得可稳定表达p16的人肺腺癌细胞,观察p16基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用.结果表明,导入p16基因能使人肺腺癌细胞生长速度较对照细胞明显减慢,克隆形成率下降,细胞周期G1阻滞.结果证明人p16基因能抑制人肺腺癌细胞的生长.本研究为人肺腺癌p16实验性基因治疗提供了实验依据,说明基于恢复p16肿瘤抑制基因功能的基因治疗在治疗人肺腺癌方面有广阔的应用前景. 展开更多

关键词 P16基因 基因治疗 肺肿瘤 质粒

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汉防己甲素对肾病综合征大鼠肾小球细胞外基质的作用 被引量：41

4

作者 董兴刚 安增梅 +5 位作者 杨海春 周江华 殷祥雷 刘旭东 顾建新 徐树人 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期115-117,共3页

目的探讨中药汉防已甲素（Tetrandrine）对单侧肾切除加两次注射阿霉素肾病综合征大鼠肾小球细胞外基质（ECM）的作用。方法将实验动物分为：（1）正常对照组。（2）汉防己甲素治疗组、（3）氨氯地平治疗对照组和（4）模型组，于第12周... 目的探讨中药汉防已甲素（Tetrandrine）对单侧肾切除加两次注射阿霉素肾病综合征大鼠肾小球细胞外基质（ECM）的作用。方法将实验动物分为：（1）正常对照组。（2）汉防己甲素治疗组、（3）氨氯地平治疗对照组和（4）模型组，于第12周留取尿标本，肾组织病理学检查和图像分析肾小球细胞外基质变化，计算ECM／肾小球面积（GA）。结果汉防已甲素治疗组和氨氯地平组肾小球ECM均明显减少（ECM／GA为0.24±0.02、0.29±0.01比（4）组0.39±0.02）（P＜0.05）、球囊粘连减轻。结论汉防己甲素能减少肾病综合证大鼠肾小球ECM沉积，延缓肾小球硬化。 展开更多

关键词 肾病综合征 汉防己甲素 肾小球细胞 药物疗法

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反义转化生长因子β1基因转染大鼠肾系膜细胞及其对纤溶酶原激活物抑制剂1和基质金属蛋白酶家族表达的影响 被引量：12

5

作者 林文生 张农 +2 位作者 张颂文 顾建新 郭慕依 《中华病理学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第4期284-287,共4页

目的　通过对大鼠肾小球系膜细胞 (MsC)转染反义转化生长因子 β1(TGF β1)基因 ,观察该细胞克隆基质金属蛋白酶家族 (MMPs)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)表达的改变。方法　采用脂质体进行基因转染 ,并用Westernblot法加以鉴定 ,后... 目的　通过对大鼠肾小球系膜细胞 (MsC)转染反义转化生长因子 β1(TGF β1)基因 ,观察该细胞克隆基质金属蛋白酶家族 (MMPs)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)表达的改变。方法　采用脂质体进行基因转染 ,并用Westernblot法加以鉴定 ,后分别应用Northernblot、Westernblot和酶谱分析法检测该细胞克隆MMPs和PAI 1表达的变化。结果　成功地建立低表达TGF β1的大鼠MsC克隆 (MAT1) ;该细胞MMP 2mRNA及蛋白表达增强 ,MMP 2 ,3 ,7酶活性也均获得提高 ,而PAI 1mRNA的表达则受到抑制。结论　从分子水平阻断MsCTGF β1的表达 ,大鼠肾小球系膜细胞MMPs表达增强和PAI 1表达降低。 展开更多

关键词 肾小球膜 TGF-β1 MMPS PAI-1 大鼠

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TNF-α/Vp16系统对胶质瘤基因治疗的实验研究 被引量：2

6

作者 张荣 周良辅 +3 位作者 周范民 王晨 王宇倩 顾建新 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2000年第2期92-96,共5页

目的在体外水平（invitro）建立对胶质瘤有杀伤作用的TNF－α基因／Vp16系统，研究该系统的有效性及可行性。方法用逆转录病毒载体将TNF－α基因转染人胶质瘤细胞株SHG－44，经生长抑制试验，比较转TNF－α基因前后SHG－44细胞对Vp16的... 目的在体外水平（invitro）建立对胶质瘤有杀伤作用的TNF－α基因／Vp16系统，研究该系统的有效性及可行性。方法用逆转录病毒载体将TNF－α基因转染人胶质瘤细胞株SHG－44，经生长抑制试验，比较转TNF－α基因前后SHG－44细胞对Vp16的敏感性。结果生长抑制试验表明，转染TNF－α基因后的SHG－44细胞对Vp16的敏感性是转基因前细胞的10倍（P＜0．01），IC50为0．8μg／ml；TNF－α基因／Vp16系统对胶质瘤的杀伤作用优于TNF－α细胞因子与Vp16的联合应用（P＜0．05），并具有良好的旁观者效应。结论在invitro水平，转TNF－α基因SHG-44细胞对Vp16的敏感性大大增加，小剂量Vp16即可达到杀伤肿瘤细胞的作用，表明TNF－α基因/Vp16系统可成为细胞因子基因联合化学药物治疗胶质瘤的有效方法。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 基因治疗 TNF-Α基因 VP16 脑肿瘤

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PAI-1在TGFβ_1基因和反义TGFβ_1基因转染人肝癌细胞株中的表达 被引量：1

7

作者 林文生 张农 +2 位作者 张颂文 顾建新 郭慕依 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期221-223,共3页

目的 :通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因及反义TGF β1基因 ,观察该细胞PAI 1表达的变化。方法 :采用电穿孔法进行基因转染 ,并用Westernblot、Northernblot法加以鉴定后 ,分别应用Westernblot及Northernblot观察该细胞... 目的 :通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因及反义TGF β1基因 ,观察该细胞PAI 1表达的变化。方法 :采用电穿孔法进行基因转染 ,并用Westernblot、Northernblot法加以鉴定后 ,分别应用Westernblot及Northernblot观察该细胞表达PAI 1mRNA的变化。结果 :过表达的TGF β1细胞克隆PAI 1mRNA表达均高于对照组 ,而低表达TGF β1者PAI 1mRNA表达低于对照组。结论 :TGF β1可能通过上调肝癌细胞PAI 1的表达 ,在肝癌浸润和转移过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 肝肿瘤 TGF-β1 PAI-1 基因转染 肿瘤侵润

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全反式维甲酸可增强大鼠系膜细胞基质金属蛋白酶-2表达 被引量：1

8

作者 林文生 张农 +2 位作者 张颂文 顾建新 郭慕依 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期456-457,共2页

关键词 全反式维甲酸 系膜细胞 MMP-2 mRNA 肾小球

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TNF-α基因与依托泊甙联合诱导胶质瘤凋亡的实验研究

9

作者 张荣 周良辅 +3 位作者 周范民 王晨 王宇倩 顾建新 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期29-31,共3页

目的在体外水平（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）建立对胶质瘤杀伤作用的 ＴＮＦ－α基因／ＶＰ１６系统，研究该系统诱导胶质瘤凋亡的作用。方法用逆转录病毒载体将ＴＮＦ－α基因转染人胶质瘤细胞株ＳＨＧ－４４，经生长抑制试验，比较转ＴＮＦ－... 目的在体外水平（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）建立对胶质瘤杀伤作用的 ＴＮＦ－α基因／ＶＰ１６系统，研究该系统诱导胶质瘤凋亡的作用。方法用逆转录病毒载体将ＴＮＦ－α基因转染人胶质瘤细胞株ＳＨＧ－４４，经生长抑制试验，比较转ＴＮＦ－α基因前后 ＳＨＧ－４４细胞对依托泊甙（Ｅｔｉｏｐｏｓｉｄｅ， ＶＰ１６）的敏感性，并通过形态学及流式细胞仪检测 ＶＰ１６诱导转基因细胞凋亡的情况。结果生长抑制试验表明，转染ＴＮＦ－α基因后的ＳＨＣ－４４细胞对ｙＰ１６的敏感性是转基因前细胞的１０倍（Ｐ＜０．０１），ＩＣ５０为０．８μｇ／ｍＬ。流式细胞检测表明，ＶＰ１６对转ＴＮＦ－α基因细胞有较强的诱导凋亡的能力。结论ＶＰ１６对转ＴＮＦ－α基因ＳＨＧ－４４细胞诱导凋亡的能力大大增加，表明ＴＮＦ－α基因／ＶＰ１６系统对胶质瘤的基因治疗有效。 展开更多

关键词 胶质瘤 基因治疗 TNF-Α基因 依托泊甙 凋亡

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细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响 被引量：1

10

作者 江松敏 吴国强 顾建新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期97-102,共6页

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ），结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１，４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６... 用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ），结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１，４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化，发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰，为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ），此时细胞处在分裂间期，其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ，ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时，发现其活性发生了较明显的变化，ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大，升高到对照的１．３２倍；而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大，升高到对照的２．１５倍． 展开更多

关键词 半乳糖基转移酶 细胞诱导分化剂

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在大鼠诱发肝癌中β1，4半乳糖基转移酶的高效液相层析测定

11

作者 江松敏 李溪冰 +1 位作者 邵东敏 顾建新 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第4期261-265,共5页

研究大鼠诱发肝癌与β１，４半乳糖基转移酶（β１，４ＧＴ）的相关性。用高效液相层析（ＨＰＬＣ）纯化了荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－２Ｇｎ－ＰＡ），用β１，４ＧＴ... 研究大鼠诱发肝癌与β１，４半乳糖基转移酶（β１，４ＧＴ）的相关性。用高效液相层析（ＨＰＬＣ）纯化了荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－２Ｇｎ－ＰＡ），用β１，４ＧＴ的荧光标记受体底物的ＨＰＬＣ测定方法测定了大鼠诱发肝癌中肝组织的酶活性，发现随着诱癌周数的增加，肝脏酶活性逐渐增高，在第１４周癌前期时酶活性达到最高，以后有所回落，但仍保持在高于对照组的水平。同时我们也发现，在胎鼠（孕２０ｄ）及出生第一天中酶活性与癌前期相似，说明在肝组织增生期此酶非常活跃。 展开更多

关键词 肝肿瘤 半乳糖基转移酶 高效液相色谱

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以酵母双杂交系统筛选与N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ相互作用的蛋白质

12

作者 蒋能群 郭本恒 +2 位作者 张颂文 张惟杰 顾建新 《乳业科学与技术》 2002年第1期1-6,共6页

用N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ(GNTⅢ)作诱饵,以酵母双杂交系统从胎肝cDNA文库中筛选到一种能与N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ发生相互作用的蛋白质。与GNTⅢ作用的是早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),是属于视黄酸受体家庭的一种转录因子... 用N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ(GNTⅢ)作诱饵,以酵母双杂交系统从胎肝cDNA文库中筛选到一种能与N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ发生相互作用的蛋白质。与GNTⅢ作用的是早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),是属于视黄酸受体家庭的一种转录因子。根据这个结果和已有的一些背景理论知识,本文提出了一种新的相互作用假设模型:PLZF是GNTⅢ的底物之一。这种相互作用是已知蛋白间的未知相互作用。 展开更多

关键词 酵母双杂交系统 筛选 蛋白质 N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅲ 相互作用

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在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究

13

作者 江松敏 李溪冰 +1 位作者 邵东敏 顾建新 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第2期195-199,共5页

用HPLC纯化了荧光标记的底物（Gnβ1-2Ma1-6（Gnβ1-2Mα1-3）Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA）用β-1，4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法，测定了在发育过程中大鼠肝，肾，脑中的酶活性的变化，结果表明，（1）在正常成年大鼠中，各... 用HPLC纯化了荧光标记的底物（Gnβ1-2Ma1-6（Gnβ1-2Mα1-3）Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA）用β-1，4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法，测定了在发育过程中大鼠肝，肾，脑中的酶活性的变化，结果表明，（1）在正常成年大鼠中，各组织酶活性具有组织特异性，（2）不同的发育期，其酶活性不同。胎鼠（孕20d，以下同）时最高，以后就渐渐下降，各组织酶活力变化幅度是不一致的，这些变化的生理意义有待子进一步研究． 展开更多

关键词 半乳糖基转移酶 发育 酶活性 组织分布

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含有HA或myc基因的融合表达载体构建及应用研究

14

作者 王琪 方向东 +2 位作者 陈淳 顾建新 戚正武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期175-178,共4页

目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合... 目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合表达载体。结果将两种候选蛋白的编码序列分别克隆于上述融合载体,转染Cos7细胞后的表达产物,可利用抗HA或myc的mAb进行Westernblot和免疫共沉淀。结论利用上述系统,可验证两种候选蛋白在哺乳动物细胞中是否具有相互作用。 展开更多

关键词 融合表达载体 哺乳动物细胞 免疫共沉淀 MYC基因 HA基因 载体构建

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